Подготовка и трансплантация стволовых клеток (ASC) листов жировой ткани, полученных на недостаточно зашивается анастомозов толстой кишки в мышиной модели представлен. Этот роман приложение показывает, что ASC листы можно уменьшить прямой кишки анастомоз утечки.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Трансплантация стволовых клеток жировой ткани производные листа для уменьшения утечки после частичное колэктомия в мышиной модели
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Анастомоза представляет собой катастрофические осложнение после операции колоректального. Хотя нынешние методы для предотвращения утечки имеют разные уровни клинической эффективности, они являются до теперь несовершенного решения. Терапия стволовой клетки с помощью ASC листов может обеспечить решение этой проблемы. ИСС, считаются как перспективных кандидатов для поощрения исцеление из-за их свойства трофические и иммуномодулирующим ткани. Здесь мы предлагаем методы для получения высокой плотности ASC листы, которые пересаживают на прямой кишки анастомоз в мышиной модели для сокращения утечки. ИСС сформировали ячеек листов в термо отзывчивым культуры блюд, которые могут быть легко отсоединяется. В день трансплантации частичное колэктомия с 5-шов прямой кишки анастомоз была выполнена. Животных сразу же были пересажены с 1 лист ASC в крысу. ASC листы спонтанно присоединились анастомоза без клея, шовный материал или любой биоматериала. Групп животных были принесены в жертву 3 и 7 дней после операции. По сравнению с пересаженной животных, заболеваемость анастомоза абсцессов и утечки был выше контрольных животных. В нашей модели трансплантация ASC листов после прямой кишки анастомоз был успешным и связано с более низкой ставкой утечки.
Введение
Частичное колэктомия с первичной анастомоза является часто выполняемые операции, что может быть сделано для многих заболеваний толстой кишки, рака прямой кишки, болезнь Крона и дивертикулит1,2. Самых страшных осложнение после прямой кишки анастомоз анастомоза3. Хотя было выявлено несколько факторов риска, связанных с утечками анастомоза, решения для предотвращения утечки остаются unkown4,5.
Жировая ткань производные стромальные клетки (ИСС), связанные с противовоспалительным и трофические свойства
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Брюшной подкожной жировой клетчатки был получен от человека доноров с одобрения медицинского этического Комитета (#MEC-2014-092), Erasmus MC университетский медицинский центр, Роттердам, Нидерланды. Все эксперименты на животных были утверждены Этический Комитет животных экспериментов, MC медицинский центр университета Erasmus, Роттердам, Нидерланды (133-14-01).
1. человека ИСС изоляции и культура
- Подготовка 3 мл изоляции среды 1 g жировой ткани. Mix низкий глюкозы Дульбекко, среднего изменения орла (LG-DMEM) с 10 г/Л бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 1 г/Л коллагеназы типа 1.
- Вскрыть человека подкожной жировой ткан....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Схема этого исследования, изображающие ASC лист культуры и процедура резекция толстой кишки и анастомоза показан на рисунке 1. Рисунок 2 показывает ASC лист микроскопические морфологии и макроскопические появление ASC листа во время и после отряда. Рисунок 3 показывает различные этапы ASC лист отряда и трансплантации. Рисунок 4 показывает наличие ASC листа на анастомоза .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Анастомоза является наиболее серьезных неблагоприятных событий, после резекции кишки с первичной анастомоза. Оптимальные методы для предотвращения утечки и анастомоза нарушения по-прежнему отсутствуют. Местное применение массива биоматериалов был проведен, с различной результаты25,,2627. Клеточной терапии призван облегчить восстановление тканей путем замены тканей или стимулирование местных исцеление через паракринными секрецию........
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Благодарности
Авторы выражают благодарность проф д-р S.E.R. Hovius, доктор M.A.M. Мюро и все хирурги отделения пластической хирургии для коллекции подкожной жировой ткани. P. сухо поддерживается грант от программы стипендий Нидерланды (NFP-12/435), во время проведения исследования. Ю.м. Bastiaansen-Jenniskens поддерживается грантов от голландского артрит фонда (LP11).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | Выделение и культивирование ASC |
| Коллагеназа I типа | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Изоляция |
| бычьей сыворотки Альбумин | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Изоляция |
| Фетальная бычья сыворотка | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, ASC изоляция и культивирование |
| 3% уксусной кислоты кислота с метиленовым синим | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Изоляция |
| Gentamicin | Gibco, Life technologies | 15750-037 | ASC изоляция и культивирование |
| Ampothericin B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | ASC изоляция и культура |
| Шейкер (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Изоляция |
| Центрифуга | Hettichlab | Rotina380 | ASC выделение и культивирование |
| Фосфатный буфер физиологический раствор | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, выделение и культура ASC |
| Аскорбиновая кислота-2-фосфат | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC выделение и культура |
| Человеческий рекомбинантный фактор роста фибробластов 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, выделение и культивирование ASC |
| Трипсин ЭДТА | Gibco, Life technologies | 25200-056 | ASC культура |
| Диметилсульфоксид | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC заморозка |
| Термочувствительные посуды | для культуры Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC подготовка листа |
| Нерассасывающийся плетеный шелк 4/0 | B Braun | 21151042 | хирургии |
| Нерассасывающаяся мононить полиамид 8/0 | B Braun | G1118170 | хирургии |
| Рассасывающаяся плетеная полигликолевая кислота 5/0 | B Braun | C1048207 | хирургии |
Ссылки
- Kawahara, H., et al. Single-incision laparoscopic right colectomy for recurrent Crohn's disease. Hepatogastroenterology. 57 (102-103), 1170-1172 (2010).
- Saia, M., Buja, A., Mantoan, D., Agresta, F., Baldo, V. Colon Cancer Surger....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
