Методическая статья

Сотовый агрегации анализов для оценки привязки дрозофилы паз с транс-лигандов и его ингибирование СНГ-лигандами

DOI:

10.3791/56919

⸱

2 января 2018 г.

 , 
1Department of Molecular and Human Genetics, Baylor College of Medicine, 2Program in Developmental Biology, Baylor College of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Сложность систем в естественных условиях делает его трудно отличить активации и торможения рецептора Notch транс- и СНГ-лигандов, соответственно. Здесь мы представляем протокол, основанный на в пробирке клеток агрегации анализов для качественного и полуколичественного оценки привязки дрозофилы Notch транс-лигандов против СНГ-лигандами.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Вырезка сигнализации является эволюционно сохранены ячеек системы связи, широко используется в развития животных и взрослых обслуживания. Взаимодействие рецептора Notch с лигандами из соседних клеток вызывает активацию сигнальный путь (транс-активации), в то время как взаимодействие с лигандами из той же клетке подавляет сигнализации (СНГ-торможение). Надлежащий баланс между транс-Активация и СНГ-ингибирование помогает создавать оптимальные уровни Notch сигнализации в некоторых контекстах во время развития животных. Из-за перекрывающихся выражений домены Notch и его лигандов во многих типах клеток и существование механизмов обратной связи, изучению влияния данного столб-поступательные изменения на транс- против СНГ-взаимодействий выемки и его лигандов в естественных условиях трудно. Здесь мы описываем протокол для использования дрозофилы S2 клеток в клетки агрегации анализов для оценки последствий стучать вниз паз путь модификатор в привязке паз для каждого лиганда в транс и в СНГ. S2 клетки стабильно или временно transfected с Notch выражая вектора смешиваются с клетками, выражая каждый паз лиганда (S2-Дельта или зазубренными S2). Транс-связывание рецептора и лигандами приводит к образованию агрегатов гетеротипичной клеток и измеряется количество агрегатов на мл, состоящий из > 6 клеток. Для изучения тормозящий эффект СНГ-лигандов, S2 клетки совместно выражая Notch и каждого лиганда смешиваются с S2-Дельта или S2-зазубренными клеток и количество агрегатов количественно как описано выше. Относительное сокращение числа агрегатов благодаря наличию СНГ-лигандов представляет собой меру СНГ-лиганд-опосредованной ингибирование транс-привязки. Эти просто анализов может обеспечить полу количественные данные о воздействии генетических или фармакологических манипуляций в привязке выемки его лигандов и может помочь расшифровка молекулярные механизмы, лежащие в основе в естественных условиях эффекты Подобные манипуляции на выемку сигнализации.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Канонические Notch сигнализации является механизм ближней связи к ячейке, который требует физический контакт соседних клеток для облегчения взаимодействия между Notch рецепторов и их лиганды1. Взаимодействие с лигандами рецептора Notch (присутствует на поверхности клеток приема сигнала) (на поверхности отправки сигнала клетки) инициирует Notch сигнализации и известен как транс-активации2. С другой стороны, взаимодействие между Notch и его лигандов в той же ячейке приводит к ингибированию Notch путь и известен как СНГ-ингибирование3. Баланс между транс- и СНГ-взаимодействий необходим для обеспечения оптимальной лиганд зависимых Notch сигнализации4. Дрозофилы имеет один рецептора Notch и два лигандами (Дельта и Серрате) в отличие от млекопитающих, которые имеют четыре Notch рецепторов и пять лигандов [зубчатые 1 (JAG1), JAG2, 1 (DLL1), Дельта как DLL3 и DLL4]5. Имея это простота, дрозофилы модель предлагает простота учиться анализировать/эффекты модификаторы пути на паз лиганд взаимодействий и впоследствии Notch сигнализации. В некоторых контекстах во время развития животных (включая развитие крыла у дрозофилы), СНГ- и транс-взаимодействий участвуют для достижения надлежащего Notch сигнализации и клеточной судьба1,6 . Важно различать воздействия Notch путь модификаторов в этих контекстах на СНГ- против транс-взаимодействий паз с ее лигандами.

Наша группа ранее сообщалось, что добавление углеводный остаток, называется Ксилоза дрозофилы Notch отрицательно регулирует Notch сигнализации в определенных контекстах, включая крыло развития7. Потеря Шамс (фермента, xylosylates выемка) приводит к фенотип «потеря крыла вен»7. Совсем недавно гена дозировка экспериментов и клоновых анализа были использованы для показать, что потеря Шамс повышает выделение Дельта опосредованной Notch. Чтобы отличить ли расширение сигнализации паз в мутантов Шамс является результатом снижения СНГ-ингибирование или увеличение транс-активации, внематочная гиперэкспрессия исследования Notch лигандов в личиночной крыла имагинальных дисков с помощью dpp-GAL4 драйвера были исполнены. Эти эксперименты представила доказательства о том, что Шамс регулирует транс-активация Notch Дельта не затрагивая Notch СНГ-ингибирование лигандов8. Однако, обратной связи правила и эффекты эндогенного лиганда может усложнить толкование внематочная гиперэкспрессия исследования1,6,9.

Для решения этой проблемы, дрозофила S2 клетки10 были использованы, которые обеспечивают простой в vitro системы паз лиганд взаимодействия исследования11,12. S2 клетки не выразить эндогенного рецептора Notch и Дельта лигандом11 и Экспресс низкий уровень зубчатыми13, которая не влияет на паз лиганд агрегации эксперименты8. Таким образом S2 клетки могут стабильно или временно transfected Notch и/или отдельных лигандами (Дельта или Серрате) для генерации клеток, которые исключительно Экспресс рецептора Notch или один из его лигандов, или их комбинации. Смешивание Notch выражая S2 клеток с лигандом выражая S2 клеток приводит к образованию гетеротипичной агрегатов, при посредничестве рецептор лиганд привязки11,12,14. Количественная оценка совокупного образования представляет собой меру транс-привязки между Notch и его лигандов15 (рис. 1). Аналогичным образом, S2 клетки могут быть совместно transfected с Notch и Дельта или Серрате лигандами (т.е. СНГ-лигандами). СНГ-лигандов в этих клетках Notch выражая S2 отменить привязку паз с транс-лигандов и результат в снижение совокупного формирования8,12,14. Относительное уменьшение совокупного формирования, вызванных СНГ-лигандов представляет собой меру тормозящий эффект СНГ-лигандов на привязку между Notch и транс-лигандами (рис. 2). Соответственно, анализов агрегации клеток были использованы для изучения влияния потери xylosylation на транс- и СНГ-взаимодействий между Notch и его лигандами.

Здесь мы представляем подробный протокол для анализов агрегации клеток, направленных для оценки привязки паз с транс-лигандов и его ингибирование СНГ-лигандов с использованием дрозофилы S2 клеток. В качестве примера, мы предоставляем данные, которые позволили нам определить эффект xylosylation паз на привязку между Notch и транс-Дельта8. Эти просто анализы полуколичественного оценку Notch лиганд взаимодействий в пробирке и помочь определить молекулярные механизмы, лежащие в основе эффекты в vivo Notch путь модификаторов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка двойной мель РНК (dsRNA) Шамс нокдаун

  1. Амплификации PCR продукции
    1. Используйте одичал тип Желтый Белый (y w) геномной ДНК и pAc5.1-EGFP как шаблон и следующие пары праймера для того чтобы усилить фрагментов ДНК используется в синтезе двуцепочечной ДНК. Используйте следующие ПЦР теплового профиля: денатурация (95 ° C, 30 s), отжига (58 ° C, 30 s) и расширения (72 ° C, 1 мин).
      Более Зеленый флуоресцирующий белок Праймеры двуцепочечной ДНК (EGFP) (5' - 3')-
      Форвард грунт GAAATTAATACGACTCACTATAGGGGGTGAGCAAGGGCGAGGAG
      Обратный грунт GAAATTAATACGACTCACTATAGGGGGTCTTTGCTCAGGGCGG
      Шамс dsRNA грунтовки (5' - 3')-
      Форвард грунт TTAATACGACTCACTATAGGGGAGATGCTGTATGTGGACACGGAT
      Обратный грунт TTAATACGACTCACTATAGGGGAGATCCGTGGATAACCTTAACGA
      Примечание: EGFP двуцепочечной ДНК используется в качестве отрицательного контроля.
  2. Гель очищайте и полимеразной цепной реакции (ПЦР) продуктов с использованием коммерческих гель комплект очистки согласно протоколу от производителя.
  3. Выполните в vitro транскрипция с помощью коммерческий продукт, способный транскрипции от промоутера T7 согласно протоколу от производителя.
  4. Очистить двуцепочечной ДНК с помощью РНК очистка kit по данным производителя протокол и хранить при температуре-80 ° C.
  5. Оценить эффективность Шамс нокдаун, используя следующие шаги (1.5.1-1.5.5).
    1. Счетчик клеток, вручную с помощью Горяева и плита 5 x 105 S2 клеток в каждой скважине 6 хорошо пластины в 1 мл/хорошо Шнейдера среднего дополнена 10% плода Bovine сыворотки (ФБС) и 100 ед/мл пенициллин-стрептомицином.
    2. Добавить 7.5 мкг EGFP- или Шамс двуцепочечной ДНК в каждой скважине и Инкубируйте на 25 ° C в течение 24 ч.
    3. Урожай управления (EGFP двуцепочечной ДНК лечение) и Шамс двуцепочечной ДНК лечение S2 клетки, нежный закупорить следуют грануляции вниз центрифугированием на 1000 x g 5 мин при 25 ° C и процесс для изоляции РНК с помощью РНК добыча комплект согласно Протокол от производителя.
    4. Количественного определения РНК с помощью спектрофотометра и процесс 100 нг РНК для 1-шаг qRT ПЦР с использованием коммерческих ПЦР реактивы и грунт/датчики и следующие ПЦР теплового профиля: денатурация (95 ° C, 15 s) и отжиг/расширение (60 ° C, 1 мин).
      Примечание: Смотрите Таблицу материалов для получения информации о грунт/зонд наборы и инструмент, используемый для экспериментов qRT ПЦР -Шамс и управления в этих исследованиях.
    5. Вычислите с помощью 2–ΔΔCT метод16уровни mRNA относительной Шамс .

2. Оценка связывание рецептора Notch и транс-лигандами

  1. Подготовка приема сигнала клетки (S2 выражая рецептора Notch).
    1. Подсчет количества ячеек, вручную с помощью Горяева и Клемная 5 x 105 S2 и стабильной S2-Notch клеток в каждой скважине 6-ну пластины в 1 мл/хорошо Шнейдера среднего дополнена 10% FBS и 100 ед/мл пенициллин-стрептомицином.
      Примечание: Для S2-Notch клеток, которые доступны из центра ресурсов геномики дрозофилы (НАУЧНЫМ), добавьте 200 Нм метотрексата в средствах массовой информации. Чтобы подготовить метотрексат раствор 0,5 мм, сначала Подготовьте 20 мм метотрексат раствор в 250 мкл 1 M NaOH. Далее Разбавьте это решение до 0,5 мм в 1 М фосфатный буфер и хранить при температуре от-20 ° C. В клетках S2-паз экспрессия белка Notch находится под контролем промотора металлотионеина дрозофила в векторе ПЛТ .
    2. Добавить 7.5 мкг двуцепочечной ДНК в каждой скважине и Инкубируйте на 25 ° C в течение 24 ч.
    3. Добавление 0,7 мм4 CuSO побудить выражение Notch и инкубировать при 25 ° C в течение 3 дней.
      Примечание: CuSO4 используется для вызывают экспрессию белков контролируется металлотионеина промоутер.
  2. Подготовьте отправки сигнала клетки (клетки S2 выражая Дельта или Серрате лигандами).
    1. Подсчет количества ячеек, вручную с помощью Горяева и пластины ~ 5 x 106 стабильной S2-Дельта или S2-зазубреннымиTom клеток в каждой скважине 6-ну плиты в 1 мл/хорошо Шнейдера среды дополняется 10% FBS и 100 ед/мл пенициллин-стрептомицином.
      Примечание: Добавьте 200 Нм метотрексата для S2-Дельта клетки и 100 мкг/мл hygromycin для S2-зазубреннымитомом клетки в средствах массовой информации. Выражение Delta и зубчатымиTom— помидор меткой, функциональная версия зубчатыми12— под дрозофилы металлотионеина промоутер в векторе ПЛТ .
    2. Добавление 0,7 мм4 CuSO побудить выражение лигандов и инкубировать при 25 ° C в течение 3 ч.
  3. Выполните агрегирование между сигнал отправки и приема сигнала клетки.
    1. Урожай двуцепочечной ДНК лечение S2 (управления) и S2-Notch клетки нежный закупорить и пластины 2,5 x 105 клеток/хорошо в пластине 24-Ну после ручного подсчета Горяева.
    2. Добавить 5 x 105 стабильной S2-Дельта или S2-зазубреннымитомом клетки в общем объеме 200 мкл Шнейдера среды (дополнено с 10% FBS и 100 ед/мл пенициллин-стрептомицином).
      Примечание: Все клетки S2, обработка (включая покрытие, индукция и dsRNA лечение) было сделано под биобезопасности кабинета.
    3. Место пластину на орбитальный шейкер на 150 об/мин (942.48 rad/мин).
    4. После 1 мин смешать содержимое каждой скважины и вывезти 20 мкл для подсчета количества агрегатов.
      1. Одновременно принимать образ представителя под Перевернутый составной микроскоп с использованием 10 крат (PLL цель 10/0,25).
      2. Вручную количество агрегатов (> 6 ячеек) с использованием Горяева.
    5. Место пластину в шейкере.
    6. Повторите захвата изображений и подсчета после 5 минут и 15 минут агрегации.
  4. Выполняют количественной оценки транс-привязки.
    1. Рассчитайте количество агрегатов на мл между S2 клетки и клетки, S2-Дельта или S2-зазубреннымиTom как фон элемента управления.
    2. Рассчитать количество агрегатов на мл между S2-паз и S2-Дельта или S2-зазубреннымитомом клетки (масштабы транс-привязка).

3.Оценка ингибирование Binding между Notch и транс-лигандов СНГ-лигандами

  1. Подготовка клетки приема сигнала.
    1. Клемная 5 x 105 S2 клеток в каждой скважине 6-ну пластины в 1 мл/хорошо Шнейдера среднего дополнена 10% FBS и 100 ед/мл пенициллин-стрептомицином.
    2. Добавить 7.5 мкг двуцепочечной ДНК в каждой скважине и Инкубируйте на 25 ° C в течение 24 ч.
    3. Совместно transfect двуцепочечной ДНК лечение клетки с pBluescript и ПМТ паз11 (НАУЧНЫМ) самостоятельно или с pMT-Notch и ПМТ Дельта-11 (НАУЧНЫМ) или Зазубренными ПЛТдля всего17 Концентрация ДНК 2 мкг/скважины с использованием коммерческих трансфекции реагент согласно протоколу от производителя.
      Примечание: pBluescript используется как элемент управления. Совместно transfected клеток будет называться S2-паз & Deltaпереходных или S2-паз & далее зазубреннымипереходных клеток.
    4. Инкубируйте временно transfected клеток S2 при 25 ° C в течение 24 ч.
    5. Добавление 0,7 мм4 CuSO побудить выражение Notch и лигандами и инкубировать при 25 ° C в течение 3 дней.
  2. Подготовьте отправки сигнала клетки, как описано в 2.2.
  3. Выполните агрегирование между сигнал отправки и приема сигнала клетки, как описано в разделе 2.3.
  4. Количественно ингибирование транс-привязка по СНГ-лигандами.
    1. Рассчитайте количество агрегатов на мл между S2 клетки и клетки, S2-Дельта или зазубренными S2 как фон элемента управления.
    2. Количественно оценить масштабы ингибирование СНГ-лигандов следующим образом.
      1. Определите A как количество агрегатов между S2-Notchпереходных и S2-Дельта клетки.
      2. Определить B как количество агрегатов между ячейками S2 временно совместно transfected с Notch и Дельта (S2-паз & Deltaпереходных) и S2-Дельта клетки.
      3. Рассчитать относительный агрегации C = (B x 100) /A
      4. Рассчитать величину торможения по СНГ- лиганда (Дельта или Серрате) 100- C.
        Примечание: в качестве примера, если относительная агрегации 45%, то СНГ-лигандов считаются подавляют транс-привязки на 55%.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Наши замечания в естественных условиях предложил увеличить потерю результатов Шамс гена xylosyltransferase в прирост Notch сигнализации Дельта опосредованной транс-активация паз не затрагивая СНГ-ингибирование Паз на лигандов8. Чтобы проверить это понятие, были исполнены в пробирке клеток статистических анализов. Во-первых Шамс выражение в клетках S2 был сбит с помощью Шамс двуцепочечной ДНК. EGFP

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Канонические Notch сигнализации зависит от взаимодействия между рецептора Notch и его лигандов5. Хотя большинство исследований на пути Notch прежде всего рассмотреть связывание Notch и лигандами в соседних клетках (транс), паз и же элементная лиганды взаимодействуют и эти так называемые СНГ-взаимодействия может играть роль ингибирующее в паз сигнализации3,4. Соответственно чтобы расшифровать механизмы, лежащие в основе во...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы имеют никакого конфликта интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы признают поддержки от NIH/NIGMS (R01GM084135 HJN) и Фонд Мидзутани Glycoscience (Грант #110071 HJN) и благодарны том V. ли для обсуждения и предложения на анализы и Spyros Artavanis-Tsakonas, Хьюго Беллен, Роберт Флеминг, Кен Ирвин и центр ресурсов дрозофилы геномики (НАУЧНЫМ) для плазмидов и клеточных линий.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
БиографияУиттакер Шнайдер s Среда дрозофилы, модифицированныйLonza04-351Q
HyClone Пенициллин-стрептомицин 100X растворGE Здравоохранение lifescience 
CELLSTAR 6-луночный планшетGreiner Bio-One657 160
CELLSTAR 24-луночный планшетGreiner Bio-One662160
VWR мини-шейкерMarshell Sceintific12520-956
гемоцитометрFisher Sceintific 267110
Реагент для трансфекции FuGENE HDPromegaE2311
MEGAscrip T7 Набор для транскрипцииAmbionAM1334
Quick-RNA MiniPrep (набор для очистки РНК)Zymo ResearchR1054
VistaVision Инвертированный микроскопVWR
9MP USB2.0 Микроскоп Цифровая камера + Расширенное программное обеспечениеAmScopeMU-900Получение изображений с помощью программного обеспечения ToupView
PureLink Quick Gel Extraction KitInvitrogenK210012
Фетальная сыворотка крупного рогатого скотаGenDepotF0600-050
МетотрексатSigma-AldrichA6770-10
Гигромицин BInvitrogenHY068-L6
Медный купоросMacron Fine Chemicals4448-02
S2-клеткиInvitrogenR69007
S2-SerrateTom cellsПодарок от R. Fleming (Fleming et al, Development, 2013)
S2-Delta клеткиDGRC152
S2-Notch клеткиDGRC154
pMT-Delta векторDGRC1021Подарок от S. Artavanis-Tsakonas
pMT-Serrate vectorGift from Ken Irvine (Okajima et al, JBC, 2003)
pMT-Notch vectorDGRC1022Gift from S. Artavanis-Tsakonas
pAc5.1-EGFPGift from Hugo Bellen
TaqMan RNA-to-Ct 1-Step KitApplied Biosystem1611091
TaqMan Gene Expression Assay for CG9996 (Shams)Прикладная биосистемаDm02144576_g1 с красителем FAM-MGB
TaqMan Анализ экспрессии генов для CG7939 (RpL32)Прикладная биосистемаDm02151827_g1с красителем FAM-MGB
Прикладная биосистема 7900HT Быстрая система ПЦР в реальном времениПрикладная биосистема435140596-луночным блок-модулем
SV30010

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. de Celis, J. F., Bray, S., Garcia-Bellido, A. Notch signalling regulates veinlet expression and establishes boundaries between veins and interveins in the Drosophila wing. Development. 124 (10), 1919-1928 (1997).
  2. Fortini, M. E. Notch signaling: the core pathway and its posttranslational regulation. Dev Cell. 16 (5), 633-647 (2009).
  3. del Alamo, D., Rouault, H., Schweisguth, F. Mechanism and significance of cis-inhibition in Notch signalling. Curr Biol. 21 (1), R40-R47 (2011).
  4. Sprinzak, D., et al. Cis-interactions between Notch and Delta generate mutually exclusive signalling states. Nature. 465 (7294), 86-90 (2010).
  5. Kopan, R., Ilagan, M. X. The canonical Notch signaling pathway: unfolding the activation mechanism. Cell. 137 (2), 216-233 (2009).
  6. Huppert, S. S., Jacobsen, T. L., Muskavitch, M. A. Feedback regulation is central to Delta-Notch signalling required for Drosophila wing vein morphogenesis. Development. 124 (17), 3283-3291 (1997).
  7. Lee, T. V., et al. Negative regulation of notch signaling by xylose. PLoS Genet. 9 (6), e1003547(2013).
  8. Lee, T. V., Pandey, A., Jafar-Nejad, H. Xylosylation of the Notch receptor preserves the balance between its activation by trans-Delta and inhibition by cis-ligands in Drosophila. PLoS Genet. 13 (4), e1006723(2017).
  9. Jacobsen, T. L., Brennan, K., Arias, A. M., Muskavitch, M. A. Cis-interactions between Delta and Notch modulate neurogenic signalling in Drosophila. Development. 125 (22), 4531-4540 (1998).
  10. Schneider, I. Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster. J Embryol Exp Morphol. 27 (2), 353-365 (1972).
  11. Fehon, R. G., et al. Molecular interactions between the protein products of the neurogenic loci Notch and Delta, two EGF-homologous genes in Drosophila. Cell. 61 (3), 523-534 (1990).
  12. Fleming, R. J., et al. An extracellular region of Serrate is essential for ligand-induced cis-inhibition of Notch signaling. Development. 140 (9), 2039-2049 (2013).
  13. Saj, A., et al. A combined ex vivo and in vivo RNAi screen for notch regulators in Drosophila reveals an extensive notch interaction network. Dev Cell. 18 (5), 862-876 (2010).
  14. Fiuza, U. M., Klein, T., Martinez Arias, A., Hayward, P. Mechanisms of ligand-mediated inhibition in Notch signaling activity in Drosophila. Dev Dyn. 239 (3), 798-805 (2010).
  15. Ahimou, F., Mok, L. P., Bardot, B., Wesley, C. The adhesion force of Notch with Delta and the rate of Notch signaling. J Cell Biol. 167 (6), 1217-1229 (2004).
  16. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  17. Okajima, T., Xu, A., Irvine, K. D. Modulation of notch-ligand binding by protein O-fucosyltransferase 1 and fringe. J Biol Chem. 278 (43), 42340-42345 (2003).
  18. Acar, M., et al. Rumi is a CAP10 domain glycosyltransferase that modifies Notch and is required for Notch signaling. Cell. 132 (2), 247-258 (2008).
  19. Bruckner, K., Perez, L., Clausen, H., Cohen, S. Glycosyltransferase activity of Fringe modulates Notch-Delta interactions. Nature. 406 (6794), 411-415 (2000).
  20. Yamamoto, S., et al. A mutation in EGF repeat-8 of Notch discriminates between Serrate/Jagged and Delta family ligands. Science. 338 (6111), 1229-1232 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

NotchDrosophila S2

Похожие статьи