Гипофункция слюнных желез является частое следствие аутоиммунных заболеваний и лучевой терапии. Воспроизводимые оценки функции слюнных желез в моделях мыши этих заболеваний является технической проблемой. Здесь описан простой метод для точного и воспроизводимого измерения производства слюны у мышей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Метод для измерения функции слюнной железы у мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Больных с синдромом Шёгрен на, аутоиммунное заболевание, поражающее экзокринных желез, развивать слюнных желез воспаление и сократили производство слюны. Аналогично производство слюны серьезно подорваны у больных, получавших лучевой терапии рака головы и шеи. Грызунов модели, разработанные для имитации этих клинических условий, содействия пониманию патогенеза заболевания и позволяет для развития новых терапевтических стратегий. Таким образом способность точно, можно воспроизвести и неоднократно измерения функции слюнных желез в животных моделях имеет решающее значение. Опираясь на ранее описанные в литературе, был разработан метод который отвечает этим критериям и была использована для оценки функции слюнной железы у мышей. Дополнительным преимуществом этого нового метода является, что она осваивается легко и имеет небольшие отличия между оператором. Слюнные железы функция вычисляется как сумма (вес или объем) или ставка (мл/мин) слюны производства в ответ на стимуляцию пилокарпин. Собранные слюны является хорошим источником для анализа содержания белка, концентрации иммуноглобулина и других биомолекул.
Введение
Слюнные железы вырабатывают слюну в ответ на различные неврологические и механических раздражителей1. Раздражители осуществляется через симпатическую и парасимпатическую нервную систему адренергических и холинергических рецепторов в железе. Пилокарпин — холинергических, пункт симпатомиметической агент, который действует преимущественно на мускариновых рецепторов. В слюнной железе он индуцирует выработку слюны, воздействуя на мускариновых ацетилхолиновый рецептор м31. Производство слюны, после пилокарпин администрации является показателем способности слюнных желез реагировать стимуляции и обычно используется как мера функ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Протокол, в описанный ниже был одобрен институциональный уход животных и использования Комитетом и следует этические руководящие принципы, установленные национальными институтами здравоохранения. Все представленные в настоящем докладе данные были получены с помощью самок мышей, которые были в возрасте 10-12 недель. Были использованы следующие штаммы мышей: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S и F1 (B6XA/J). Все мыши были размещены в клетках (5 животных в клетке) барьер в конкретных условиях возбудителя бесплатно и корма и воды ad libitum.
1. Подготовка
- Подготовить раствор гидрохлорида пилокарпин, весить 10 мг комплекса и растворить его в 1....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В экспериментальной мыши модель системы способность производить слюны в ответ на стимуляцию пилокарпин используется как показатель функции слюнных желез. Слюны производства была измерена в самок мышей C57BL/6 11-недельных методом тампоном. На рисунке 1Aрезультаты выражаются как количество слюны (мг), собранные после увеличения дозы пилокарпин. В дозе 1 мг/кг веса тела некоторые из мышей начал выставке дистресс (недобровольное встряхивания и дрожа). Поэтому бо.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Слюны является сложным процессом и зависит от многих факторов. Таким образом измерения функции слюнных желез в лабораторных животных может быть проблемой. Дополнительной проблемой является то, что повторные измерения функции слюнных желез в то же самое животное необходимо установить начало болезни или продемонстрировать восстановление после лечения.
Тампоном метод, описанный в настоящем докладе является технически простой для выполнения с множеством вариантов для представления данных. Полученн.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют никаких конфликтов интересов раскрыть.
Благодарности
Это исследование было поддержано грант от национальных институтов здравоохранения, Национальный Институт стоматологии и краниофациальных исследований (DE025030).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| <сильно>Химикаты для сбора слюны | |||
| Пилокарпина гидрохлорид | Альфа Эзар, Тьюксбери, Массачусетс, США | B21410 | Разведите в стерильном изотоническом растворе. Храните одноразовые аликвоты 100X по стоку -80oC |
| Name | Company< | strong>Номер в каталоге | Комментарии |
| Anesthesia Mix раствор | Смешайте 1 мл кетамина гидрохлорида + 0,5 мл ксилазина + 8,5 мл стерильного изотонического раствора в стерильном флаконе. Можно использовать в течение 3 месяцев. | ||
| Зетамин (гидрохлорид кетамина) | Vet One, Бойсе, Айдахо, США | C3N VT1 | Stock 100 мг/мл |
| Anased (Xylazine) | Med-Vet International, Меттава, Иллинойс, США | RXANASED-20 | Stock 20 мг/мл |
| Изотонический стерильный физиологический раствор | Vet One, Бойсе, Айдахо, США 501032 | Используется в качестве разбавителя | |
| Искусственные слезы (лубрикантная офтальмологическая мазь) | Henry Schien, Дублин, Огайо, США | 48272 | Используется для предотвращения пересыхания глаз во время процедуры |
| Название | Company | Каталожный номер | Комментарии |
| Материалы для сбора слюны | |||
| SalivaBio Детский тампон | Salimetrics, ООО «Карлсбад», CA, США | Н/Д | Индивидуально упакованные тампоны |
| 50 мл полипропиленовые трубки | VWR, Radnor, PA, США | 89004-364 | Отрежьте дно 1 см от трубки. Следите за тем, чтобы край среза был ровным. |
| Микроцентрифужные пробирки 0,6 мл | VWR, Radnor, PA, США | 87003-290 | Проделайте отверстия в дне пробирки с подогревом иглами 18 калибра |
| Микроцентрифужные пробирки 2 мл | VWR, Radnor, PA, США | 87003-298 | |
| Инсулиновые шприцы с постоянно прикрепленными иглами | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, США 324702 | ||
| 18 калибра обычные скошенные иглы | Becton Dickinson and Company, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США 305195 | ||
| Стерильное лезвие скальпеля #11 | Integra York Inc PA, США | 4-311 | |
| Микрорассекающие щипцы | Roboz, Гейтерсбург, Мэриленд, США | RS-5139 | Зазубренный угловой наконечник 0,8 мм, длина 4 дюйма |
| Этикеточная лента | Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас, США | sc-224487 | |
| 3-канальный таймер | Amazon.com, Сиэтл, штат Вашингтон, США | B06W2KCYVN | |
| Аналитические весы | Mettler Toledo, Колумбус, штат Огайо, США | ||
| Название< | strong>Company< | strong>Номер в каталоге | Комментарии |
| Химикаты/реагенты для индуцирования слюнной дисфункции | |||
| LPS | Invivogen, Сан-Дейго, Калифорния, США | tlrl-b5lps | Растворите в воде, не содержащей эндотоксинов, и храните исходный раствор в концентрации 5 мг/мл. Разведите в стерильном HBSS 100 мкг/мл - введите 100 мкл/мл |
| в адъюванте Imject Alum | Thermo Scientific | 77161 | Разведите 1:1 в стерильном физрастворе. Внутрибрюшинное введение 0,1 мл/мышь |
| Кролик анти-Ro52 анти-Ro52 | антисыворотка, полученная в лаборатории | Иммунизация кроликов рекомбинантной мышиной Ro52 | |
| Название | Company< | strong>Номер в каталоге | Комментарии |
| Химикаты/ наборы для анализа слюны | |||
| Sluvary lysozyme estimation | |||
| EnzChek Lysozyme Assay Kit | Molecular Probes, Eugene, OR, США | E-22013 | Используется в соответствии с инструкциями производителя |
| Name< | strong>Company | Номер в каталоге | >Комментарии |
| <Оценка сильно>слюнных IgA с помощью сэндвича ELISA | |||
| Mouse IgA | Southern Biotech, Бирмингем, Алабама, США | 0106-01 | Стандарты для сэндвича ИФА - диапазон от 30 нг/мл до 0,5 нг/мл |
| Козий антимышиный IgA немаркированный | Southern Biotech, Бирмингем, Алабама, США | 1040-01 | Слой 1 мкг/мл в бикарбонатном буфере |
| Козий антимышиный IgA HRP | Southern Biotech, Бирмингем, штат Алабама, США | 1040-05 | Обнаружение антител используется при разведении 1:4000 |
| субстрата TMB | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, США 555214 | Используется в соответствии с инструкциями производителя | |
| Immulon 4HBX Microtiter 96 луночных планшетов | Thermo Scientific, Рочестер, штат Нью-Йорк, США | 3855 | |
| Name | Company | >Каталожный номер | Комментарии |
| >Оценка белка в слюне | |||
| Bio-Rad Protein Assay Концентрат красителя | BioRad, Hercules, CA, США 5000006 | Для оценки белка в соответствии с инструкциями производителя |
Ссылки
- Proctor, G. B. The physiology of salivary secretion. Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).
- Fox, R. I. Sjögren's syndrome. Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).
- Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
