В этой статье мы демонстрируем живых изображений отдельных червей, используя microfluidic пользовательского устройства. В устройстве несколько червей, индивидуально ограничиваются отдельные камеры, позволяя мультиплексированных продольной наблюдения различных биологических процессов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Microfluidic платформа для продольной Imaging в Caenorhabditis elegans
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В течение последнего десятилетия microfluidic методы были применены для изучения малых животных, в том числе нематоды Caenorhabditis elegansи доказали свою полезность как удобный живой платформа отображения информации, предоставляя возможности для точного управления экспериментальных условиях в режиме реального времени. В этой статье мы демонстрируем живых изображений отдельных червей, используя WormSpa, ранее опубликованных пользовательских microfluidic устройство. В устройстве несколько червей, индивидуально ограничиваются отдельные камеры, позволяя мультиплексированных продольной наблюдения различных биологических процессов. Чтобы проиллюстрировать возможности, мы провели доказательства принцип экспериментов в которых червей были инфицированы в устройстве с патогенных бактерий, и динамики экспрессии генов иммунной реакции и откладки непрерывно контролируются в отдельных животных. Простая конструкция и эксплуатация данного устройства делают его пригодным для пользователей без предыдущего опыта с на основе microfluidic экспериментов. Мы предлагаем, что такой подход будет полезным для многих исследователей, заинтересованных в продольных наблюдения биологических процессов при четко определенных условиях.
Введение
Изменения в условиях окружающей среды может привести к активации генетических программ сопровождается индукции и подавление экспрессии определенных генов1,2. Эти кинетическая изменения могут быть переменной среди тканей, в том же животных и между различными животными. Исследования таких генетических программ поэтому призываем методов, которые позволяют продольной томографии отдельных животных и точный динамический контроль состояния окружающей среды.
В последние годы microfabricated оптимизированных устройств были использованы для изучения многих аспектов реакции и поведения в мелки....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Ниже протокол использует WormSpa5, ранее описанные microfluidic устройством для продольной томографии червей. Изготовление WormSpa (начиная с CAD-файлов, которые могут быть получены от авторов по запросу) проста, но требует некоторых знаний. В большинстве случаев изготовление легко может быть сделано путем основной объект или коммерческая компания, которая предоставляет такие услуги. При изготовлении устройство, убедитесь указать, что высота функции — 50 мкм.
1. Экспериментальная установка
- Смонтируйте устройство microfluidic на Перевернутый флуоресценции микроскоп с моторизованного столика.
- Место ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Возраст синхронизированы молодых взрослых червей (46 часов пост личиночной арест L1 при 25 ° C)12 были загружены в устройство, как описано в протоколе. Черви индивидуально были расположены в отдельных каналов, позволяя продольной измерение реакции животных на возбудителя. Когда успешный эксперимент, большинство червей остаются в их каналах в течение всего эксперимента. В этом случае просто, поместив их канал в визуализации пути, избегая необходимости активно найти .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Microfluidic инструменты обеспечивают многочисленные преимущества в изучении червей. Изображений в PDMS устройство обеспечивает более высокое качество изображения по сравнению с стандартной плиты агар NGM. Несколько изображений могут быть взяты из одного червя, в отличие от традиционных методов, в которых животные взял от плиты и монтируется на микроскопа для изображений. Кроме того микроокружение, в котором проживают черви могут храниться постоянной или модулированные по желанию, позволяя точное сопоставление состава ок.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Это исследование было поддержано национального научного фонда через гранты PHY-1205494 и MCB-1413134 (EL) и Национальный исследовательский фонд Кореи Грант 2017R1D1A1B03035671 (KSL).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| WormSpa | Н/Д | Н/Д | Файл САПР для WormSpa доступен в лаборатории Левина. |
| Составной микроскоп | Zeiss | AxioObserver Z1 | Инвертированный флуоресцентный микроскоп с моторизованным столиком |
| Шприцевой насос | New Era Pump Systems | NE-501 | |
| Tubing | SCI Scientific Commodities Inc. | BB31695-PE/5 | 0.034" (0,86 мм) внутренний диаметр x 0,052 дюйма (1,32 мм) O.D |
| Наконечник шприца | CMLsupply | 901-20-050 | 20 калибр x 1/2" тупой наконечник из нержавеющей стали канюля |
| Шприцевой фильтр | PALL | 4650 | Acrodisc 32 мм Шприцевой фильтр с 5 мкм Супор мембранный |
| шприц | Qosina | C3307 | 10 мл Шприц с наружной резьбой Luer Lock |
| 3-ходовой клапан | ColeParmer | FF-30600-23 | Большой диаметр 3-ходовой, с наружным замком, запорные краны, 10 / уп. Нестерильный |
| установочный штифт | McMaster-Carr | 90145A317 | 18-8 Установочные штифты из нержавеющей стали (диаметр 1/32 дюйма x 1/2 дюйма Lg.) |
| Микроцентрифужная пробирка с низким связыванием | Corning | CL S3206 | 0,65 мл микроцентрифужная трубка с защелкивающейся крышкой с низким связыванием |
Ссылки
- Lopez-Maury, L., Marguerat, S., Bahler, J. Tuning gene expression to changing environments: from rapid responses to evolutionary adaptation. Nat Rev Genet. 9 (8), 583-593 (2008).
- de Nadal, E., Ammerer, G., Posas, F. Controlling gene expression in response to stress.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
