Confocal микроскопии показывает клеток поверхности рецептор агрегации через спектроскопии корреляции изображений

Adam C. Parslow; Andrew H.A. Clayton; Peter Lock; Andrew M. Scott

doi:10.3791/57164

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Confocal микроскопии показывает клеток поверхности рецептор агрегации через спектроскопии корреляции изображений

6.9K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57164

⸱

2 августа 2018 г.

Adam C. Parslow¹^,² , Andrew H.A. Clayton³ , Peter Lock⁴ , Andrew M. Scott¹^,²^,⁵^,⁶^,⁷

¹Tumour Targeting Laboratory, Olivia Newton-John Cancer Research Institute, ²School of Cancer Medicine, La Trobe University, ³Centre for Micro-Photonics, Faculty of Science, Engineering and Technology, Swinburne University of Technology, ⁴LIMS Bioimaging Facility, La Trobe Institute for Molecular Science, La Trobe University, ⁵Department of Medical Oncology, Olivia Newton-John Cancer and Wellnes Centre, Austin Health, ⁶Department of Medicine, University of Melbourne, ⁷Department of Molecular Imaging and Therapy, Austin Health

В этой статье

Краткое содержание

Антитела, которые привязаны к целевой рецепторы на поверхности клеток может придать конформации и кластеризации изменения. Эти динамические изменения имеют последствия для развития наркотиков в клетки-мишени. Этот протокол использует confocal микроскопии и спектроскопии корреляции изображений через ImageJ/Фиджи для количественной оценки степени рецептора кластеризации на поверхности клеток.

Аннотация

Конфокальная микроскопия предоставляет доступные методологию для захвата субклеточном взаимодействия критические характеристика и дальнейшего развития доклинических агентов, помечены флуоресцентных зондов. С последними достижениями в наркотиков цитотоксических антител на основе систем доставки, понимание изменений, вызванных этими агентами в сфере агрегации рецепторов и интернализации имеет решающее значение. Этот протокол использует устоявшейся методологии флуоресцентные иммуноцитохимии и открытым исходным кодом Фиджи распределение ImageJ, с его встроенными автокорреляции и изображения математических функций, для выполнения корреляции пространственного изображения спектроскопия (ICS). Этот протокол quantitates интенсивности флуоресценции рецепторов, помечены как функция пучка области конфокального микроскопа. Это дает количественную оценку положения комплексирования целевой молекулы на поверхности клеток. Эта методология направлена на характеристике статических клеток с потенциалом для расширения в височной исследования агрегации рецепторов. Этот протокол представляет доступной методологии для обеспечения количественной оценки кластеризации событий, происходящих на поверхности клеток, используя хорошо созданы методы и неспециализированных тепловизионной аппаратуры.

Введение

Разработка терапевтических антител показал замечательный успех в лечении множественные опухоли типа¹. Последние достижения антитела наркотиков конъюгатов (ADC) как механизмы доставки для цитотоксических соединений расширил требования для понимания динамики взаимодействия антитела: рецептор на клетки поверхность². После успешного нападения на антитела к поверхности рецепторные клетки, эти комплексы может вызвать аналогичные структуры агрегирования с теми, которые наблюдались в лиганд: антитела взаимодействия³. Изменения в агрегации рецепторов могут вызвать изменения в мембраны и результат в интерна....