Мультиплексированных изотермической амплификация на основе диагностики платформы для обнаружения Зика, чикунгуньи и денге 1

Ozlem Yaren; Barry W. Alto; Kevin M. Bradley; Patricia Moussatche; Lyudmyla Glushakova; Steven A. Benner

doi:10.3791/57051

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Мультиплексированных изотермической амплификация на основе диагностики платформы для обнаружения Зика, чикунгуньи и денге 1

14.5K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57051

⸱

13 марта 2018 г.

Ozlem Yaren¹ , Barry W. Alto² , Kevin M. Bradley³ , Patricia Moussatche³ , Lyudmyla Glushakova³ , Steven A. Benner¹^,³

¹Foundation for Applied Molecular Evolution (FfAME), ²Florida Medical Entomology Laboratory, University of Florida, ³Firebird Biomolecular Sciences LLC

В этой статье

Краткое содержание

Текущий мультиплексированных диагностики для обнаружения Зика, чикунгуньи и денге вирусов требуется Комплекс пробоподготовки и дорогой аппаратуры и трудно для использования в условиях ограниченных ресурсов. Мы покажем диагностики, который использует изотермической амплификация с целевыми стренги переносные датчики для обнаружения и дифференцировать эти вирусы с высокой чувствительностью и специфичностью.

Аннотация

Зика, денге и чикунгунья вирусы передаются комарами, вызывая заболевания с похожими симптомами пациента. Однако они имеют различные течению пациента к пациенту передачи потенциалы и требуют весьма различные лечения пациентов. Таким образом недавние вспышки Зика делают настоятельно необходимым разрабатывать инструменты, которые быстро дискриминацию этих вирусов в больных и ловушку комаров, чтобы выбрать правильное лечение пациентов и чтобы понять и управлять их эпидемиологии в режиме реального времени.

К сожалению, текущие диагностические тесты, включая те принимающей 2016 чрезвычайной использовать разрешения и фаст трек статус, выявления вирусной РНК обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (ПЦР), которая требует инструментария, обучение пользователей, и значительные пробоподготовки. Таким образом они должны быть отправлены в «утвержденных» эталонных лабораторий, требует времени. Действительно, в августе 2016, центр по контролю за заболеваниями (CDC) спрашивал беременных женщин которые были укусил комар и разработал Зика показывая сыпь ждать неприемлемым 2 до 4 недель до обучения, ли они были инфицированы. Нам очень нужны тесты, которые можно сделать на сайте, с мало ресурсов и подготовленных, но не обязательно лицензированным персоналом.

Это видео демонстрирует assay который удовлетворяет эти спецификации, работа с мочой или сыворотки (для пациентов) или щебень комаров туши (для экологического наблюдения), все без много пробоподготовки. Комаров тушки фиксируются на бумаге, перевозящих четвертичных аммониевых групп (Q-бумага) следуют аммиака лечения для управления биологической опасности. Эти затем непосредственно, без изоляции РНК, помещаются в Пробирной пробирки, содержащие лиофилизированной реагенты, которые нужно не цепи охлаждения. Изменение формы обратной транскрипции цикла опосредованной изотермической амплификация с целевой объект специфического дневно тегами переносные датчики производит индикация, в 30 мин, как сигнал трехцветной флуоресценции. Это визуализируется с КПК, аккумуляторный устройство с фильтром оранжевый. Форвард загрязнение предотвращается с герметичных труб и использование термолабильных урацила ДНК glycosylase (ПХГ) в присутствии dUTP в смеси амплификации.

Введение

Москиты вирусных инфекций, включая денге и чикунгунья Зика вирусы находятся на стратегии немедленного управления ростом и спросом. Денге и чикунгунья вирусы уже являются эндемичными во многих тропических регионах, где Зика сейчас распространяется в Западном полушарии¹. Зика вирус, как лихорадка денге, является членом семейства Flaviviridae и родной Африке с одной азиатской и два африканских генетических линий². Даже несмотря на то, что выявление вируса Зика восходит к 1947, Зика инфекции в организме человека оставалась спорадические за полвека до возникающих в Тихоокеанском регионе и в Америке. Первая вспышка со....