Method Article

Всеобъемлющей процедуры для оценки производительности в Vitro предполагаемый Гемангиобластома неоваскуляризация, используя сфероида прорастания Assay

DOI:

10.3791/57183

⸱

April 12th, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, Huashan Hospital, Fudan University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот документ представляет собой всеобъемлющую процедуру для оценки в vitro классические опухоли ангиогенеза существует ли в гемангиобластомы (ХБС) и его роль в ОБД. Результаты подчеркивают сложность HB-неоваскуляризации и предполагают, что эта распространенная форма по ангиогенез только дополнительный механизм в HB-неоваскуляризации.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Инактивации ген-супрессор опухолевого фон Хиппель-Линдау (ВХЛ) играет решающую роль в развитии гемангиобластомы (ХБС) внутри человека центральной нервной системы (ЦНС). Однако цитологические происхождения и процесс эволюции HBs (включая неоваскуляризация) остаются спорными, и анти ангиогенеза для ВХЛ-HBs, основанный на классической HB ангиогенеза, дали неутешительные результаты в клинических испытаниях. Одним из основных препятствий для успешной клинической перевод анти сосудистой лечения является отсутствие глубокого понимания неоваскуляризация в этом сосудистые опухоли. В этой статье мы представляем всеобъемлющей процедуры для оценки в vitro классические опухоли ангиогенеза существует ли в ОБД, а также его роль в ОБД. С этой процедурой исследователи могут точно понять сложность HB неоваскуляризации и определить функции этой распространенной формой ангиогенеза в ОБД. Эти протоколы могут использоваться для оценки наиболее перспективных анти сосудистой терапии опухолей, который имеет высокий трансляционная потенциал для лечения опухоли либо пособничество в оптимизации лечения анти ангиогенных HBs в будущем переводы. Результаты подчеркивают сложность HB неоваскуляризации и предположить, что это общие формы ангиогенез-это только дополнительный механизм в HB неоваскуляризации.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Гемангиобластомы (ХБС) являются доброкачественные сосудистые опухоли, которые находятся исключительно в пределах человека центральной нервной системы (ЦНС). Они развиваются в больных с фон Хиппель-Линдау (ВХЛ) болезни или спорадические поражений. ВХЛ-HBs трудно вылечить путем хирургического лечения из-за частого повторения и несколько поражений, которые в результате этого генетические расстройства1. Хотя инактивации ген-супрессор опухолевого ВХЛ рассмотрел причины tumorigenesis ВХЛ-HBs, цитологические происхождения (включая неоваскуляризация) и эволюционного процесса HBs остаются во многом спорные2. Поэтому лучшее понима....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот метод был проведен в соответствии с утвержденными руководящими принципами и положениями исследовательской этики Комитета из Хуашань больницы, Университет Фудань. Соответствующий стандарт безопасности меры соблюдались в каждом шаге. Для схематического представления пожалуйста, обратитесь к рис.

1. клетки культуры и плазмидные конструкции

  1. Постоянно поддерживать человека пупочную вену эндотелиальных клеток (HUVEC) в Дульбекко модифицированная орла среднего (DMEM) с 10% плода бычьим сывороточным (ФБС), 100 единицы/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина в увлажненные 5% CO2 инкубатора в 37 ° C.
    2. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Исходные изображения принимаются Перевернутый световой микроскоп. Типичный изображения ВХЛ группы и группы управления показаны на рисунке 2-A1 и 2-A2. Прорастания длина контрольной группы короче, чем в группе ВХЛ.

После загрузки изображений, онлайн платформа предоставляет результаты анализа непосредственно. Вывод состоит из двух частей:.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Недавно несколько полей сосудистая биология исследований были простимулированы изучение ангиогенных эндотелия15. В этой статье, мы разработали эндотелиальной сфероида прорастания техника как экспериментальная модель для изучения формирования судна, что происходит от гена ВХЛ потеря функции в манипулировать эндотелиальные клетки для выявления роман кандидат молекул ангиогенных Каскад. Насколько нам известно это первый доклад для изучения эффектов ангиогенных эндогенная модифицированных эндотелиальн.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана от грантов от шанхайского комитета по науке и технике (15411951800, 15410723200). Авторы хотели бы поблагодарить профессора YuMei Вэнь и профессор Chao Чжао патогенного микроорганизма Департамента Фуданьский университет для их технической помощи.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
эндотелиальная клетка пупочной венычеловека Fudan IBS Cell CenterFDCC-HXN180
dulbecco' s модифицированный орел» s medium Gibco11995040
фетальная бычья сывороткаGibco 
PLKO.1-puro векторAddgene#8453
упаковка плазмиды psPAX2 Addgene#12260
конверт плазмида pMD2.GAddgene#12259
3D круглодонный 96-луночные планшетыS-BioMS-9096M
matrigelBD Biosciences354234
среда Opti-MEMGibco31985-070восстановленная сыворотка среда 
15-луночный планшетIbidi81501Пузырьки воздуха в геле могут быть уменьшены путем уравновешивания μ – Слайд ангиогенез перед использованием внутри инкубатора на ночь
добавки для роста эндотелиальных клетокSciencell#1052
10-см чашка для культурыCorningScipu000813
PuromycinGibcoA1113802
typsin-EDTAGibco25200056
автоматизированная система счетчика клеток  Программное обеспечение для анализа биотехнологических
изображений Винмасисhttp://mywim.wimasis.com 
26400044

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lonser, R. R., et al. von Hippel-Lindau disease. Lancet. 361 (9374), 2059-2067 (2003).
  2. Hussein, M. R. Central nervous system capillary haemangioblastoma: the pathologist's viewpoint. Int J Exp Pathol. 88 (5), 311-324 (2007).
  3. Ma, D., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hemangioblastoma NeovascularizationSpheroid Sprouting AssayVHL Gene SilencingEndothelial Cell CultureLentiviral Vector TransfectionHUVEC Cell LineSprout Length AnalysisIn Vitro AngiogenesisTumor VasculogenesisCapillary Formation Assay

Related Articles