Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Лаборатория воспитания стабильной мух и других Muscoid Diptera

8.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57341

⸱

3 августа 2018 г.

 ,  ,  , 
1Agroecosystems Management Research Unit, ARS-USDA

В этой статье

Краткое содержание

Приводится процедура для выращивания стабильной мух (Stomoxys calcitrans). В процедуре используется локально доступных материалов для диеты компонентов, оборудования и предметов снабжения.

Аннотация

Стабильные мухи, Stomoxys calcitrans, являются серьезных вредителей животных, людей, компаньон животных и дикой природы во всем мире. В течение последних 20 + лет изменения в агрономической практики привели к серьезной вспышки стабильной мух в нескольких странах. Эти вспышки сорвали животноводческого производства и человека отдыха в результате общественных потребностей для расширения научных исследований и управления усилия для этого вредителя. Представлен простой и недорогой процедурой для выращивания стабильной мух для лабораторных исследований. В процедуре используется локально доступных диетические компоненты, оборудование и материалы. Процедура может быть приспособлен для выращивания других muscoid мух, включая лицо Муха (Осенняя Муха), рога fly (Haematobia irritans) и дом fly (Муха domestica). Процедура производит стабильной летать puparia среднем 12,5 мг и ~ 35% яйцо для взрослых выживания. Примерно 3000 мух производятся в каждый лоток.

Введение

Стабильные мух, Stomoxys calcitrans (L.), являются мухи hematophagous чьи болезненные укусы нарушить поведение выпаса скота, причинять боль и страдания компаньон животных и нарушить рекреационной деятельности человека во всем мире. Незрелые стабильной мух развиваются в заквашивать растительного вещества, часто загрязненные отходы животноводства. Изменение агрономической практики и культуры подготовили серьезные вспышки стабильной мух в пожнивных остатков, овощи в Австралии1, сахарного тростника в Бразилии2и ананас в Коста-Рика3. Хотя только 14 стабильной мух на животное, считаются экономического порога4, во время недавних вспышек5были сделаны замечания более чем 2000 мух на животное. Такие уровни заражения снизить производительность хоста практически до нуля и может привести к смертности6. В результате агрономически связаны вспышки стабильной мух получают повышенный интерес и резко возрос спрос на лабораторные колонии.

Что касается всех holometamorphic насекомых стабильной мух получить все питательные вещества, необходимые для роста незрелых или личиночной стадии. Таким образом важным компонентом системы воспитания является личиночной диеты или субстрат. Стабильные летать личинок наблюдается развивающихся в широком диапазоне субстратов в поле7 и они зависят от микробной сообщество субстрат8,9. Природные личиночной субстратов в основном состоят из разлагающихся или брожения растительных материалов, часто загрязненные азотистые отходы.

Для лабораторных воспитания, fly недеформирующихся личинок обычно состоят из растительного материала и источник добавлен азота. Многочисленные материалы были использованы для стабильной летать личиночной диеты. Первая личиночная диеты передразнил природных субстратов и включены заквашивать овсяной соломы и лошадь или коровьего навоза10,11. Источники углеводов включают пшеничные отруби12,13,14, люцерны еды12,13,14 и коммерческой разработке разработанных химических специальностей Производители ассоциации (CSMA, 33% пшеничных отрубей, 27% люцерны еды, 40% пивные дрожжи гранулы)13,14,,1516. Азота источники включают дрожжи подвеска12, рыбной муки и бикарбонат аммония17. Инертные наполнители материалы часто включаются в диеты, включая Овсяная шелуха12, жома13, вермикулит16, щепы13,18 и гранулированных арахис корпусов14.

Основная цель воспитания Лаборатория является производить продукт, который как физиологически похож на «дикого типа «как можно скорее, с тем, что лабораторные эксперименты принесет результаты, отражающие те поля населения. Это требует свернут в-для выведения и селекции для сохранения генетического разнообразия и пищевые ресурсы быть сопоставимы в поле. Вторичные цели заключаются в том, чтобы свести к минимуму расходы и труда. Одним из основных компонентов минимизации расходов является использование имеющихся на местах диетические компоненты. Осенняя жигалка воспитания представлена система была разработана для достижения этих целей.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. яичные сбора (рис. 1)

  1. Подготовить то Кубок, один конец полотна в ~ 500 мл стакан с водой теплой (~ 40 ° C). Перекрытие стороны Кубка и исправить с резинкой. Сложите свободный конец полотнища обратно в верхней части чаши.
  2. Место, где то Кубок в клетке, 8-10 день старого мух для ~ 2 h. беременных женщин стабильной мухи будут разведению на ткани.
  3. Удалите то Кубок из клетки и промойте яйца офф egging ткань в маленькой кастрюле с мыть бутыль.

2. подготовить личиночной воспитания Пан

  1. Подготовка среднего (количества для выращивания 1 Пан)
    1. Объединить пшеничные отруби (500 g), стружки (200 г) и рыбной муки (115 g) в 10 Л пластиковых блюдо Пан и хорошо перемешайте.
    2. Добавить бикарбонат аммония (50 g) к воде (~ 25 ° C, 1600 мл) и перемешать до растворения.
    3. Водный раствор добавьте сухие ингредиенты и перемешать, чтобы не unwetted материал. Уровень среднего в кастрюлю, но не сжимать.
  2. Добавить стабильной летают яйца
    1. Сделайте неглубокие борозды в средне Длина лотка.
    2. Депозит 1 мл стабильных летать яиц (~ 8000 яйца) в борозду с пипеткой яйцо (рис. 2).
      Примечание: Яйцо пипетки, сделанные резки пластиковых окончил пипетки в нужный момент, вставка 100 сетки экрана и склеивания пипеткой обратно вместе.
    3. Обложка яйца с тонким слоем среднего для предотвращения высыхания.
    4. Обложка кастрюлю с наволочку, рядом с резинкой и метки. Место кастрюли в личиночной комнате (23 ± 2 ° C, 30 – 50% RH и 12:12 [L:D] h фотопериода).
      Примечание: Развития личинок занимает 10-14 дней с момента откладки яиц.

3. куколки обработки, личинки двигаться к краю среды 7-9 дней после откладки яиц и Pupariate на 13 или 14 дней

  1. Совок puparia, главным образом расположенных вокруг краев Пан под корочкой, которая образует на поверхности среды, вне и помещены в чистую кастрюлю.
  2. Заполните кастрюлю, с puparia, ½ до ¾ полной воды. Разбейте комки puparia и среднего. Пшеничные отруби и белковые компоненты среды раковина во время puparia > 1 день старый поплавок19.
  3. Удаление плавучих материалов, puparia и некоторых компонентов среды с дуршлаг и мыть через серию сита (#5, #7, #12, #20) для удаления оставшихся среднего. #12 сито собирает puparia и #20 держит твердых отходов въезд в канализацию. Мойка puparia между сита с раковины опрыскиватель.
  4. Промывайте puparia, в сито #12, в чистую кастрюлю. Заполните кастрюлю ½ полной воды. Налить плавающей puparia в дуршлаг и позволить лишнюю воду слить.
  5. Передача осушенных puparia сушки экран с вентилятором и оставить до полного высыхания (рис. 3).

4. куколки полка, альтернативный метод для сбора Puparia-куколки полка18

Примечание: Полка изготовлена из куска пластиковой вырезать из конца сковороде блюдо 10 Л (10,2 см высота x 10,2 см Ширина x 31,9 см длиной).

  1. Подготовка среднего, как описано в пункте 2.1. Конические среднего в сковороду с ~2.5 см глубоко на один конец ~7.5 см глубоко на другой.
  2. Место полка на носителе в мелкой воспитания Пан и лентой, чтобы предотвратить личинок от сканирования вместе с полки (рис. 4).
    1. Пропитать губку (~14.5 x 9.0 x 4.5 см3, регенерированной целлюлозы) и оберните его в воды пропитанной ткани (30,5 x 42 см2, хлопок) и место на полке около половины дюйма от носителя.
  3. Добавить яйца, как описано в 2,2 и приступить, как раньше.
    1. Проверьте посуду ежедневно для обеспечения влажной губкой.
  4. Промыть puparia от шельфа, губки и ткани в чистую посуду кастрюлю и налить в дуршлаг через 14 дней после откладки яиц.

5. контроль качества

  1. Взвесьте все из puparia, производимых в Пан (общий вес.).
  2. Изолировать 100 puparia, весят и помещены в 9 см Петри.
  3. Фото и секс взрослых ~ 5-8 дней, чтобы определить скорость появления и соотношение полов. Хранить Петри с возникшей взрослых в морозильник для подсчета на более поздний срок, если необходимо. Мухи являются сексуальны, форма их глаз и ширину лобно орбитальных пластины20 или гениталии под низким увеличением.
  4. Запись общий вес, вес 100 puparia, и количество образовавшихся взрослых мужчин и женщин.

6. Подготовка крови

  1. Соберите свежей крови крупного рогатого скота от местных скотобойни в 19 Л ведра, содержащие 70 g tribasic натрия цитрат дигидрат в 500 мл воды. Движение крови энергично для 5-10 мин и вернулся в лабораторию.
  2. Штамм крови через дуршлаг для удаления сгустки и разделена на 2 Л контейнеров, этикетка с указанием даты сбора и хранить в холодильнике (-20 ° C).
  3. Удаление контейнера из морозильника и места в холодильнике 2 дней до необходимости. Кровь может использоваться для ~ 2 недели после размораживания и хранить в морозильной камере на срок до 1 года.

7. Взрослый содержание

  1. Подготовка клетки, линия клетке дно с мясник бумаги для облегчения очистки.
  2. Место 50 г сухих стабильной летать куколки (~ 3,500) в каждой клетке. Взрослые Эклоз несколько часов, чтобы пару дней после обработки куколки.
  3. Место свежая кровь пропитанной женское салфетку на вершине каждой клетке для кормления. Начало кормления в течение 24 ч взрослых eclosion и повторять ежедневно до за день до откладки яиц (9 – 10 дней после появления).
  4. После откладки яиц (раздел 1) место Кейдж в морозильник для 4-8 ч, а затем очистить путем удаления бумаги, ополаскивание экскременты от стенки и пол с горячей водой и очистки всех поверхностей с стиральный порошок и хлорного отбеливателя. Промойте клетки с горячей водой и дайте высохнуть.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Личинки pupariate 10 – 14 дней и взрослых выйти 14 – 16 дней после откладки яиц. Время генерации, яйцо в яйцо, составляет ~ 24 дней. Воспитание данные за Май 2013 до января 2017 с тремя различными ссыпая агентами и две колонии представлены на рисунке 5. Коттонвуд дал лучший выход, 3867 ±1442 (figure-results-1 ± стандартное отклонение) куколок, весом 12,5 мг ±1.6 с 74% ±19 eclosion производство 2872 ±1294 взросло...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Стабильные мух можно найти в широкий спектр субстратов в природе и может воспитываться во многих типах СМИ в лаборатории. Мы использовали стружки и вермикулит как наполнитель агентов. Вермикулит работал хорошо, но сделал отделения puparia от воспитания среднего трудным и был дорогим (~$0.60/pan). Возможно из-за добавлен строгости отделения puparia от среднего, eclosion был также ниже, с вермикулитом, 57% против 75% для стружки. Коттонвуд стружки были сопоставимы с вермикулитом, но порой трудно приобрести. Наиболее важным...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Энтони Weinhold и многочисленных студентов, которые работали с нами за годы для технической поддержки, а также предложения по улучшению нашего насекомых, воспитание процедур.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
DiamaltPremier Malt Products, Inc., Сэддл Брук, Нью-Джерси2540
CSMA Fly mediaPurina Animal Nutrition, Arden Hills, MN5S6Z
Thin Maxi PadThe Tranzonic Co., Кливленд, Огайо, США5001M
Теленок MannaMannaPro, Честерфилд, Миссури, СШАManna Pro
Бикарбонат аммонияСпектр химических веществ Manufacturing Corp, Гардена, КалифорнияA1125
Пшеничные отруби,Грубая мельница Siemer Milling Company, Тевтополис, Иллинойс
Древесная стружкаТракторная компания, Брентвуд, Теннесси502770699
FishmealConsumer Supply Distributing, Северный Су-Сити, SDF1550
Клетки для взрослыхВсе алюминиевые оконные компании, Линкольн, НебраскаКастом.45 & раз; 45 & раз; 45 см, 18 и раз; Алюминиевая ширма 16 меш, доступ к трикотажу
9 & 28 см черная хлопчатобумажная тканьRobert Kaufman Fabrics, Лос-Анджелес, КалифорнияK040-114Ткань для яиц
10 л пластиковые сковороды для посудыRubbermaid, Саратога Спрингс, Нью-ЙоркFG2951ARWHTСковороды для личинок
Stockinette, хлопок, рулон 12 дюймов x 25 ярдовTex-Care Medical Company, Берлингтон, Северная Каролина91311-225

Ссылки

  1. Cook, D. F., Dadour, I. R., Keals, N. J. Stable fly, house fly (Diptera: Muscidae), and other nuisance fly development in poultry litter associated with horticultural crop production. J. Econ. Entomol. 92 (6), 1352-1357 (1999).
  2. Dominghetti, T. F., de Barros, A. T., Soares, C. O., Cançado, P. H. Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae) outbreaks: current situation and future outlook with emphasis on Brazil. Rev. Bras. Parasitol. Vet. 24 (4), 387-395 (2015).
  3. Solórzano, J. -A., Guilles, J., Bravo, O., Vargas, C., Gomez-Bonilla, Y., Bingham, G., Taylor, D. B. Biology and trapping of stable flies (Diptera: Muscidae) developing in pineapple residues (Ananas comosus) in Costa Rica. J. Insect Sci. 15 (1), 145(2015).
  4. Berry, I. L., Stage, D. A., Campbell, J. B. Populations and economic impacts of stable flies on cattle. Trans. Am. Soc. Agric. Eng. 26, 873-877 (1983).
  5. Taylor, D. B. Area-wide management of stable flies. Area-wide management of insect pests. Vreysen, J., Hendrichs, R., Cardoso Pereira, R. , in press (2017).
  6. Bishopp, F. C. The stable fly (Stomoxys calcitrans L.), an important live stock pest. J.Econ. Entomol. 6 (1), 112-126 (1913).
  7. Hogsette, J. A., Ruff, J. P., Jones, C. J. Stable fly biology and control in northwest Florida. J. Agric. Entomol. 4 (1), 1-11 (1987).
  8. Lysyk, T., Kalischuk-Tymensen, L., Selinger, L., Lancaster, R., Wever, L., Cheng, K. Rearing stable fly larvae (Diptera: Muscidae) on an egg yolk medium. J. Med. Entomol. 38, 382-388 (1999).
  9. Romero, A., Broce, A., Zurek, L. Role of bacteria in the oviposition behaviour and larval development of stable flies. Med. Vet. Entomol. 20, 115-121 (2006).
  10. Glaser, R. W. Rearing flies for experimental purposes with biological notes. J. Econ. Entomol. 17 (4), 486-496 (1924).
  11. Melvin, R. Physiological studies on the effect of flies and fly sprays on cattle. J. Econ. Entomol. 25 (6), 1151-1164 (1932).
  12. Doty, A. E. Convenient method of rearing the stable fly. J. Econ. Entomol. 30 (2), 367-369 (1937).
  13. Bridges, A. C., Spates, G. E. Larval medium for the stable fly Stomoxys calcitrans (L.). Southwest. Entomol. 8 (1), 6-10 (1983).
  14. Hogsette, J. A. New diets for production of house flies and stable flies (Diptera: Muscidae) in the laboratory. J. Econ. Entomol. 85 (6), 2291-2294 (1992).
  15. McGregor, W. S., Dreiss, J. M. Rearing stable flies in the laboratory. J. Econ. Entomol. 48 (3), 327-328 (1955).
  16. Goodhue, L. D., Cantrel, K. E. The use of vermiculite in medium for stable fly larvae. J. Econ. Entomol. 51 (2), 250(1958).
  17. Friesen, K., Berkebile, D. R., Zhu, J. J., Taylor, D. B. Augmenting laboratory rearing of stable fly (Diptera: Muscidae) larvae with ammoniacal salts. J. Insect Sci. 17 (1), 1-6 (2017).
  18. Berkebile, D. R., Weinhold, A. P., Taylor, D. B. A new method for collecting clean stable fly (Diptera:Muscidae) pupae of known age. Southwest. Entomol. 34 (4), 469-476 (2009).
  19. Champlain, R. A., Fisk, F. W., Dowdy, A. C. Some improvements in rearing stable flies. J. Econ. Entomol. 47 (5), 940-941 (1954).
  20. Zumpt, F. The stomoxyine biting flies of the world. , Gustav Fischer Verlag. Stuttgart. (1973).
  21. Wienhold, B. J., Taylor, D. B. Substrate properties of stable fly (Diptera: Muscidae) developmental sites associated with round bale hay feeding sites in eastern Nebraska. Environ. Entomol. 41 (2), 213-221 (2012).
  22. Friesen, K., Berkebile, D. R., Wienhold, B. J., Durso, L., Zhu, J., Taylor, D. B. Environmental parameters associated with stable fly (Diptera: Muscidae) development at hay feeding sites. Environ. Entomol. 45 (3), 570-576 (2016).
  23. Albuquerque, T. A., Zurek, L. Temporal changes in the bacterial community of animal feces and their correlation with stable fly oviposition, larval development, and adult fitness. Front. Microbiol. 5 (590), 1-9 (2014).
  24. Bailey, D. L., Whitfield, T. L., LaBrecque, G. C. Laboratory biology and techniques for mass producing the stable fly, Stomoxys calcitrans (L.) (Diptera: Muscidae). J. Med. Entomol. 12 (2), 189-193 (1975).
  25. Smith, J. P., Hall, R. D., Thomas, G. D. Field studies on mortality of the immature stages of the stable fly (Diptera: Muscidae). Environ. Entomol. 14 (6), 881-890 (1985).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Разведение стабильной мухиStomoxys calcitransметод сбора яицразвитие личинокизоляция куколокприготовление среды для мухпротокол кормления кровьюмониторинг здоровья колонииадаптация мух семейства Muscidaeлабораторная энтомология
Лаборатория воспитания стабильной мух и других Muscoid Diptera
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.