Методическая статья

Изоляция лимфоциты от мыши небольшой кишечной иммунной системы

DOI:

10.3791/57281

⸱

28 февраля 2018 г.

 , 
1Center for Infectious Diseases, Department of Molecular Genetics and Microbiology, Stony Brook University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы описываем подробный протокол для изоляции лимфоцитов из индуктивных сайтов, включая патчи Пейера кишечнике связанных лимфоидной ткани и крылом брыжеечных лимфатических узлов и эффекторных сайтов, включая lamina propria и кишечного эпителия кишечной иммунной системы малых.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Кишечные иммунная система играет важную роль в поддержании барьерной функции желудочно-кишечного тракта, создавая терпимая(ый) ответы на пищевые антигены и синантропных бактерий во время монтажа эффективного иммунного ответа на энтеропатогенные микробы. Кроме того стало ясно, что местные кишечного иммунитета имеет глубокое влияние на отдаленные и системного иммунитета. Таким образом важно изучить как индуцируется кишечных иммунный ответ и что итоги иммунологического ответа. Здесь описывается подробный протокол для изоляции лимфоцитов из тонкой кишки индуктивный как патчи Пейера кишечнике связанных лимфоидной ткани и крылом брыжеечных лимфатических узлов и эффекторных сайты как lamina propria и кишечного эпителия. Эта техника обеспечивает изоляцию большое количество лимфоцитов из небольших кишечных тканей с оптимальной чистоты и жизнеспособности и минимальным полигамное загрязнения в течение приемлемого времени. Технические возможности изолировать лимфоциты и другие клетки иммунной системы от кишечных тканей позволяет понимание иммунной реакции на инфекции ЖКТ, рак и воспалительные заболевания.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) имеет много складок и выступов, которые представляет крупнейший интерфейс, отделяя внутреннего тела и внешней среды. Кишечные иммунная система играет важную роль в поддержании барьерной функции желудочно-Кишечного тракта. Оно постоянно подвергается воздействию пищевых антигенов, синантропных бактерий и болезнетворных микробов. Таким образом оно должно оставаться терпимая(ый) антигенов продовольственной и синантропных бактерий при сохранении способности быстро генерировать эффективного иммунного ответа на энтеропатогенные микробы1. Кишечной иммунной системы может анатомически разделить индуктивных сайтов, где лимфоциты наивной активируются антиген представляющих клеток, перевозящих антигены из слизистой оболочки кишечника, и эффекторных сайтов, где активированных лимфоцитов оказывают конкретные эффекторные функции2. Индуктивный сайты включают организованной лимфоидных структура Пейера (PP), что обследования кишечника люмен непосредственно через действий специализированных клеток M и крылом брыжеечных регионарных лимфатических узлов (млн.). Эффектор сайтов состоят из propria пластинки (LP), который является соединительной ткани ниже базальной мембраны и кишечного эпителия, одноклеточного слоя, расположенный над базальной мембраны, содержащий интраэпителиальных лимфоцитов (IEL). Лимфоциты являются основными участниками адаптивного иммунитета, которые посредником защиту от инфекции и рака и может также способствовать иммунопатологии в воспалительных заболеваний. Это важно и весьма актуальное значение для изучения лимфоцитов в этих различных анатомических слизистой отсеков лучше понять их индукции и эффекторных функций.

Относительно простой и унифицированный протокол для изоляции лимфоцитов из этих отсеков необходима как числа следователей, изучение иммунного события, происходящие в кишечнике ускоряется. Некоторые исследовательские группы опубликовали протоколы, которые разделяют несколько аналогичных процессов для изоляции иммунные клетки от мыши малого кишечника отсеков3,4,5,6,7 . Однако есть несколько технических различий между ними в зависимости от внимания отдельным протоколом. Например с упором на изоляцию иммунные клетки от LP, один протокол рассматривается влияние различных ферментативного пищеварения на жизнеспособность клеток, клеток поверхности маркер выражения и состав изолированных иммунные клетки5. Другой протокол выделяет быстрый и воспроизводимый метод для изоляции лимфоцитов без центрифугирования плотность6. Наконец конкретные протоколы существуют также с целью изолировать мононуклеарных фагоцитов из слоев различных тканей в тонкой кишке7. Здесь представлен высокую воспроизводимость протокол, который позволяет последовательно изоляция популяций лимфоцитов из млн, PP, LP и IEL отсека тонкой кишки.

Мы сосредоточены на изоляцию высокоочищенных населения от LP и IEL отсеков, которые основном свободны от загрязнений от других кишечных отсеков. Это широко используется протокол производит высокий урожай лимфоцитов максимально чистой и жизнеспособными в течение приемлемого времени ограничения4,8,9,10,,1112. Этот протокол также обеспечивает изоляцию лимфоцитов из LP и IEL отсека с минимальными загрязнения электрованна, позволяя bona fide возможность изучить лимфоцитов в этих различных отсеках. Изолированные лимфоциты могут быть подвергнуты дальнейшей манипуляции как гранулярных анализа потока или функционального анализа. Этот протокол успешно применяется для изоляции лимфоциты от мыши тонкой кишки и толстой кишки при бактериальных инфекций, таких как Listeria monocytogenes, Salmonella typhimuriumи Yersinia pseudotuberculosis инфекций и воспалительных заболеваний таких как химико - и возбудителя индуцированной колит. Этот протокол может использоваться также для изоляции innate иммунных клеток, таких как дендритные клетки, макрофаги, нейтрофилы и моноциты из мыши тонкой кишки и толстой кишки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с рекомендациями Национального института здравоохранения и утверждены Стоуни-Брук университета уход для институциональных животных и использования Комитетом.

Примечание: Убедитесь, что все утверждений перед выполнением процедуры.

1. решение подготовка

  1. HGPG (HEPES, L-глютамин, пенициллин/стрептомицина и гентамицина), 100 ×
    1. Смесь 59,6 g HEPES (500 мм окончательный), 14,6 г Л-глютамин (окончательный 200 мм), 1 × 106 U пенициллин (2000 ед/мл окончательный), стрептомицина 1 г (2 мг/мл окончательный) и гентамицин 2,5 мг (5 мкг/мл окончательный). Добавить RPMI 1640 до 500 мл. Отрегулируйте пэ-аш до 7,5 с использованием NaOH (до перестройки, буфер желто оранжевый с pH около 6.0). Фильтр стерилизовать, с помощью фильтра 0.45 мкм. Алиготе и хранить при температуре-20 ° C до 1 года или на 4 ° C до 1 месяца.
  2. HEPES-бикарбонат буфера, 10 x
    1. Mix 23.8 g HEPES (окончательный 100 мм), 21 g NaHCO3 (окончательный 250 мм) и добавляют воду до 1000 мл. Отрегулируйте pH 7.2 с HCl. фильтр стерилизации с помощью фильтра 0.45 мкм. Хранить при комнатной температуре. Со временем изменяется рН. Подрегулировать рН периодически.
  3. Урожай СМИ (~ 1 бутылка/2 мышей)
    1. 500 мл RPMI 1640 добавьте 25 мл тепло инактивированная плода бычьим сывороточным (5% окончательный) и 5 мл 100 × HGPG. Хранить до 6 месяцев при 4 ° C.
  4. Dithioerythritol (DTE) решение (40 мл/малого кишечника)
    1. Mix 50 мл 10 × Хэнкс сбалансированного солевого раствора, Ca2+- и+мг2-бесплатно, 50 мл 10 × HEPES-бикарбонат буфер и 50 мл тепло инактивированная плода бычьим сывороточным (10% окончательного). Добавьте 350 mL H2O и 15,4 мг dithioerythritol/100 мл (окончательный 1 мм). Подготовьте этот свежий перед использованием.
  5. Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) раствор (50 мл/малого кишечника)
    1. Mix 50 мл 10 × Хэнкс сбалансированного солевого раствора,+- Ca2и Mg2+-бесплатно с 5 мл 100 × HGPG. Добавьте 445 мл H2O. Добавить 260 мкл 0,5 М ЭДТА/100 мл (окончательный 1,3 мм). Подготовьте этот свежий перед использованием.
  6. Коллагеназы раствор (30 мл/LP)
    1. 500 мл RPMI, добавить 50 мл FBS (10% FBS финал), 5 мл 100 × HPGP, 1 мл 0,5 М MgCl2 (окончательный 1 мм) и 1 мл 0,5 М CaCl2 (окончательный 1 мм). Добавить коллагеназы, тип I (100 ед/мл финал). Подготовьте этот свежий перед использованием.
  7. Плотность градиента (ГД) решения
    1. Подготовка 1 × DG Стоковый раствор путем смешивания 90 мл DG Стоковый раствор (см. Таблицу материалы) с 10 мл 10 × PBS. Держите стерильной при 4 ° C.
    2. Готовят раствор DG 44% (8 мл/IEL, 8 мл/LP), смешивая 44 мл 1 × DG Стоковый раствор и 56 мл RPMI 1640. Подготовьте этот свежий перед использованием.
    3. Готовят раствор DG 67% (5 мл/IEL, 5 мл/LP), смешивая 67 мл 1 × DG Стоковый раствор и 33 мл RPMI 1640. Подготовьте этот свежий перед использованием.

2. изоляция брыжеечных лимфатических узлов, кишечника и Пейера в патчи

  1. Усыпить мыши с использованием двуокиси углерода наркоза и средней шейки матки дислокации. Поместите курсор мыши на его спине и спрей с 70% этиловом спирте. Используйте ножницы, чтобы сделать разрез средней линии и открыть кожи и брюшной стенки подвергать брюшной полости.
  2. Найдите caecum и использовать щипцы для осторожно потяните caecum. Используйте щипцы для тщательно вправо в тонком кишечнике, подвергая всю цепочку млн, которая совмещена с двоеточием.
    Примечание: Карта верхней брыжеечной лимфатических узлов, цепи и лимфатической дренирования кишечника был ранее изображены13.
  3. Определите нижний узел в цепочке, расположенный ближе всего к слепой кишки. Используйте один набор щипцов для восприятия брыжейка/жир вокруг него и аккуратно удалить цепочке млн от дна к верхней, выщипывание жир от вокруг лимфатических узлов с другой набор щипцов.
  4. Положите цепь млн на бумажным полотенцем, смоченным урожай СМИ. Удалите брыжейка/жира подвижного цепь на башне бумаги и снимая жир с двумя наборами щипцов. Место в холодной урожай СМИ для последующих шагов изоляции млн.
    Примечание: (i) для обработки узлов не рекомендуется. Вместо этого возьмите брыжейка/жир вокруг них. (ii) важно, чтобы удалить столько брыжейка/жир как можно улучшить жизнеспособность клеток.
  5. Вырежьте в тонком кишечнике ниже привратник и выше слепой кишки с помощью ножниц. Вытяните ЖКТ медленно из подвздошной кишки в двенадцатиперстную кишку, используя один набор щипцов при удалении прилагаемый брыжейка/жир, используя другой набор щипцов.
  6. Место кишечника на бумажным полотенцем, смоченным урожай СМИ и дразнить любые оставшиеся брыжейка/жира покинуть с двумя наборами щипцов.
    Примечание: (i) не забудьте удалить столько брыжейка/жир как можно скорее для оптимального клеток урожайность и жизнеспособности. (ii) Держите кишечник, смоченным в этот и следующие шаги путем применения урожай СМИ периодически.
  7. Собирайте, удаляя их из кишечника с изогнутые ножницы патчи Пейера в. Используйте рассечения область или увеличительное стекло при необходимости (для начинающих); Большинство Пейера патчи должны быть видны наметанный глаз. Соберите 5-11 (типичный) Пейера из тонкой кишки. Место Пейера патчи в холодной урожай СМИ для последующих шагов изоляции.
    Примечание: Пейера в патчи малы, главным образом вокруг выпуклости в наружной стенки кишечника напротив линии брыжейка вложения.
  8. Используйте плоскую сторону щипцы и осторожно слайд из двенадцатиперстной кишки к подвздошной кишки высылать содержание фекальных и слизи. Повторите один раз, чтобы удалить большую часть слизи.
    Примечание: Неполное удаление слизи может уменьшить жизнеспособность клеток и выход. Тем не менее не забудьте слайд в кишечнике осторожно, чтобы избежать зачистки ворсинки или повреждения базальной мембраны.
  9. Используйте ножницы штраф с тупым концом на одной точке, вставьте тупой конец в кишечнике и разрезали кишечника продольно от двенадцатиперстной кишки к подвздошной кишки. Боков нарежьте открыл кишки ~ 2 см. Место части кишечника в 50-мл Конические трубки с 25 мл холодной урожай СМИ для последующих шагов изоляции.
    Примечание: Держать ножницы, смоченным СМИ поможет им легко скользить через кишечник.

3. изоляция лимфоцитов от индуктивных сайтов

  1. Изолируйте лимфоциты от млн, нежно отделения через стрейнер ячейки 70 мкм, с использованием плунжера шприц 3 мл. Вымойте клетки ситечко с 5 мл холодного урожай СМИ.
  2. Пелле млн клетки центрифугированием при 400 g × 5 мин при 4 ° C. Ресуспензируйте Пелле клеток в 1 мл холодной урожай СМИ. Количество жизнеспособных клеток, с помощью исключения Трипановый синий.
    Примечание: буфера lysis красных кровяных клеток может использоваться для удаления красных кровяных клеток, если кровотечение произошло во время удаления.
  3. Изолируйте лимфоцитов из Пейера, инкубации Пейера в 15 мл конические трубка, содержащая 5 мл подогретую коллагеназы раствора при 37 ° C и 220 об/мин за 30 мин.
  4. Вихрь для 15 s на максимальной скорости и фильтр переваривается ткани и супернатант в 50-мл Конические трубки через стрейнер ячейки 70 мкм. Аккуратно отделить оставшиеся куски ткани, с помощью поршень шприца 3-мл и вымыть клетки ситечко с 5 мл холодного урожай СМИ.
  5. Пелле Peyer патч клетки центрифугированием при 400 g × 5 минут при температуре 4 ° C и Ресуспензируйте Пелле клеток в 1 мл холодной урожай СМИ. Количество жизнеспособных клеток, с помощью исключения Трипановый синий.
    Примечание: Пейера патчи изоляция может иметь некоторые загрязняющие lamina propria лимфоцитов и интраэпителиальных лимфоцитов.

4. изоляция интраэпителиальных лимфоцитов из тонкой кишки

  1. Промойте части тонкой кишки три раза с 25 мл холодного урожай СМИ, инвертирование трубки 10 раз, давая части кишечника урегулировать и лить покинуть супернатант.
    Примечание: Куски ткани должен легко поселиться в нижней части трубки. Если они не делают, это признак, что слишком много брыжейка/жира остается прикрепленным или они связаны с пузырек воздуха.
  2. Добавить 20 мл раствора подогретую DTE в 50-мл конические трубка, содержащая кишечника штук и передачи в 50-мл силицированного колбу Эрленмейера содержащий перемешать бар. Движение при 37 ° C и 220 rpm на магнитной мешалкой для 20 мин использовать большой магнит на внешней колбы провести перемешать бар и ткани и решение перенести обратно в 50-мл Конические трубки.
  3. Вихрь трубки на максимум, установка для 10 с передачей супернатант в новой 50 мл Конические трубки через стрейнер ячейки 70 мкм, стараясь держать части ткани в оригинальной трубки. Не выбрасывайте супернатант; супернатант содержит интраэпителиальных лимфоцитов. Пелле клетки центрифугированием при 400 g × 5 мин при 4 ° C. Ресуспензируйте Пелле клеток в 10 мл холодной урожай СМИ и хранить на льду.
  4. Добавить 20 мл раствора подогретую DTE в 50-мл конические трубка, содержащая кишечника штук и передачи обратно в 50-мл силицированного Эрленмейер колбу, содержащий перемешать бар. Движение при 37 ° C и 220 rpm на магнитной мешалкой для 20 мин использовать большой магнит на внешней колбы провести перемешать бар и ткани и решение перенести обратно в 50-мл Конические трубки.
    Примечание: DTE является восстанавливающего агента, который обогащает интраэпителиальных лимфоцитов.
  5. Вихревой трубе при максимальной настройки для 10 с передачей супернатант через стрейнер ячейки 70 мкм в предыдущем трубка, содержащая клетки от супернатант первого лечения DTE (от шага 4.3).
    Примечание: Оставшиеся части кишечника используются для изоляции лимфоцитов из lamina propria. Контроль качества: Кусок ткани можно удалить и проверить гистологически обеспечить эпителиальные клетки присутствуют и базальной мембраны неповрежденными.
  6. Пелле клетки центрифугированием супернатант в 400 g × 5 мин при 4 ° C. Ресуспензируйте Пелле клеток в 8 мл раствора ГД 44% при комнатной температуре (RT).
  7. Передача 8 мл 44% DG решения/ячейку подвеска в 17 мм ø x 100 мм стиле 14-мл полипропиленовые раунд снизу. Подложка с 5 мл раствора DG 67% рт. Центрифуга на 1600 × g 20 мин на RT без использования тормозов.
    Примечание: Может быть предварительно обработанных трубки с бычьим сывороточным чтобы предотвратить прилипание к стенкам трубки клетки.
  8. Обратите внимание, что жизнеспособные клетки образуют группу (Баффи пальто) на 44% до 67% интерфейс, эпителиальные клетки и отмершие клетки находятся в слизистый фильм на верхней части градиента, и красные кровяные клетки находятся в гранулы. Снимите верхний слой градиента к в течение ~ 2 см интерфейса, вакуум-аспирации. Использование пипетки Пастера урожай Баффи пальто на интерфейс и передача их в 50-мл конические трубка, содержащая 40 мл холодной урожай СМИ.
  9. Пелле клетки центрифугированием при 400 g × 5 мин при 4 ° C. Ресуспензируйте Пелле клеток в 1 мл холодной урожай СМИ. Количество жизнеспособных клеток, с помощью исключения Трипановый синий.

5. изоляция Lamina Propria лимфоцитов из тонкой кишки

  1. Удаление эпителиальных клеток из кусочков ткани кишечника путем добавления 25 мл раствора подогретую ЭДТА в колбу, содержащая оставшиеся части кишечника. Настой перемешать при 37 ° C и 220 rpm на магнитной мешалкой для 30 min. использовать большой магнит на внешней колбы провести перемешать бар и тщательно удалить супернатант сохраняя кишечника штук в колбу.
    Примечание: (i) ЭДТА-кальция хелатором, что цели кальций зависимые узлы и продвигает отряд клеток кишечного эпителия. (ii супернатант должно быть ясно и могут быть использованы для изоляции IEC по желанию их коллекции.
  2. Повторите шаг 5.1.
    Примечание: Супернатант должна быть менее ясно после этого инкубации. Контроль качества: Кусок ткани можно удалить и гистологически проверены для обеспечения были удалены клеток кишечного эпителия и базальной мембраны неповрежденными. Пример из супернатант может также оцениваться проточной цитометрии для подтверждения что лейкоциты (CD45+ клетки) отсутствуют.
  3. Добавьте 50 мл RT урожай СМИ в колбу. Перемешать кратко, с магнитом. Пусть кишечных штук урегулировать и тщательно удалить супернатант.
    Примечание: Этот шаг обеспечивает удаление ЭДТА до коллагеназы пищеварение, как ЭДТА инактивирует коллагеназы по хелатирующих кальция, что имеет решающее значение для функции коллагеназы.
  4. Добавление флакон 30 мл раствора подогретую коллагеназы и движение кишечника штук при 37 ° C и 220 rpm на магнитной мешалкой для 45 мин.
  5. Передачи усваивается фильтрации через стрейнер 70 мкм клеток ткани и супернатант в 50-мл Конические трубки. Аккуратно отделить оставшиеся куски ткани, используя поршень шприца 3 мл пюре через фильтр. Промойте фильтр с 10 мл холодного урожай СМИ.
  6. Пелле клетки центрифугированием при 400 g × 5 мин при 4 ° C. Ресуспензируйте Пелле клеток в 8 мл раствора DG температура 44%.
  7. Передача 8 мл 44% DG решения/ячейку подвеска в 17 мм ø x 100 мм стиле 14-мл полипропиленовые раунд снизу. Подложка с 5 мл раствора DG 67% температуры окружающей среды. Центрифуга градиенты при комнатной температуре и 1600 × g 20 мин с без тормозов.
  8. Удаление жировой слой на вершине с вакуум-аспирацией. Использование пипетки Пастера урожай Баффи пальто на интерфейс и передача в 50-мл конические трубка, содержащая 40 мл холодной урожай СМИ.
  9. Пелле клетки центрифугированием при 400 g × 5 мин при 4 ° C. Ресуспензируйте Пелле клеток в 1 мл холодной урожай СМИ. Количество жизнеспособных клеток, с помощью исключения Трипановый синий.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Схематическое представление протокола изображен (рис. 1). Лимфоциты в пределах слизистой кишечника индуктивный и эффекторных сайты отчетливо организуются. Пейера в патчи (PP) и брыжеечных лимфатические узлы (млн.) содержат лимфоциты в хорошо организованной районах Т-клеток и B-клеток фолликулов, тогда как кишечного эпителия содержит лимфоцитов, которые распространяются более диффузно. Propria пластинки (LP) содержит диффузно распределенных лимфоцитов и лимфоц...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Подробный протокол представляется для изоляции лимфоцитов из кишечной слизистой индукционные (млн и PP) и эффектор (LP и IEL отсека) сайтов. Протокол был разработан чтобы сбалансировать ввод (время) и выходного (жизнеспособности и урожайность) для обеспечения максимальной производительности и результатов. Протокол также обеспечивает минимальный полигамное загрязнения между LP и IEL отсеков.

Несколько протоколов для изоляции иммунных клеток из тонкой кишки мыши были опубликованы

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Б.С.Ш поддерживается гранта NIH (R01 AI076457) и средства, предоставленные Университет Стоуни-Брук. Z.Q. поддерживается NIH Грант (K12 GM102778).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
HEPESFisher ScientificBP310-500
L-глютамин Sigma-aldrichG3126-100G
Life Technologies15140-122
ГентамицинLife Technologies15710-072
Гидроксид натрияFisher ScientificS318-500
RPMI 1640Life Technologies21870-076
Бикарбонат натрияFisher ScientificS233-500
Фетальная бычья сывороткаLife Technologies26140-079
10x Сбалансированный раствор соли ХэнксаSigma-aldrichH4641-500ML
1,4-дитиоэритритолSigma-aldrichD9680-5G
0.5M EDTA, pH 8.0Life Technologies15575-020
Хлорид кальция гексагидратSigma-aldrich21108-500G
Гексагидрат хлорида магнияSigma-aldrichM2670-100G
коллагеназа, тип ILife Technologies17100-017
DG градиентный стоковый раствор (Percoll) GE Healthcare17-0891-01
Буфер для лизиса эритроцитовBiolegend420301
70-&микро; Ситечко для клеток M Corning352350
14 мл Полипропиленовая трубка с круглым дномCorning352059
колбы Эрленмейера Kimble26500R-50mL
Магнитная мешалкаThermo Fisher50094596
мешалкаFisher Scientific14-512-148
Пенициллин-стрептомицин

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hooper, L. V., Macpherson, A. J. Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota. Nat Rev Immunol. 10 (3), 159-169 (2010).
  2. Brandtzaeg, P., Kiyono, H., Pabst, R., Russell, M. W. Terminology: nomenclature of mucosa-associated lymphoid tissue. Mucosal Immunol. 1 (1), 31-37 (2008).
  3. Lefrancois, L., Lycke, N. Isolation of mouse small intestinal intraepithelial lymphocytes, Peyer's patch, and lamina propria cells. Curr Protoc Immunol. , Chapter 3 Unit 3 19(2001).
  4. Sheridan, B. S., Lefrancois, L. Isolation of mouse lymphocytes from small intestine tissues. Curr Protoc Immunol. , Chapter 3 Unit 3 19(2012).
  5. Goodyear, A. W., Kumar, A., Dow, S., Ryan, E. P. Optimization of murine small intestine leukocyte isolation for global immune phenotype analysis. J Immunol Methods. 405, 97-108 (2014).
  6. Couter, C. J., Surana, N. K. Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes. J Vis Exp. (111), (2016).
  7. Koscso, B., Bogunovic, M. Analysis and Purification of Mouse Intestinal Dendritic Cell and Macrophage Subsets by Flow Cytometry. Curr Protoc Immunol. 114, 11-14 (2016).
  8. Goodman, T., Lefrancois, L. Expression of the gamma-delta T-cell receptor on intestinal CD8+ intraepithelial lymphocytes. Nature. 333 (6176), 855-858 (1988).
  9. Huleatt, J. W., Lefrancois, L. Beta2 integrins and ICAM-1 are involved in establishment of the intestinal mucosal T cell compartment. Immunity. 5 (3), 263-273 (1996).
  10. Sheridan, B. S., et al. gammadelta T cells exhibit multifunctional and protective memory in intestinal tissues. Immunity. 39 (1), 184-195 (2013).
  11. Sheridan, B. S., et al. Oral infection drives a distinct population of intestinal resident memory CD8(+) T cells with enhanced protective function. Immunity. 40 (5), 747-757 (2014).
  12. Romagnoli, P. A., et al. Differentiation of distinct long-lived memory CD4 T cells in intestinal tissues after oral Listeria monocytogenes infection. Mucosal Immunol. 10 (2), 520-530 (2017).
  13. Houston, S. A., et al. The lymph nodes draining the small intestine and colon are anatomically separate and immunologically distinct. Mucosal Immunol. 9 (2), 468-478 (2016).
  14. Lorenz, R. G., Newberry, R. D. Isolated lymphoid follicles can function as sites for induction of mucosal immune responses. Ann N Y Acad Sci. 1029, 44-57 (2004).
  15. Kim, S. K., Reed, D. S., Heath, W. R., Carbone, F., Lefrancois, L. Activation and migration of CD8 T cells in the intestinal mucosa. J Immunol. 159 (9), 4295-4306 (1997).
  16. Huleatt, J. W., Lefrancois, L. Antigen-driven induction of CD11c on intestinal intraepithelial lymphocytes and CD8+ T cells in vivo. J Immunol. 154 (11), 5684-5693 (1995).
  17. Van Damme, N., et al. Chemical agents and enzymes used for the extraction of gut lymphocytes influence flow cytometric detection of T cell surface markers. J Immunol Methods. 236 (1-2), 27-35 (2000).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи