Методическая статья

Измеряя экспрессии генов в бомбардировке ячменя Aleurone слои с повышенной пропускной способностью

6.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56728

⸱

30 марта 2018 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, Colby College

В этой статье

Краткое содержание

Улучшенная протокол представлен для измерения экспрессии генов переходных от репортера конструкции в клетках aleurone ячменя после бомбардировки частиц. Сочетание автоматизированных зерна, шлифовальные с 96-луночных пластины фермента анализов обеспечивает высокую пропускную способность для процедуры.

Аннотация

Aleurone слой зерна ячменя является важной моделью системы для выражения гена гормона регулируется в растениях. В aleurone клетках гены, необходимые для прорастания или раннего развития сеянцев активируются гиббереллин (GA), в то время как гены, связанные с стрессом ответы активируются абсцизовой кислоты (ABA). Механизмы GA и ABA сигнализации могут быть допрошены путем введения Репортер ген конструкции в aleurone клетки через бомбардировка частиц, с результатом переходных измеряется с помощью фермента анализов. Улучшенная протокол сообщается, что частично автоматизирует и оптимизирует шаг гомогенизации зерна и assays энзима, позволяя значительно более высокую пропускную способность, чем существующие методы. Гомогенизация пробы зерна осуществляется с использованием автоматизированных ткани гомогенизатор, и GUS (β-глюкуронидазы) анализов осуществляется с помощью системы 96-луночных пластины. Представитель результаты, с использованием протокола показывают, что активность фосфолипазы D могут играть важную роль в активации HVA1 экспрессии генов, ABA, через фактор транскрипции TaABF1.

Введение

Слой aleurone ячмень является система устоявшихся моделей для изучения выражения гена гормона регулируется в растения1. В частности ряд генов, необходимых для прорастания или раннего развития сеянцев активируются гиббереллин (GA), в то время как гены, связанные с стрессом ответы активируются абсцизовой кислоты (ABA). ГА и ABA, сигнальные пути взаимосвязаны, как выражение некоторых генов, GA-активированный тормозится Аба и наоборот1.

Ценный стратегия для понимания, что роль конкретного участников в GA/Аба сигнализации был введение эффекторных гена конструкции через бомбардировка частиц, следуют переходных выражение репортер конструкций, которые позволяют результирующий эффект на вниз по течению ген выражение определяется. Использование репортер генов как гусь (β-глюкуронидазы) или Люцифераза позволяет чувствительной и количественного измерения экспрессии генов специально внутри клетки, которые получили эффекторных конструкции. Например введение конструкцией эффекторных кодирования фактор транскрипции TaABF15,6 установлено, что Аба индуцированной генов, например HVA1 индуцированных TaABF1, а GA-индуцированной генов, например Amy32b подвергаются репрессиям. Бомбардировка частиц как экспериментальная стратегия использовала несколько лабораториями для изучения различных аспектов GA/Аба сигнализации. Такая работа привела к выявлению промоутер элементов, важных для активации GA-индуцированной2 и ABA-индуцированной генов3и к открытию киназы протеина4 и транскрипции факторы5 , которые регулируют экспрессии этих генов.

В существующие протоколы2,3,4,5,6 бомбардировка частиц и последующее измерение переходных гена выражения являются довольно трудоемким, как каждый набор бомбардировке едва зерна гомогенизированные вручную в ступку и пестик и фермента анализов осуществляется индивидуально. Эта рукопись сообщает улучшение протокол, который частично автоматизирует и оптимизирует этапа гомогенизации и GUS assays позволяют значительно более высокую пропускную способность, позволяя большее количество процедур для проверки в том же эксперимент, и/или включение более репликация для каждого лечения получить более статистически надежные результаты. Представитель результаты представлены для выражения HVA1 и Amy32b конструкций репортер, регулируется фактор транскрипции TaABF1, а также GA, Аба и других регуляторных молекул.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка эффекторных и Репортер ген конструкции

  1. Построить эффекторных конструкции, которые используют учредительный промоутер (например кукурузы убиквитин, UBI) диск выражение от желаемого открытым чтение фрейма. Например Постройте плазмида, содержащие UBI::TaABF1 диск сильное выражение учредительного TaABF15.
  2. Постройте репортер конструкции, которые включают промоутер, чья деятельность будет оцениваться, размещенных вышестоящего кадра открытом чтения, такие как ГАС. Например Постройте плазмида, содержащие HVA1::GUS для измерения выражение из HVA1 промоутер2,5.
  3. Построить конструкцией внутреннего контроля (например UBI::Люцифераза).
  4. С помощью столбца привязки кремнезема протокола (см. Таблицу материалы), подготовить плазмида высокого качества для каждого из требуемых гена конструкций. С помощью ультрафиолетовой спектроскопии (см. Таблицу материалы), тщательно измерить концентрацию каждого плазмида подготовки.

2. Подготовка зерна ячменя для бомбардировки

  1. Настройка таблицы (см. рис. 1 в качестве примера) указанием плазмиды, которые будут подвергаться обстрелу, соответствующие гормональная терапия и другую соответствующую информацию для каждого лечения, который будет частью эксперимента.
  2. С помощью разделочную доску и стерильные лезвия бритвы, отрезать эмбрионов из зерна ячменя Гималаев (40 для каждого лечения, включены в эксперимент). Исключите зерна, которые бесцветные или существенно меньше, чем в среднем.
  3. Поместите все embryoless зерна в 50 мл трубки. Добавьте 10 минут 40 мл воды и рок.
  4. Вылейте воду осторожно (чтобы избежать потери зерна) и добавить 40 мл 10% хлорной извести. Рок на 20 минут.
  5. Вылейте на отбеливатель и добавьте 40 мл стерильной воды. Рок на 5 минут. Повторите это мыть стерильную воду еще четыре раза.
  6. Добавить 40 мл раствора, впитывая (сукцинат натрия 20 мм, 20 мм кальция хлорид, рН 5,0) и 40 мкл хлорамфеникол Стоковый раствор (10 мг/мл).
  7. Перевести большую часть впитывая решения (хлорамфеникол) из трубки в вермикулитовые плиты (см. Таблицу материалы). Затем перенесите зерна на поверхность влажной фильтровальной бумаги в вермикулитовые плиты. Равномерно из зерна. Налейте достаточно привитие решение сохранить зерна частично (но не полностью) погруженной. Поместите крышку на вершине вермикулитовые плиты.
  8. Инкубируйте embryoless зерна при 24 ° C около 48 ч с флуоресцентным освещением. При необходимости добавьте дополнительные впитывая решение.
  9. Открыть пластиковые Петри 90 мм и налейте 20 мл раствора, впитывая в блюдо сам и 20 мл Перевернутый крышкой. Добавьте 20 мкл Хлорамфеникол (10 мг/мл) в каждый. Стерилизуйте две пары щипцов тонкой точке путем погружения их в спирте.
  10. Поместите несколько embryoless зерна в крышке Петри. С помощью щипцов, аккуратно удалите (прозрачный) семян пальто из каждого зерна. При удалении семян пальто с гладкой стороны зерна, не повредить основные клетки (aleurone). Очищенные зерна передать Петри, содержащие впитывая решение.
  11. После пилинга семян пальто из всех зерен, вернуть их на вермикулитовые плиты. Инкубируйте очищенные embryoless зерна при 24 ° C 16-20 часов.
  12. Непосредственно перед использованием зерна для бомбардировки, удалите поверхностная влага, встряхивая их между фильтр документов в чашке Петри.

3. Подготовка плазмидной ДНК для бомбардировки

  1. Ярлык 1,5 мл трубки для каждого лечения, которые будут включены в эксперимент бомбардировки. В каждую пробирку добавить 2,5 мкг UBI::Люцифераза внутреннего контроля плазмида, 2,5 мкг плазмида репортер ГАС , и необходимое количество эффекторных плазмида (обычно 0,025 мкг до 2,5 мкг). Добавьте воду, довести объем до 5 мкл.
  2. Подготовить 1,6 мкм золото microcarriers (см. Таблицу материалы) ниже опубликованы протоколы6.
  3. Для каждого обращения 50 мкл взвешенных microcarriers в 1,5 мл, содержащих плазмида ДНК. По словам производителя протоколы6пальто microcarriers с плазмидной ДНК.
  4. На последнем шаге когда покрытием плазмида microcarriers подвешены в 48 µL 100% этанола, накапайте 8 мкл условно microcarriers на каждый из пяти macrocarriers и позволяют воздух сухой.

4. частица бомбардировки Embryoless Ячмень зерно

  1. Настройка аппарата бомбардировка частиц (см. Таблицу материалы)6.
  2. Поместите диск разрыв 1550 psi в крышку сохраняя и смонтировать его на инструменте.
  3. Место macrocarrier, содержащий сочетание желаемого плазмида (вместе с остановки экрана) в сборку запуска microcarrier. Вставьте Ассамблея в верхний слот камеры бомбардировки. Задайте расстояние между разрывной мембраной, сохраняя крышки и крышки Крышка macrocarrier на стандартном расстоянии (6 мм) и место остановки экрана поддержки (стандарт) средней позиции, позволяя macrocarrier расстояние 11 мм (рис. 2A).
  4. Организовать 8 embryoless зерна в жесткой радиальному шаблону (с тоньше концами, направленными внутрь) на кружок фильтровальной бумаги, тесьмой вниз плоской крышкой Петри 90 мм (см. рис. 2B).
  5. Поместите блюдо с зерна в камеру бомбардировки, на расстоянии 6 см от остановки экрана.
  6. Эвакуировать зале бомбардировки в 95 кПа и затем бомбардируют образца.
  7. После выпуска вакуум, передачи обстреляли зерна на чашку Петри помечены 60 мм, содержащий 4 мл впитывая раствора, содержащего 1 мг/мл левомицетина.
  8. Повторяйте, пока не будут завершены все бомбардировки. Инкубируйте (на платформе тряску при 100 об/мин) при 24 ° C для 24 часов.

5. Добыча растворимого белка из обстреляли зерна

  1. С помощью щипцов, удалите 8 обстреляли зерна из Петри 60 мм и промокните их сухой на бумажное полотенце. Разделить зерна на две трубки помечены 2.0 мл (4 зерен в трубку) каждый из которых содержит 800 мкл шлифовальные буфер (100 мм Na фосфаты pH 7.2, 5 мм DTT, 10 мкг/мл leupeptin, 20% глицерина) и бисера 5 мм из нержавеющей стали. Повторите этот процесс для всех обстреляли зерна.
  2. Место (до 48) 2.0 мл трубки в двух стоек шарик гомогенизатора (см. Таблицу материалы). Закрепите стойки на гомогенизатор.
  3. Встряхните образцы на 30 Гц за 3 минуты.
  4. Удаление гомогенизатор стойки из гомогенизатор и разместить их на льду (5 мин) для повторного охлаждения образцов.
  5. Закрепите стойки обратно на гомогенизатор - в противоположной ориентации. Погрозит образцы снова 30 Hz 3 минуты.
  6. Прохладный стойки на льду, повторите шаги 5.3-5.5. Это будет добавить до в общей сложности 12 минут тряски.
  7. Центрифуга экстракты зерна на 16000 x g при 4 ° C на 10 минут.
  8. Сразу же после центрифугирования, сцеживаться ясно supernatants в второй набор microcentrifuge трубок. Дайте каждой трубы быстро вихря. Храните трубы на льду.
  9. После передачи супернатанта, восстановить стального корда от гранул, так они можно стирать и использовать повторно.

6. измерение активности Люцифераза из экстрактов зерна

  1. Для каждой трубы экстракт зерна, чтобы быть assayed, подготовить 12 мм x 75 мм стеклянные пробирки содержащие 200 мкл смеси Assay Люцифераза (45 мм трис сульфат рН 7,7, 15 мм MgCl2, 20 мм DTT, 1,5 мм ЭДТА, 1 мм люциферин, АТФ 1 мм).
  2. Добавьте 100 мкл первый экстракт зерна в первый пробирного трубки. Вихрь быстро, чтобы перемешать. Немедленно положите трубку в Трубодержатель Люминометр и закройте дверцу. По окончании измерения удалите трубки из Люминометр – оставив дверь открытой для размещения следующего трубки.
  3. Повторите этот процесс до тех пор, пока все образцы были измерены.

7. измерение активности ГАС от зерна экстракты

  1. Добавьте 200 мкл ГАС Assay Buffer (50 мм Na фосфат рН 7,2, 2,5 мм 4-methylumbelliferyl - D-глюкуронида, 10 мм DTT, 2 мм ЭДТА, 10 мкг/мл leupeptin, 20% метанола, азид натрия 0,02%) в каждой скважине 96 хорошо плиты.
  2. Место 50 мкл каждого зерна экстракт в соответствующий хорошо. Смешайте с наконечником, после добавления. Печать верхней с пленки для запайки.
  3. Инкубируйте 20 часов 96 хорошо пластины при 37 ° C в темноте.
  4. Центрифуга 96 хорошо пластины на 4000 x g при 4 ° C на 10 минут и поместите его на льду.
  5. Добавьте 250 мкл 0,2 М Na2CO3 в каждой скважине черный 96 хорошо плиты.
  6. Добавить 6,25 мкл каждого центрифугировали смеси assay ГАС в соответствующий хорошо (содержащие 0,2 М Na2CO3) черный 96 хорошо пластины. Смешайте с наконечником, после добавления. Включать скважин с 6.25 мкл 10 мкм, 40 мкм и 100 мкм 4-methylumbelliferone в качестве стандартов.
  7. Место пластину черного в тарелку флуориметр и читать флуоресценции methylumbelliferone. Возьмите чтений на длине волны возбуждения 360 Нм и длина волны излучения 460 Нм. Настроить усиление документа таким образом, что хорошо содержащие 6,25 мкл 40 мкм 4-methylumbelliferone и 250 мкл 0,2 М Na2CO3 дает чтение флуоресценции 1000 единиц.

8. анализ данных

  1. Введите значения для Люцифераза и GUS анализов в электронную таблицу. Исключите из рассмотрения любого образца с чтением Люцифераза ниже, чем 20 000 относительной люминесценции единиц s-1, как это показывает, что ген конструкции не были успешно доставлено в aleurone клетки.
  2. Для каждого успешно обстреляли зерна экстракт (выступавший от имени группы четырех embryoless зерен), вычисления нормализованных ГАС выражение из необработанных данных ЦСУ и Люцифераза следующим: нормированный гусь = [(GUS выражение - GUS пустой) x (2 000 000)] / (Люцифераза выражение-Люцифераза пустым).
    Примечание: Это нормализует количество ГАС активности на то, что бы было отмечено в бомбардировки, которая дала Люцифераза чтение 2,000,000.
  3. Доклад относительный уровень экспрессии конструкции конкретного репортер присутствии эффекторных конструкции или гормонального лечения проходит проверку сравнения на уровень экспрессии в отсутствие эффекторов или гормонов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Метод, описанный здесь может использоваться для вилочное любой ген тест в aleurone клетки зерна ячменя. Уровень экспрессии гена теста может быть удобно измерять (рис. 2). Выше пропускная способность протокола, описанные здесь значительно увеличивает эффективность измельчения семян и фермента проба шагов. Этот метод был использован для оценки способности транскрипционным фактором TaABF15,6 для того что...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Введение гена эффекторных конструкции через бомбардировка частиц, следуют переходных выражение репортер конструкций является ценным стратегия для рассечения роль конкретных участников в GA/Аба сигнализации и в результате гена гормона регулируется выражение.
Однако существующие протоколы для проведения таких экспериментов в ячменя aleurone клетки2,3,4,5,6 , ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Авторы благодарят за помощь в проведении экспериментов, Джуди камень для консультации по зерна гомогенизации и Линн Ханнум для консультации по флюометрия Грейсон Батлер и Маргарет Барретт. Эта работа была поддержана Национальный научный фонд (IOB 0443676), путем институционального развития Award (IDeA) от национального института Генеральной медицинских наук национальных институтов здоровья под номер гранта P20GM0103423 и гранты Отдел Colby Колледж естественных наук.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
GeneElute HP plasmid Maxiprep kitSigmaNA0310-1KT
УФ-видимый спектрофотометрNanodropND-1000
Гималайские зерна ячменя//Разнообразие голозерного ячменя (хранить в темноте при 4&�; C)
сукцинат натрияSigmaS2378Реагент для приема раствора
хлорида кальция (дигидрат)FisherC79-500Реагент для приема раствора
дляприготовления/20 мМ сукцинат натрия, 20 мМ хлорид кальция, pH 5,0. Перед использованием стерилизовать путем автоклавирования.
хлорамфениколSigmaC0378Приготовьте стоковый раствор 10 мг/мл в 70% этаноле.
ВермикулитФишераNC0430369Используется для вермикулитовых пластин.
Круги из фильтровальной бумаги (90 мм)Ватман1001 090Используется для вермикулита и для предварительной бомбардировки зерна
Вермикулитовые пластиныдомашнего изготовления/Добавьте 50 мл вермикулита в стеклянную чашку Петри. Сверху на вермикулит положите бумажный круг толщиной 90 мм. Автоклав.
щипцы (тонко заостренные)Фишер13-812-42Используется для удаления семенной оболочки с зерен ячменя.
щипцы (ультра тонкое острие)Fisher12-000-122Используется для удаления семенной оболочки с зерен ячменя.
Микроносители золота (1,6 Μ m)BioRad1652264
макроносителиBioRad1652335
хлорида кальция (дигидрат)FisherC79-500Приготовьте 2,5 М стоковый раствор и храните 1 мл аликвот при -20°С.
спермидинSigmaS0266Приготовьте стоковый раствор 100 мМ и храните 500 мкм; L аликвоты при -20°С; C (использовать в течение 2 месяцев).
разрывные мембраны (1550 psi)BioRad1652331
останавливающие экраныBioRad1652336
держатели макроносителейBioRad1652322
Biolistic система доставки частицBioRadPDS-1000/He
одноосновной моногидрат фосфата натрияSigmaS9638Реагент для 1М фосфат натрия pH 7,2
натрия фосфат двухосновнойSigmaS9763Реагент для 1М фосфат натрия pH 7,2
1М фосфат натрия pH 7,2домашнего производства/Соедините 6,9 г натрия фосфата моноосновного моногидрата с 7,1 г натрия фосфата двухосновного. Добавьте воды до 100 мл. Добавьте NaOH, чтобы получить pH 7,2.
дитиотриетол (ДТТ)Sigma43819Растворить в воде до 1 М. Хранить при -20°С в 1 мл аликвот.
леупептинSigmaL2884Растворить в воде до 10 мг/мл. Хранить при -20°С;
C.глицеринSigmaG5516Приготовьте 50% раствор в воде.
Буфер для помоладомашнего приготовления/комбайна 10 мл 1 м фосфата натрия pH 7,2, 500 μ L 1 М DTT, 100 μ Л 10 мг/мл лейпептина, и 40 мл 50% глицерина. Добавьте воды до 100 мл.
бусины из нержавеющей стали (5 мм)Qiagen69989
2,0 мл трубкиEppendorf22363352Эта конкретная модель трубки рекомендуется для использования с гомогенизатором.
Гомогенизатор шариков (TissueLyser)Qiagen85210
12 мм x 75 мм стеклянные пробиркиFisher
luciferinGoldbioLUCK-100Приготовьте исходный раствор 25 мМ и храните 1 мл аликвот при -20°C.
ATPSigmaA7699Приготовьте 100 мМ стоковый раствор и храните 250 мкм; L аликвоты при -20°С;  С.
Трис основаниеSigmaT1503Реагент для 1М Трис сульфат pH 7,7.
серная кислотаSigma258105Реагент для 1М Трис сульфат pH 7,7.
1М Трис сульфат pH 7,7домашнего приготовления/Растворите 12,1 г основания Триса в 100 мл воды. Отрегулируйте pH до 7,7 с помощью серной кислоты.
Хлорид магнияSigmaM9397Растворить в воде до 2 М.
Буфер для анализа люциферазы (LAB)домашнего изготовления/Комбайн 3 мл 1 М Трис сульфата pH 7,7, 500 μ л 2 М хлорида магния, 1 мл 1 М ДТТ и 200 мкм; L 0,5 М ЭДТА. Добавьте воды до 50  мл.
Смесь для анализа люциферазы домашнегоприготовления/Комбайн 15 мл LAB, 800 мкм; L 25 мМ люциферина, 200 мкм; Л 100 мМ АТФ, и 4 мл воды. Это дает достаточную смесь для анализа (20  мл) для 100 анализов люциферазы.
люминометр (Сириус)Бертольд/
4-метилумбеллиферил-&бета;-D-глюкуронид (MUG)GoldbioMUG1Растворяют в ДМСО до 100 мМ.
Азид натрияSigmaS8032Приготовьте 2% исходный раствор в воде и храните 1 мл аликвот при -20°С.
96 луночных планшетов (стандарт)Fisher12565501
GUS пробирный буфердомашнего изготовления/Комбайн 2,5 мл MUG, 5 мл 1 М натрия фосфата pH 7,2, 400 мкм; L 0,5 M EDTA, 1 мл 1 M DTT, 100 μ Л 10 мг/мл лейпептина, 20 мл метанола и 1 мл 2% азида натрия. Добавьте воды до 100 мл.
TempPlate герметизирующая пленкаСША Scientific2921-1000
96 луночных пластин (черная)Costar3916
карбонат натрияSigmaS7795Приготовьте 200 мМ раствор в воде.
4-метилумбеллиферонSigmaM1381Приготовьте 100 мкм; М раствор в воде. Заморозьте 1 мл аликвот при -20°С;  С.
микропланшетный считыватель флуоресценцииBio-TekFLX-800
приема домашнего

Ссылки

  1. Chen, K., An, Y. Q. C. Transcriptional responses to gibberellin and abscisic acid in barley aleurone. J. Integ. Plant Biol. 48, 591-612 (2006).
  2. Lanahan, M. B., Ho, T. H. D., Rogers, S. W., Rogers, J. C. A gibberellin response complex in cereal alpha-amylase gene promoters. Plant Cell. 4, 203-211 (1992).
  3. Shen, Q., Zhang, P., Ho, T. H. D. Modular nature of abscisic acid (ABA) response complexes; composite promoter units that are necessary and sufficient for ABA induction of gene expression. Plant Cell. 8, 1107-1119 (1996).
  4. Gómez-Cadenas, A., Zentella, R., Walker-Simmons, M. K., Ho, T. H. D. Gibberellin/abscisic acid antagonism in barley aleurone cells: site of action of the protein kinase PKABA1 in relation to gibberellin signaling molecules. Plant Cell. 13, 667-679 (2001).
  5. Johnson, R. R., Shin, M., Shen, J. Q. The wheat PKABA1-interacting factor TaABF1 mediates both abscisic acid-suppressed and abscisic acid-induced gene expression in bombarded aleurone cells. Plant Mol. Biol. 68, 93-103 (2008).
  6. Harris, L. J., Martinez, S. A., Keyser, B. R., Dyer, W. E., Johnson, R. R. Functional analysis of TaABF1 during abscisic acid and gibberellin signaling in aleurone cells of cereal grains. Seed Science Res. 23, 89-98 (2013).
  7. Shen, Q., Casaretto, J., Zhang, P., Ho, T. H. D. Functional definition of ABA-response complexes: the promoter units necessary and sufficient for ABA induction of gene expression in barley (Hordeum vulgare). Plant Mol. Biol. 54, 111-124 (2004).
  8. Ritchie, S., Gilroy, S. Abscisic acid signal transduction in the barley aleurone is mediated by phospholipase D activity. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95, 2697-2702 (1998).
  9. Takemiya, A., Shimazaki, K. Phosphatidic acid inhibits blue light-induced stomatal opening via inhibition of protein phosphatase 1. Plant Physiol. 153, 1555-1562 (2010).
  10. Zou, X., Seeman, J. R., Neuman, D., Shen, Q. J. A WRKY gene from creosote bush encodes an activator of the abscisic acid signaling pathway. J. Biol. Chem. 279, 55770-55779 (2004).
  11. Ishibashi, Y., et al. Reactive oxygen species are involved in gibberellin/abscisic acid signaling in barley aleurone cells. Plant Physiol. 158, 1705-1714 (2012).
  12. Piskurewicz, U., et al. The gibberellic acid signaling repressor RGL2 inhibits Arabidopsis seed germination by stimulating abscisic acid synthesis and ABI5 activity. Plant Cell. 20, 2729-2745 (2008).
  13. Hong, J. Y., et al. Phosphorylation-mediated regulation of a rice ABA responsive element binding factor. Phytochemistry. 72, 27-36 (2011).
  14. Lopez-Molina, L., Mongrand, S., McLachlin, D. T., Chait, B. T., Chua, N. H. ABI5 acts downstream of ABI3 to execute an ABA-dependent growth arrest during germination. Plant J. 32, 317-328 (2002).
  15. Zhou, X., et al. SOS2-LIKE PROTEIN KINASE5, an SNF1-RELATED PROTEIN KINASE3-Type protein kinase, is important for abscisic acid responses in Arabidopsis through phosphorylation of ABSCISIC ACID-INSESENSITIVE5. Plant Physiol. 168, 659-676 (2015).
  16. Zong, W., et al. Feedback regulation of ABA signaling and biosynthesis by a bZIP transcription factor targets drought-resistance-related genes. Plant Physiol. 171, 2810-2825 (2016).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

GUS96DHVA1TaABF1

Похожие статьи