Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Крыса модель ортотопическая трансплантация печени, используя технику Роман магнитные анастомоза Suprahepatic полой реконструкции

10K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/56933

⸱

19 марта 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Shaanxi Provincial Center for Regenerative Medicine and Surgical Engineering, First Affiliated Hospital, Xi'an Jiaotong University, 2Institute of Advanced Surgical Technology and Engineering, First Affiliated Hospital, Xi'an Jiaotong University, 3Department of Hepatobiliary Surgery, First Affiliated Hospital, Xi'an Jiaotong University, 4Organ Transplantation Center, Tianjin First Center Hospital

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Реконструкция suprahepatic полой вены (SHVC) остается трудным шагом в трансплантации ортотопическая печени крысы. В этой статье мы покажем пошаговые протокол для реконструкции SHVC у крыс с помощью метода Роман магнитные анастомоза.

Аннотация

Крысы модель трансплантации печени ортотопическая (OLT) имеет важное значение для трансплантации исследований. Это очень сложные модели на животных и требует крутой кривой обучения. Введение метода манжеты для анастомоза воротной вены (PV) и infrahepatic верхней полой вены (IHVC) значительно упростили процедуры пересадки в крыс. Однако из-за короткого передней стенки получателей suprahepatic полой вены (SHVC), манжеты техника очень трудно использовать для реконструкции SHVC. Большинство исследователей в этой области по-прежнему использовать технику ручной шов для реконструкции SHVC, что делает его узким шагом в трансплантации ортотопическая печени крысы. Магнитные анастомоза технику (например, magnamosis) — это метод соединения двух судов, используя притягательную силу между двумя магнитами. Наши последние исследования показали, что техника магнитные анастомоза превосходит рука шовные техника для SHVC реконструкции в крыс. В этой статье мы покажем пошаговые протокол для реконструкции SHVC на крысах с использованием метода Роман магнитные анастомоза. В этой модели реконструкция PV и IHVC была выполнена стандартной манжете технику, в то время как реконструкция желчных протоков (BD) была выполнена методом стента. Печеночная arterialization повторно не была выполнена. Техника магнитные анастомоза значительно облегчило SHVC реконструкции и значительно сокращен на anphepatic этапе. После разумного кривой обучения даже исследователи без микрохирургическое навыки может производить надежных и воспроизводимых результатов с использованием этой модели крыса OLT.

Введение

Крысы модель трансплантации печени ортотопическая (OLT) имеет важное значение для трансплантации исследований1,2. Lee et al. в 19733был описан первый крыса OLT. В этой модели все суда были восстановлены методом ручной шов. Рука шовные техника требует передовых микрохирургическое навыков, что значительно ограничивает его использование. С тех пор были зарегистрированы различные модификации оригинального протокола крыса OLT. Среди них манжета техника для анастомоза воротной вены (PV) и infrahepatic верхней полой вены (IHVC) сообщил Камада et al. в 1979 году считается значительное улучшение в этой модели, он значительно упростили процедуры восстановления4 . Однако из-за короткого передней стенки получателей suprahepatic полой вены (SHVC), манжеты техника очень трудно использовать для реконструкции SHVC. Большинство исследователей в этой области по-прежнему использовать технику ручной шов для реконструкции SHVC, что делает его узким шагом в крыса OLT5,6,7.

Магнитные анастомоза технику (например, magnamosis) — это метод соединения двух судов или других трубчатых структур, используя притягательную силу между двумя магнитами8,9,10,11. Магнитная сила постепенно сжимает и реконструирует ткани в сильную, бесшовной анастомоза-12,13. Это сжатие анастомоза была доказана эффективность в люди14,15. Мы разработали пары магнитных колец специально для анастомоза SHVC в крыс. Наши последние исследования показали, что техника магнитные анастомоза превосходит ручной шовные техника для SHVC реконструкции в крыса OLT16. Цель этой статьи заключается в том, предоставить подробный, шаг за шагом протокол для реконструкции SHVC на крысах с использованием метода Роман магнитные анастомоза.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Протокол был проведен в соответствии с руководящими принципами для ухода и использования лабораторных животных и был одобрен Комитетом по этике животных эксперименты Xi'an Jiaotong университета, Сиань, провинция Шэньси, Китай.

Примечание: Ни одна из процедур в этом протоколе была выполнена под микроскопом хирургического.

1. предоперационная подготовка

  1. Дизайн и форма магнитные кольца (рис. 1)
    1. Соберите устройство магнитного анастомоза, совпадающие пары магнитных колец неодим железо бор.
    2. Дизайн колец по параметрам крыса SHVC главной оси диаметром, малая ось диаметр, толщина и вес 5,5 мм, 1 мм, 8 мм, 0,5 г, соответственно.
    3. Кривая кольца в нужную форму методом резки проволоки электрод, пальто полученных кольца с аэрографом оксида титана и стерилизуют оксидом этилена 500 мг/Л при 55-60 ° C для 6 h.
  2. Манжеты (рис. 2)
    1. Подготовьте манжету для анастомоза IHVC и PV путем разрезания труб из полиэтилена. Убедитесь, что манжета тело 5 мм длиной, с расширением манжеты 2 мм.
      Примечание: Внутренний и внешний диаметры PV манжету, 1.8 и 2,1 мм, в то время как те из IHVC манжету, 2,6 и 2,8 мм, соответственно.
  3. Стента (рис. 2)
    1. Подготовьте стент для анастомоза BD, резки 24-G внутривенная канюля с длиной 5 мм производить окраску на обоих концах.
  4. Подопытных животных
    1. Используйте самцах Sprague-Dawley, веся между 250 и 280 g как доноров и получателей. Убедитесь, что получатель же веса или немного тяжелее (< 10 g) чем донора.
    2. Держите крыс в климат контролем номера с бесплатным доступом к продовольствию и воде до операции.

2. доноров операции

  1. Вводить подкожно бупренорфин (0,05 мг/кг) как анальгетик 1 час перед операцией.
  2. Анестезировать доноров крыс при вдыхании изофлюрановая. Использование 5 vol % изофлюрановая при скорости потока 1,5 Л/мин в коробке Оргстекло для индукции анестезии и 2 vol % изофлюрановая при скорости потока 0,6-0,8 Л/мин на конус маска для поддержания анестезии. Подтвердите глубины анестезии, выполняя щепотку мыс и щепотку кожи.
  3. Бритье вся кожа брюшной крысы с использованием электробритвы для чистого воздействия. Лечить соответствующим кожи с повидон йод раствор.
  4. Откройте брюшной полости через крестообразный надрез, используя Ножницы хирургические из корня полового члена расширения на 1 см выше xiphisternum вдоль linea alba, расширение от медианы продольный разрез на линии midaxillary. Неубранной желудочно-кишечного тракта налево и накройте мокрой марлей.
  5. Зажим и тянуть xiphisternum сторону головы, с использованием гемостатический пинцет. Вскрыть серповидной связок и соединительной ткани вокруг печени. Изолировать и перевязать левой нижней диафрагмальный Вены с 6-0 Шелковый шов.
  6. Вставьте стента в желчных протоков.
    1. Зажим BD чуть выше точки, где Вены гастродуоденальной присоединяется воротной вены и потяните его, чтобы сохранить немного напряженности с помощью microforceps. Затем выполните «V» разрез длиной 1 мм на передней стене около 5 мм проксимальнее желчных слияния микро ножницами.
    2. Вставьте стента в Люмене желчных протоков с помощью кривой microforceps. Убедитесь, что по крайней мере половина стента лежит за пределами желчных протоков.
    3. Закрепите стент с 6-0 Шелковый шов. Вырежьте один конец шва. Держите другой провести позднее анастомоза. Разрез желчных протоков ниже стента и убедитесь, что желчь может прийти из стента.
  7. Изолируйте IHVC до уровня левой почечной Вены. Освободите IHVC от переднего и бокового окружающих тканей, хлопок бутон рассечение, до тех пор, пока IHVC каркасный. Отдельные и перевязать право suprarenal вен и право почечных вен с 6-0 Шелковый шов.
  8. Heparinize крыса путем инъекций 50 ед гепарина, разводят в 2 мл нормальный физиологический раствор через спинной Вену пениса.
  9. Perfuse печени.
    1. Изолируйте брюшной аорты ниже левой почечной Вены. Вставьте катетер 22-G в аорту.
    2. Выполните торакотомии, зажим грудной аорты с помощью microforceps.
    3. Perfuse донорской печени через катетер в аорте с 20 мл нормальной солевой раствор, содержащий 25 U гепарина (4 ° C) в размере 3 мл/мин с инфузионный насос. В то же время сократить верхней полой вены ниже право почечной Вены, чтобы позволить перфузии решение поступать из печени.
    4. Разрез SHVC вместе с частью диафрагмы и IHVC на уровне левой почечной Вены, когда печень доноров стал бледный.
  10. Вскрыть соединительной ткани, окружающие PV двух микро щипцами. Перевязать и разделить пилорического вен с 8-0 Пролен швом. Разрез PV на уровне селезеночной вены. Акцизный донорской печени и промойте его холодной нормальный физиологический раствор. Место его в холодной соленой ванны 4 ° C.

3. трансплантата подготовка

Примечание: Все процедуры подготовки печени трансплантата выполняются в холодный солевой ванне при 4 ° C.

  1. Прикрепите манжеты для донора IHVC (рис. 3).
    1. Вставьте IHVC в его манжеты с расширением манжеты, указывая на печень. Поместите манжету расширение на задней стенке IHVC. Исправить расширения манжеты и IHVC с изогнутой microforceps, сама с помощью файла клипа к контейнеру ванна.
    2. Эверт Дистальная IHVC манжеты тело с помощью двух микро щипцами.
    3. Закрепите края с 6-0 Шелковый шов. Убедитесь, что IHVC не скручивается в процессе.
  2. Повторите шаг 3.1 на PV придавать манжеты донора PV.
  3. Прикрепите магнитное кольцо для донора SHVC (рис. 4).
    1. Вытяните диафрагма через четыре щипцами и обрезать SHVC.
    2. Пройти SHVC через магнитное кольцо, с помощью микро пинцет титановый сплав.
    3. Эверт Дистальная SHVC над кольцом.
    4. Закрепите кольцо с 6-0 Шелковый шов. Убедитесь, что SHVC не скручивается в процессе.
    5. Удалите избыток диафрагма вокруг печени.
  4. Погружать донорской печени в холодной нормальной солевой ванне и хранить при 4 ° C.

4. получателей операция

Примечание: На рисунке 5показана схема трансплантата имплантации в получателей крыса.

  1. Вводить подкожно бупренорфин (0,05 мг/кг) как анальгетик 1 час перед операцией. Анестезировать доноров крыс при вдыхании изофлюрановая. Использование 5 vol % изофлюрановая при скорости потока 1,5 Л/мин в коробке Оргстекло для индукции анестезии и 2 vol % изофлюрановая при скорости потока 0,6-0,8 Л/мин на конус маска для поддержания анестезии.
  2. Брить всю кожу брюшной крысы. Лечить соответствующим кожи с повидон йод раствор.
  3. Откройте брюшной полости через разрез срединной 4 см. Место брюшной пружинные приводы. Вытяните ребра как далеко врозь как можно дальше от средней линии.
  4. Зажим и тянуть xiphisternum сторону головы, с использованием гемостатический пинцет. Вскрыть соединительной ткани и связки вокруг печени. Перевязать и разделить гепато пищевода связки. Перевязать и разделить печеночной артерии с 8-0 Пролен швом.
  5. Изолируйте общего желчного протока из первых печеночная портала. Место 6-0 шелк швом вокруг общего желчного протока, чуть ниже ее разделения и перевязать общего желчного протока.
  6. Вскрыть IHVC вниз право почечных вен. Перевязать и разделить право надпочечниковой Вены. Поместите ремень в SHVC печени.
  7. Зажим IHVC чуть выше право почечных вен с microvessel клипы. Зажим ПВ на уровне пилорического вен с microvessel клипы.
    1. Чтобы очистить кровь из печени, медленно вводить 2 мл физиологическим путем П.В. Перетащите вниз печени, потянув ранее размещенных ремень. Зажим SHVC и часть диафрагмы с Satinsky зажимом.
    2. Разрез IHVC недалеко от паренхимы и PV на porta hepatis. Акцизный печени, transecting SHVC чуть выше печени. Удалите получателей печени быстро.
  8. Прикрепите магнитное кольцо для получателя SHVC.
    1. Вставьте оставшиеся SHVC получателя в магнитное кольцо.
    2. Исправьте магнитное кольцо на Satinsky зажим, магнитного притяжения.
    3. До тех пор, пока судно охватывает край кольца, Эверт SHVC над магнитным кольцом.
  9. Место orthotopically донорской печени трансплантата и покрыть ее с холодной мокрой марлей.
  10. Заполните просвет донора и получателя SHVCs с нормальной солевой раствор. Удаление пузырьков воздуха тщательно во избежание эмболии. Закончите реконструкцию SHVC, связывая магнитные кольца, встроенных в донора и получателя SHVC вместе через магнитные силы.
  11. Реконструировать П.В.
    1. Тракта правого и левого филиал получателя PV, потянув за 8-0 Пролен шов для поддержания напряженности П.В.
    2. Переместите зажим получателя PV вниз от вен пилоруса селезеночной вен чтобы разоблачить Вену полностью.
    3. Надрезать на передней стенке получателя. Заполните просвет п с нормальной солевой раствор.
    4. Держите манжеты расширение донора PV Изогнутый пинцет.
    5. Вставьте манжеты тело донора PV в PV получателя во время держать промывка PV люмен с нормальное saline.
    6. Закрепите его с продольных шелковые лигатура 6-0. Восстановить поток крови к печени трансплантата, выпустив зажимы на PV и SHVC.
  12. Повторите шаг 4.11 на IHVC для реконструкции IHVC.
  13. Реконструировать желчных протоков, техника стента.
    1. Надрезать «V» на передней стенке получателей общего желчного протока.
    2. Вставьте доноров стента в Люмене получателя BD и исправить ее с 6-0 шелк продольных швов. Объединить швы на двух желчных протоков и галстук швы довести BD близко друг к другу.
    3. Оберните сальника ткани вокруг анастомоза сайт для предотвращения утечки желчи.
  14. Орошения брюшной полости с теплой нормальный физиологический раствор. Закройте разрез брюшной полости в два слоя с непрерывной не рассасывающиеся хирургические шовные 3-0.
  15. Цефуроксим (антибиотик) 16 мг/кг и управлять бупренорфин (анальгетик) 0,05 мг/кг подкожно после операции немедленно.
  16. Место в чистой клетке крыса и разрешить пищи и воды ad libitum.
  17. Inject Цефуроксим (16 мг/кг) и бупренорфин (0,05 мг/кг) в брюшной полости каждые 12 ч в течение 3 дней.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

После примерно 10 попыток магнитные анастомоза техника для SHVC реконструкции был успешно освоил исследователем, который имел без предварительной подготовки микрохирургическое. Реконструкция SHVC занимает менее 2 мин. Anhepatic этап для получателя крыс было около 10 мин. На сайте SHVC анастомоза на 1, 5 и 30 дней после реперфузии наблюдалась без тромбозов, кровотечение или angiostegnosis. Cavography нижней полой была исполнена на 2 недели после пересадки. Как показано на

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Многие клинические прогрессирует в трансплантации печени может объясняться исследования на животных. Крыса OLT является широко используемым и хорошо признанных модель в исследовании сохранения органа, иммунология трансплантации, физиологии и патологии. Однако он также является очень сложной процедурой и требует передовых микрохирургическое мастерства. Несмотря на множество улучшений в процедуре крысы Олт SHVC анастомоза остается сложным шагом. В этой статье мы опишем Роман магнитные анастомоза техника для SHVC реконструк...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Эта работа была поддержана от грантов от министерства образования Инновации команда развития программа Китая (No. IRT16R57), Национальный фонд естественных наук Китая (№ 81470896), и исследовательский фонд для молодых талантов набора планы из Сиань Цзяотун университета (RW).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Аппарат для анестезииГарвард  настольныйЖивотный наркоз
PLX7000B HF Мобильная цифровая С-дуговая системаPerlong MedicalPLX7000BВ основном используется для ангиографии и фотосъемки различных операций
Шприцевой насосMindrayBeneFusion SP5внутривенная инфузия
IsofluraneRWD life Science Co.обезболивающее: для индукции и поддержания анестезии
иогексолShanghai General Pharmaceutical Co  Внутрисосудистые контрастные средства   
гепарин натрия для инъекцийСПХ No1 Биохимический & Фармацевтическая Компания, ООО  предотвратить образование тромбозов 
Цефуроксим Glaxo Operations UK Limited антибиотик
бупренорфин TIPR Pharmaceutical Responsible Co.,Ltdобезболивающий
изогнутый микрощипцыShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.W40350хирургический инструмент
гемостатический щипцы (прямой)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J31010хирургический инструмент
гемостатический щипцы (изогнутый)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J31020хирургический
инструмент Сатинский зажимShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.для хирургического инструментаXEC050
Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J32010хирургический
инструмент микроиглодержательShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.Щипцы для хирургических инструментовWBA040
Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J42010щипцы для тканей хирургического инструмента
(с крючком)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J41010хирургический инструмент
ножницы для салфетокShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.Y00040хирургический инструмент
хирургические ножницыShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.Y00030хирургический инструмент
микроножницыShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.Хирургический инструментMR-S121T
зажимы для микрососудовShanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.Хирургический инструментXEC240
прямой микрощипцы (титановый сплав)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.WCC010хирургический инструмент
изогнутый микрощипцы  (титановый сплав)Шанхай Медикал Инструментс (Групп) Лтд., Корп.Хирургический инструментWCC020
Иглодержатель

Ссылки

  1. Aller, M. A., et al. A half century (1961-2011) of applying microsurgery to experimental liver research. World journal of hepatology. 4, 199-208 (2012).
  2. Aller, M. A., et al. The value of microsurgery in liver research. Liver international : official journal of the International Association for the Study of the Liver. 29, 1132-1140 (2009).
  3. Lee, S., Charters, A. C., Chandler, J. G., Orloff, M. J. A technique for orthotopic liver transplantation in the rat. Transplantation. 16, 664-669 (1973).
  4. Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
  5. Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic liver transplantation in rats. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2012).
  6. Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction. Journal of visualized experiments : JoVE. , e4376(2013).
  7. Liu, X., He, C., Huang, T., Gu, J. Development of a New Technique for Reconstruction of Hepatic Artery during Liver Transplantation in Sprague-Dawley Rat. PloS one. 10, e0145662(2015).
  8. Jamshidi, R., Stephenson, J. T., Clay, J. G., Pichakron, K. O., Harrison, M. R. Magnamosis: magnetic compression anastomosis with comparison to suture and staple techniques. Journal of pediatric surgery. 44, 222-228 (2009).
  9. Pichakron, K. O., et al. Magnamosis II: Magnetic compression anastomosis for minimally invasive gastrojejunostomy and jejunojejunostomy. Journal of the American College of Surgeons. 212, 42-49 (2011).
  10. Gonzales, K. D., et al. Magnamosis III: delivery of a magnetic compression anastomosis device using minimally invasive endoscopic techniques. Journal of pediatric surgery. 47, 1291-1295 (2012).
  11. Wall, J., et al. MAGNAMOSIS IV: magnetic compression anastomosis for minimally invasive colorectal surgery. Endoscopy. 45, 643-648 (2013).
  12. Xue, F., et al. Choledochojejunostomy with an innovative magnetic compressive anastomosis: How to determine optimal pressure? World journal of gastroenterology. 22, 2326-2335 (2016).
  13. Yan, X., et al. Portacaval shunt established in six dogs using magnetic compression technique. PloS one. 8, e76873(2013).
  14. Dorman, R. M., Vali, K., Harmon, C. M., Zaritzky, M., Bass, K. D. Repair of esophageal atresia with proximal fistula using endoscopic magnetic compression anastomosis (magnamosis) after staged lengthening. Pediatric surgery international. 32, 525-528 (2016).
  15. Russell, K. W., Rollins, M. D., Feola, G. P., Scaife, E. R. Magnamosis: a novel technique for the management of rectal atresia. BMJ case reports. , (2014).
  16. Shi, Y., et al. Magnetic ring anastomosis of suprahepatic vena cava: novel technique for liver transplantation in rat. Transplant international : official journal of the European Society for Organ Transplantation. 28, 89-94 (2015).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Метод «манжетки»стент желчного протокареартериализация печениангепатическая фазамикрохирургические навыкипослеоперационная выживаемость
Крыса модель ортотопическая трансплантация печени, используя технику Роман магнитные анастомоза Suprahepatic полой реконструкции
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.