Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Определение липидов индекс путем восстановления жидкого флуоресценции в грибкового патогена Пузырчатая Maydis

7.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57279

⸱

3 апреля 2018 г.

 ,  ,  , 
1Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional, 2Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autónoma de México, 3Instituto de Bioquímica Médica Leopoldo de Meis, Universidade Federal do Rio de Janeiro

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы описываем протокол для получения липидного капель индекс (LD) для изучения динамики триацилглицеролов в клетки культивировали в высок объём экспериментов. Assay индекс LD-это простой и надежный метод, который использует BODIPY 493/503. Этот assay не нужно dispendious экстракции липидов или анализа в микроскопии.

Аннотация

В статье показано как реализовать пробирного LD индекс, который является чувствительной Гонав пробирного определить накопление триацилглицеролов (Теги) в капельках липидов (LDs). LD индекс получается без экстракции липидов. Это позволяет измерения содержания LDs в высок объём экспериментов в различных условиях, таких как рост в богатых или азота в исчерпаны средства массовой информации. Хотя этот метод был описан в первый раз для изучения капелька метаболизма липидов в Saccharomyces cerevisiae, он был успешно применен к базидиомицета пузырчатая maydis. Интересно и потому, что LDs являются органеллы, филогенетически сохраняется в эукариотических клетках, метод может быть применен к большое количество клеток, от дрожжевых клеток млекопитающих. LD индекс основан на пробу восстановления жидкого флуоресценции (LFR) BODIPY 493/503 тушения условиях путем добавления ячеек фиксированной с формальдегидом. Калий йод используется как флуоресценции утоления. Соотношение между флуоресценции и склонах оптической плотности называется LD индекс. Склоны вычисляются из прямых линий, полученных при BODIPY флуоресценции и оптическая плотность 600 Нм (600OD) заговор против добавления образца. Оптимального качества отражается коэффициенты корреляции равной или выше 0,9 (r ≥ 0.9). Несколько образцов можно читать одновременно, как он может быть реализован в микроплиты. Поскольку BODIPY 493/503 липофильных флуоресцентных красителей что разделы в капелек липидов, она может использоваться во многих типах клеток, которые аккумулируют LDs.

Введение

Липидного капель (LDs) являются повсеместно внутриклеточного жира тела состоит из ядра нейтральные липиды, главным образом Теги и эфиры стеринов (SE). Ядро окружен монослоя фосфолипидов, который взаимодействует с белками, как perilipin и ферментов, участвующих в синтезе нейтральные липиды, например диацилглицерол ацил трансферазы, ацетил-КоА carboxylase и дефицит ацил CoA синтазы1. Из-за его динамическое поведение фосфолипидный монослоя также содержит триацилглицеринов липазы которые гидролизуют Теги и SE2. В зависимости от типа клеток и организм хранимые нейтральные липиды могут использоваться для получения энергии, или синтезировать фосфолипидов и сигнальных молекул. Дрожжи и другие грибки, содержание LDs изменения в ответ на изменения в коэффициент азота/углерода в культуре средств массовой информации, указав, что наличие снижение азота может быть ключом к увеличению липидный нейтральными производства3,4 ,5. Производство большое количество тегов в дрожжи имеет потенциального использования в биотехнологии как источника биотоплива и в пищевой промышленности. Некоторые хранимые липиды содержат высокие пропорции полиненасыщенных жирных кислот, как Омега 3 и Омега 6, с питания и диетических значение 6,,78,9,10 , 11. LDs mammalian клеток, включая клетки человека, также содержат теги и эфиры холестерина. Фосфолипидный монослоя взаимодействует с млекопитающих гомологичных белков, описанных в дрожжи LDs и с дополнительного белка, perilipin, который отсутствует в S. cerevisiae12. Один предложил, что роль для его связанного белков и фосфолипидов монослоя стабилизации структуры LDs и разрешить взаимодействие LDs с органеллы митохондрии, эндоплазматический ретикулум, пероксисомы и вакуоли, главным образом для липидного обмена 13,14. Интересно, что в организме человека, LDs, как представляется, быть вовлечены в патологии как тип 2 диабета, атеросклероза, стеатогепатит и ишемической болезни сердца, в котором есть увеличение их числа в 15,16,17 . Некоторые типы вирусов использовать LDs как платформы для сборки вирионы 2,18,19.

Из-за последствий LDs в человеческой патологии и их потенциального использования биотехнологических точного экспериментального определения формирования LDs является важной задачей. Эта статья описывает надежного анализа на основе восстановления флюоресценция (LFR) BODIPY 493/503 (4, 4-difluoro-1, 3, 5, 7, 8-pentamethyl-4-бора 3А, 4а диазафенантрена s-indacene), чтобы получить значение относительного содержания нейтральные липиды в клетках. С этот assay можно проследить динамику накопления нейтральные липиды в грибы как U. maydis и S. cerevisiae, а также в клетках млекопитающих, без необходимости извлечения липидов в 20. Метод был применен для в первый раз в S. cerevisiae для идентификации белковых фосфатаз и киназы, участвующих в регуляции жирового обмена. Это стало возможным без экстракции липидов и белков очистки21,22. LFR также использовался для создания динамики формирования LDs в перитонеальных макрофагов23. Использование BODIPY 493/503 имеет некоторые преимущества над другими красителями нейтральных липидов как красный Нила. BODIPY 493/503 весьма специфичен для нейтральные липиды и имеет узкий спектр излучения, облегчения одновременного обнаружения сигналов от краски как красный флуоресцирующий белок или Mito трекер, когда анализируются образцы confocal микроскопии. К сожалению BODIPY 493/503 чувствителен к Фотообесцвечивание, но этот процесс можно избежать с помощью antiquenching реагента при воздействии света24.

Для проведения пробирного LFR в дрожжевых клеток, они культивировали в желаемый питания условиях, и аликвоты снимаются в разное время. Далее клетки фиксируются с формальдегидом, который сохраняет целостность LDs для месяцев, когда клетки хранятся при 4 ° C. Другие методы фиксации следует избегать, особенно те, с использованием метанола или холодной ацетона, поскольку они ведут к деградации LDs внутри клетки24. Для измерения индекса LD, формальдегида Исправлена клетки подвешены в воде для получения определенной концентрации. Затем они добавляются в раствор, содержащий Флюорофор BODIPY 493/503 закаленном KI, и когда Флюорофор входит в ячейку и связывает с LDs, является восстановление ее флуоресценции. Сопутствующих измерений флуоресценции (485 Нм/510 нм), концентрация клеток количественно измеряя оптическую плотность 600 Нм. Каждый образец читается в четыре раза, добавив последующие 5 мкл аликвоты формальдегида Исправлена клеток подвески к тому же хорошо. Бланки флуоресценции и поглощения приобретаются перед добавлением клеток. Качество флуоресценции и поглощения данные оцениваются путем определения линейность измерений: если r < 0.9, данные отбрасываются. Значение r имеет важное значение, потому что в основном интенсивность флуоресценции должен производить линейным откликом на увеличение концентрации клеток. Если клетки концентрация слишком высока, линейность теряется. LFR assay обеспечивает быстрый, простой и экономичный метод для выбора желаемого фенотип LD в высок объём экспериментов. После выбора желаемых условий, LD содержание отдельных ячеек может быть изучен конфокальная микроскопия, используя те же формальдегида Исправлена клетки окрашивали BODIPY, обеспечивая образ LDs в ячейке. Теги и их SE содержания могут теперь далее анализироваться хромотографией тонким слоем.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка буферов и решения

  1. Подготовить 1 Л фосфата буфер солевой раствор (PBS, pH 7), растворяют 8 г NaCl, 0,2 г KCl, 1,44 г Na2HPO4, 0,24 г х2PO4 800 мл дистиллированной воды. Отрегулируйте пэ-аш до 7.0 с HCl, а затем добавьте воды для окончательного объемом 1 л PBS могут быть сделаны как 10 x Стоковый раствор и хранятся при комнатной температуре.
  2. Подготовить 10 мл фиксации решение, добавьте 1 mL 37% формальдегида в 9 мл PBS до конечной концентрации 3,7%. Готовить это решение непосредственно перед использованием.
    Предупреждение: Используйте перчатки для обработки раствора формальдегида.
  3. Подготовить закалки раствор (500 мм), растворяют 8.3 g ки в 100 мл дистиллированной воды. Готовить это решение перед использованием и хранить его при комнатной температуре.
  4. Подготовить раствор BODIPY 10 мм, Растворите 10 мг BODIPY 493/503 3.8 мл диметилсульфоксида (ДМСО). Держите 100 мкл аликвоты в темноте-70 ° c.
  5. Подготовить BODIPY 5 мкм тушение раствора, 1 мкл 10 мм BODIPY мл 493/503 до 2 500 мм, закалки решения. Для assay НОСЛЛ конечная концентрация 5 мкм BODIPY не требуется.
  6. Для подготовки минеральных решение, добавьте 0,06 g H3Бо3, 0,14 г НКД2-4 H2O, 0,4 г ZnCl2, 0,04 г Na2MoO4-2 H2O, 0,1 г FeCl3-6 H2O и 0,4 г CuSO 4-5 H2O в 1 Л дистиллированной воды.
  7. Подготовить раствор соли, добавьте 16 g KH2PO4, 4 g Na2,4, 8 г хлористого калия, 2 г MgSO4, 1 g CaCl2и 8 мл раствора минеральных в 1 Л дистиллированной воды.
  8. Подготовить минимальный средний без источника азота для U. maydis FB2 (a2b2), добавить в 1 Л дистиллированной воды, 10 г глюкозы и 62,5 мл солевого раствора согласно Холлидей, et al. 31. Отрегулируйте пэ-аш до 7.0 и затем распределять 100 мл СМИ в 250 мл флакон и стерилизовать их. Автоклав для 20 мин при давлении 15 psi (1,05 кг/см2) на жидком цикла или фильтр стерилизовать.
  9. Чтобы подготовить дрожжи Пептон Декстроза среднего (YPD), добавьте 5 г дрожжей экстракт, 2.5 g Пептон, и 5 г глюкозы в 1 Л дистиллированной воды. Отказаться от 100 мл раствора в 250 мл флакон и стерилизовать их. Автоклав для 20 мин при давлении 15 psi (1,05 кг/см2) на жидком цикла или фильтр стерилизовать.

2. Культура состояния и фиксации ячейки

Примечание: Сохранить структуру LDs, фиксируя клетки как можно скорее. Фиксация может быть сделано в microcentrifuge трубы. Фиксированные клетки могут храниться при температуре 4 ° C до одного месяца, если избежать обезвоживания оставляя тонкий слой воды.

  1. Растут U. maydis клетки в условиях культуры соответствующие исследования. Запустите культуры с первоначального ОД600 0,05 (1,15 × 106 клеток / мл). Инкубируйте клетки на 28 ° C, 180 об/мин за 24 ч. ОД600 1 соответствует 2,37 × 10 клеток / мл.
  2. В выбранной раз, снять Алиготе клеток. Для U. maydis, снять 5 мл каждые 2 ч в течение первых 8 ч. После 8 h роста аликвоты 2 мл достаточны.
  3. Измеряют оптическую плотность на 600 Нм каждого Алиготе.
  4. Центрифуга суспензию клеток в 14.000 x g 1 мин на 4 ° C, с помощью настольной центрифуги. Выбросите супернатант.
  5. Приостановите Пелле клеток в 1 мл буфера PBS-формальдегид 3,7%. Инкубируйте клетки для 15 мин при комнатной температуре.
  6. После инкубации центрифуга суспензию клеток в 14.000 x г за 1 мин при 4 ° C. Выбросите супернатант.
  7. Помойте лепешка клетки дважды с же объем дистиллированной воды (1 мл). Центрифуга суспензию клеток в 14.000 x г за 1 мин при 4 ° C. Выбросите надосадке после каждой стирки шага.
  8. Отрегулируйте Пелле ячейки до 5 ОД600 (1.15 x 108 клеток / мл) с дистиллированной воды (уравнение 1).
    figure-protocol-1    Уравнение 1.
  9. Держите образца при температуре 4 ° C до его использования.

3. Жидкие флуоресценции восстановления Assay (LFR)

  1. Включите спектрофотометра и откройте программное обеспечение Skanlt. Нажмите на новой сессиии выберите Пуск , а затем Varioskan Lux. Выберите протокол из дерева сессии, введите параметры для флуоресценции длин волн (возбуждения 485 Нм/выбросов 510 нм; оптическая плотность 600 Нм) и выбрать автоматическое фотоэлектронный умножитель выгоды. Для возбуждения пропускной способности, выберите 12 Нм. В оптике, выбрать лучшие (возбуждения образца-от верхней части колодца).
  2. Введите нежный и непрерывное агитации (300 об/мин). Выберите запустить пластиныи Пауза до действий пользователя (время используется для добавления образца к скважинам). Повторите пять раз протокол. Нажмите кнопку сохранить и записать имя для сессии в Поле имя сеанса. Протокол теперь готов для анализа проб.
  3. Добавьте 200 мкл BODIPY 5 мкм - закалка решение каждой скважины 96 хорошо черно снимите нижнюю крышку.
  4. Поместите пластины в камере спектрофотометром и инкубировать 5 мин при 30 ° C. С этого момента защищают пластину от света как можно больше.
  5. Нажмите кнопку Пуск и читать флюоресценция (возбуждения 485/выбросов 510) и ОД600 соответствующие пробелы.
  6. Добавьте 5 мкл суспензии клеток формальдегида Исправлена скважин во время паузы. Тщательно перемешать образцы с пипеткой. Положите пластину внутри спектрофотометра и нажмите кнопку продолжить. Затем образцы будут обрабатываться согласно протокол, разработанный выше.
  7. Повторите три последовательных добавлений 5 мкл суспензии клеток. Убедитесь, что клетки не осадок. (Рис. 1).

4. Расчет индекса LD

  1. Для каждого образца в микроплиты график флуоресценции и поглощения против объем каждого последовательных сложения (5 очков, включая пустые). В этом исследовании использование программного обеспечения Microsoft Excel для вычислений. Печать данных, введите объем, флуоресценции и оптической плотности данных в первой, второй и третьей колонках таблицы, соответственно. Затем, выберите все данные с помощью курсора, нажмите кнопку Вставить и выберите ТОЧЕЧНАЯ (XY).
  2. Выберите точки для каждой строки в графе и вставьте соответствующие Линии ТРЕНДА с флажок Показать уравнение . Запишите значения на склонах двух прямых линий, согласно уравнению 2:
    figure-protocol-2    Уравнение 2
    Где y = флуоресценции или оптической плотности, x = объем образца (0, 5, 10, 15, 20 мкл), m = наклон флуоресценции или линии оптической плотности, и b = y пересечение.
  3. Разделите наклон линии флуоресценции, наклон линии оптической плотности для получения индекса LD, уравнение 3.
    figure-protocol-3    Уравнение 3
    LD индекс соответствует частное флуоресценции и оптической плотности трасс.

5. качество анализ данных

  1. Вычислить коэффициент корреляции каждой прямой линии: нажмите на Мастера функции (fx) и выберите КОРРЕЛ. Если r < 0.9, отменить данные и повторите чтения. Если r ≥ 0.9, показания являются надежными.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

НОСЛЛ, с BODIPY 493/503 как флуоресцентный зонд является надежной и простой метод для изучения динамических накопление LDs в U. maydis, независимо от условий роста. Когда клетки были культивировали в YPD-средний, было увеличение индекса LD на этапе экспоненциального последующим снижением в стационарной фазе (рисунок 2A). В противоположность этому в клетках, выращенных под азота голод, был неуклонный рост индекса LD поэтапно как экспоненциальная и ста...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

LFR это новый метод, который был применен в первый раз для изучения жирового обмена в S. cerevisiae и позднее было успешно реализовано в U. maydis20,21. Хотя индекс LD не абсолютное значение тэгов, накапливается в клетках, он обеспечивает быстрый идея содержания липидов клеток, и интерпретация данных проста при сравнении LD индекс из двух или более экспериментальных условиях. BODIPY 493/503 весьма специфичен для нейтральные липиды, основной комп...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего раскрытие

Благодарности

Эта работа была поддержана от грантов Instituto Nacional-Secretaria политехнического де инвестигасьон и Posgrado (IPN-SIP-20170864), Programa de Apoyo де инвестигасьон Proyectos e Innovación Tecnológica (PAPIIT IN222117)-(Universidad Nacional Autónoma de México ЮНАМ) и Consejo Nacional de науки y Tecnología (КОНАСИТ 254904-JPP и 256520-GGS). Фонд-де-ампаро Pesquisa делать Рио-де-Жанейро (FAPERJ-Cientistas делать Nosso Estado: E 26/103.353/2011). Мы благодаря QFB. Оскар Иван Лукеньо Bocardo Схематический обзор. Мы благодарим д-р Мигель Родригес Тапиа за ценную помощь в конфокальной микроскопии LDs. Мы хотели бы поблагодарить д-р Бруно Bozaquel Morais за его новаторскую работу по разработке технику в S. cerevisiae , что мы адаптировали для U. maydis.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
СпектрофотометрVarioskan Lux многомодовый микропланшетreade D5879Filter 493/503 или монохроматор
детектора Plate costarCorning Inc.361596 луночный планшет с черными стенками/прозрачным дном
costarCorning Inc359896 луночный планшет для культивирования клеток
costar BODIPY 493/503Invitrogen/ ThermofisherD39224,4-дифтор-1,3,5,7,8-пентаметил-4-бора-3a,4a-диаза-s-индацен
Раствор формальдегидаSigma Aldrich252549реагент ACS, 37 мас.% в H2O, содержит 10-15% метанола для предотвращения полимеризации
Йодид калияSigma Aldrich60399BioUltra, ≥ 99,5% (AT)
FB2 Ustilago maydisATCC201384Базидиомицет-дрожжи Хлорид
натрияSigma Aldrich746398реагент ACS, неорганическая соль
Фосфат калия одноосновнойSigma AldrichP0662ACS реактив
Select Экстракт дрожжейSigma AldrichY100Смесь аминовых кислот, пептидов, водорастворимых, витаминов и углеводов для питательных сред
N-Z case plusSigma aldrichN4642Казеиновый ферментативный гидролизат из коровьего молока
ГлюкозаSigma AldrichG-8270D (+) глюкоза
Skaker колбаPirexCLS4450250-6EABorosiicate glass
ShakerSEV Mé xicoINO650V-7Орбитальный шейкер
Стол для центрифугиEppendorf5415CЦентрифуга
МикропробиркиSigma AldrichZ606340Eppendorf
Наконечники для пипетокAxygen ScientificT-200-YУниверсальные наконечники для пипеток со скошенным концом, 200 мкл, нестерильная
пипетка mLineBiohit7251308 каналов, диапазон объема 5-100 мкл

Ссылки

  1. Guo, Y., Cordes, K. R., Farese, R. V., Walther, T. C. Lipid droplets at a glance. Journal of Cell Science. 122 (6), 749-752 (2009).
  2. Welte, M. A. Expanding roles for lipid droplets. Current Biology. 25 (11), R470-R481 (2015).
  3. Sestric, R., Munch, G., Cicek, N., Sparling, R., Levin, D. B. Growth and neutral lipid synthesis by Yarrowia lipolytica on various carbon substrates under nutrient-sufficient and nutrient-limited conditions. Bioresource Technology. 164, 41-46 (2014).
  4. Raimondi, S., et al. Getting lipids from glycerol: new perspectives on biotechnological exploitation of Candida freyschussii. Microbial Cell Factories. 13, 83(2014).
  5. Cescut, J., Fillaudeau, L., Molina-Jouve, C., Uribelarrea, J. L. Carbon accumulation in Rhodotorula glutinis induced by nitrogen limitation. Biotechnology for Biofuels. 7, 164(2014).
  6. Galafassi, S., et al. Lipid production for second generation biodiesel by the oleaginous yeast Rhodotorula graminis. Bioresource Technology. 111, 398-403 (2012).
  7. Kot, A. M., Blazejak, S., Kurcz, A., Gientka, I., Kieliszek, M. Rhodotorula glutinis-potential source of lipids, carotenoids, and enzymes for use in industries. Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (14), 6103-6117 (2016).
  8. Rakicka, M., Lazar, Z., Dulermo, T., Fickers, P., Nicaud, J. M. Lipid production by the oleaginous yeast Yarrowia lipolytica using industrial by-products under different culture conditions. Biotechnology for Biofuels. 8, (2015).
  9. Zhu, Z. W., et al. Dynamics of the Lipid Droplet Proteome of the Oleaginous Yeast Rhodosporidium toruloides. Eukaryotic Cell. 14 (3), 252-264 (2015).
  10. Kolouchova, I., Mat'atkova, O., Sigler, K., Masak, J., Rezanka, T. Production of Palmitoleic and Linoleic Acid in Oleaginous and Nonoleaginous Yeast Biomass. International Journal of Analytical Chemistry. , (2016).
  11. Radulovic, M., et al. The emergence of lipid droplets in yeast: current status and experimental approaches. Current Genetics. 59 (4), 231-242 (2013).
  12. Takahashi, Y., et al. Perilipin-Mediated Lipid Droplet Formation in Adipocytes Promotes Sterol Regulatory Element-Binding Protein-1 Processing and Triacylglyceride Accumulation. Plos One. 8 (5), e64605(2013).
  13. Thiam, A. R., Farese Jr, R. V., Walther, T. C. The biophysics and cell biology of lipid droplets. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 14 (12), 775-786 (2013).
  14. Penno, A., Hackenbroich, G., Thiele, C. Phospholipids and lipid droplets. Biochimica et Biophysica Acta. 1831 (3), 589-594 (2013).
  15. Ageitos, J. M., Vallejo, J. A., Veiga-Crespo, P., Villa, T. G. Oily yeasts as oleaginous cell factories. Applied Microbiology and Biotechnology. 90 (4), 1219-1227 (2011).
  16. Athenstaedt, K., Daum, G. The life cycle of neutral lipids: synthesis, storage and degradation. Cellular and Molecular Life Sciences. 63 (12), 1355-1369 (2006).
  17. Marshall, L. L., Stimpson, S. E., Hyland, R., Coorssen, J. R., Myers, S. J. Increased lipid droplet accumulation associated with a peripheral sensory neuropathy. Journal of Biological Chemistry. 7 (2), 67-76 (2014).
  18. Filipe, A., McLauchlan, J. Hepatitis C virus and lipid droplets: finding a niche. Trends in Molecular Medicine. 21 (1), 34-42 (2015).
  19. Greenberg, A. S., et al. The role of lipid droplets in metabolic disease in rodents and humans. Journal of Clinical Investigation. 121 (6), 2102-2110 (2011).
  20. Aguilar, L. R., et al. Lipid droplets accumulation and other biochemical changes induced in the fungal pathogen Ustilago maydis under nitrogen-starvation. Archives of Microbiology. , (2017).
  21. Bozaquel-Morais, B. L., Madeira, J. B., Maya-Monteiro, C. M., Masuda, C. A., Montero-Lomeli, M. A new fluorescence-based method identifies protein phosphatases regulating lipid droplet metabolism. PLoS One. 5 (10), e13692(2010).
  22. Madeira, J. B., et al. TORC1 Inhibition Induces Lipid Droplet Replenishment in Yeast. Molecular and Cellular Biology. 35 (4), 737-746 (2015).
  23. Maya-Monteiro, C. M., et al. Leptin induces macrophage lipid body formation by a phosphatidylinositol 3-kinase- and mammalian target of rapamycin-dependent mechanism. Journal of Biological Chemistry. 283 (4), 2203-2210 (2008).
  24. Listenberger, L. L., Brown, D. A. Current Protocols in Cell Biology. , John Wiley & Sons, Inc. (2001).
  25. Jump, D. B., Torres-Gonzalez, M., Olson, L. K. Soraphen A, an inhibitor of acetyl CoA carboxylase activity, interferes with fatty acid elongation. Biochemical Pharmacology. 81 (5), 649-660 (2011).
  26. Hobro, A. J., Smith, N. I. An evaluation of fixation methods: Spatial and compositional cellular changes observed by Raman imaging. Vibrational Spectroscopy. 91, 31-45 (2017).
  27. Chen, Y. T., Wan, L., Zhang, D. P., Bian, Y. Z., Jiang, J. Z. Modulation of the spectroscopic property of Bodipy derivates through tuning the molecular configuration. Photochemical & Photobiological Sciences. 10 (6), 1030-1038 (2011).
  28. Pagac, M., et al. SEIPIN Regulates Lipid Droplet Expansion and Adipocyte Development by Modulating the Activity of Glycerol-3-phosphate Acyltransferase. Cell Reports. 17 (6), 1546-1559 (2016).
  29. Qiu, B., Simon, M. C. BODIPY 493/503 Staining of Neutral Lipid Droplets for Microscopy and Quantification by Flow Cytometry. Bio-protocol. 6 (17), (2016).
  30. Rumin, J., et al. The use of fluorescent Nile red and BODIPY for lipid measurement in microalgae. Biotechnology for Biofuels. 8, 42(2015).
  31. Holliday, R. Ustilago maydis. Handbook of genetics. King, R. , Plenum. New York. 575-595 (1974).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Индекс липидных капельанализ восстановления флуоресценцииBODIPY 493/503микропланшетная спектрофотометрияазотное голоданиенакопление триацилглицериновконфокальная микроскопияизмерение оптической плотностификсация формальдегидом
Определение липидов индекс путем восстановления жидкого флуоресценции в грибкового патогена Пузырчатая Maydis
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.