Случайного побегов может быть наведено на интермодального сегменты ipecac без лечения фитогормона. Для оценки динамики фитогормона во время формирования случайного стрелять, мы измерили эндогенного ауксинов и цитокининов интермодального сегментов, LC-MS/MS.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Количественная оценка эндогенного ауксинов и цитокининов во время Internode культуры Ipecac
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Формирование случайного стрелять является важным методом распространения экономически важных культур и для регенерации трансгенных растений. Фитогормона лечение требуется для индукции случайного побегов в большинстве видов. Ли случайного побеги могут быть наведено определяется баланс между ауксинов и цитокининов (CK) уровнях. Много усилий уходит в определении оптимальной концентрации и комбинации фитогормонов в каждой ткани, используется в качестве эксплантов и каждого вида растений. В ipecac однако, случайного побегов может быть наведено на интермодального сегментов в культурной среде без лечения фитогормона. Это позволяет присущие пластичности ipecac для дифференцировки клеток оцениваться. Чтобы побудить случайного стреляет в ipecac, мы культивировали интермодального сегментов при 24 ° C под 15 мкмоль m−2 s−1 света в цикле Темный свет/10-h 14-h на свободных фитогормона B5 средних затвердевших с 0,2% gellan резинки на 5 недель. Расследовать фитогормона динамика во время формирования случайного стрелять, мы измерили эндогенного индол-3-уксусной кислоты и CKs в сегментах по жидкостной хроматографии тандем масс-спектрометрии LC-MS/MS. Этот метод позволяет анализа эндогенных индол-3-уксусной кислоты и уровни CKs в простой форме. Он может применяться для изучения динамики эндогенного ауксинов и CK период органогенеза в других видов растений.
Введение
Готлиб Иоганн Фридрих Хаберландт (1854-1945) предложил концепцию «тотипотентность», по которой завод клетки можно разделить, дифференцировать и регенерации целых заводов даже после их предварительного дифференциации в типы конкретных клеток в зрелых растений1. В культуре ткани ли регенерации растений может быть наведено или не определяется сочетание и концентрации экзогенно прикладной фитогормонов в среднего роста. Скуг и Миллер обнаружил, что случайного побеги могут быть вызваны из табака каллуса на питательной среды, содержащие высокий коэффициент CKs в ауксины, тогда как придаточных корней может быть наведено на носителе, содержащих низкий к....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: Ipecac (C. Ипекакуана) был использован в этом исследовании, потому что он облегчает анализ эндогенного фитогормонов.
1. рост условия чтобы побудить случайного побеги Ipecac
- Подготовка бесплатно фитогормона B5 среднего скорректирована с рН 5,710и добавить 0,2% gellan резинка. Стерилизация автоклавированием.
- Залейте 25 мл среды, газобетона в стерильных Петри (90 мм × 20 мм).
- Вырезать 8-мм интермодального сегментов ipecac Саженцы с помощью хирургического скальпеля с лезвием № 22 на стерильную Акриловые плиты и место на носителе (рис. 1).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В 1 неделеst сформировали не случайного побегов. На 2-й неделе появились небольшие побегов. 3rd и 4-й недели, количество побегов увеличение главным образом в апикальной регионах (I и II)(Рисунок 2). На 5-й недели число побегов приблизительно 7 в регионе я был и 5 в регионе II (рис. 2B). В противоположность этому в регионов III и IV были сформ.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Чтобы определить распределение фитогормонов участвующих в органогенез, важно использовать растительные материалы, в которых органогенеза можно наблюдать на фитогормона свободной среде, потому что когда фитогормонов экзогенно применяются к эксплантов для стимулирования побеги и корни, они влияют на весь экспланта, что делает его трудно оценить присущие пластику растений в дифференцировки клеток и органогенеза. Случайного побегов может быть наведено на фитогормона свободной культуры средств массовой информации в других вид.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что они имеют без конфликта интересов.
Благодарности
Мы благодарны г-н Акира Мураками кафедры прикладной Biosciences, Университета Тойо и г-н Koudai Танигути Гумма центра сельскохозяйственной технологии для их технической помощи. Мы признательны также профессором Shosaku Kashiwada и доктор Uma Елена Раджагопалан, Университетом Тойо за их предложения. Это исследование было поддержано в части научно-исследовательский центр для жизни и экологических наук, Университет Тойо.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| [2H5]индол-3-уксусная кислота | Olchemlm Ltd | 031 1531 | Внутренний стандарт для LC-MS/MS |
| [2H5]транс-зеатин | Olchemlm Ltd | 030 0301 | Внутренний стандарт для LC-MS/MS |
| [2H5]транс-зеатин рибозид | Olchemlm Ltd | 030 0311 | Внутренний стандарт для LC-MS/MS |
| [2H6]N6-изопентениладенин | Olchemlm Ltd | 030 0161 | Внутренний стандарт для LC-MS/MS |
| [2H6]N6-изопентениладенозин | Olchemlm Ltd | 030 0171 | Внутренний стандарт для ЖХ-МС/МС |
| индол-3-уксусная кислота | Wako | 098 00181 | стандарт для ЖХ-МС/МС |
| транс-зеатин | SIGMA-ALDRICH | Z0876 5MG | стандарт для ЖХ-МС/МС |
| транс-зеатин рибозид | Wako | 262 01081 | стандарт для ЖХ-МС/МС |
| N6-изопентенил аденин | SIGMA-ALDRICH | D7674 1G | стандарт для ЖХ-МС/МС |
| N6-изопентениладенозин | ACROS ORGANICS | 22648 1000 | стандарт для ЖХ-МС/МС |
| ацетонитрил гиперград для ЖХ-МС LiChrosolv | MERCK | 1.00029.1000 | растворитель для ЖХ-МС/МС |
| Вода для хроматографии LiChrosolv | MERCK | 1.15333.1000 | растворитель для ЖХ-МС/МС |
| ВЭЖХ | SHIMADZU | Prominence | |
| MS | Sciex | 3200QTRAP | |
| Oasis HLB 30 мг/1 куб. см | Вода | WAT094225 | картриджная колонка |
| Oasis MCX 30 мг/1 куб. | см Вода | 186000252 | картриджная колонка |
| винтовая горловина для полного восстановления | Вода | 186002805 | |
| синяя, 12 x 32 мм крышка с винтовой горловиной и перегородка из ПТФЭ/силикона | Воды | ||
| Acquity UPLC BEH C18, 2,1x100 мм | Вода | 186002350 | колонка UPLC |
| Proshell 120 EC-C18, 2,1x50 мм | Agilent | 699775-902 | Колонка UPLC |
| Цифровой микроскоп | Leica | DHS1000 | |
| TissueLyser II | QIAGEN | 85300 | |
| Хирургическое лезвие | Feather | No22 | |
| Ручка скальпеля | Перо | No 4 | |
| Savant SpeedVac/Улавливатель паров | Thermo Fisher Scientific | SPD111/RVT4104 | вакуумный концентратор |
| Одноразовый стеклянный тобе (13x100 мм) | IWAKI | 9832-1310 | |
| Стерильная чашка Петри | INA OPTICA | I-90-20 |
Ссылки
- Haberlandt, G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen. Sitzungsber. Math.-Naturwiss. Kl. Akad. Wiss. Wien. 111, 69-92 (1902).
- Skoog, F., Miller, C. O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro. Symp Soc Exp Biol. 11, 118-130 (1957).
- Ganeshan, S., Caswell, K. L., Kartha, K. K., Chibbar, R. N. Transgenic plants and crops
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
