Методическая статья

Поколение большого числа миелоидного прародителями и дендритных клеток прекурсоров из мышиных костного мозга с помощью Роман ячейку Сортировка стратегия

DOI:

10.3791/57365

⸱

10 августа 2018 г.

 , 
1Department of Biological Sciences, Auburn University

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы предоставляем метод для выявления и изоляции большого числа ГМ-КСФ инициативе миелоидных клеток, используя высокую скорость сортировки клеток. Пять различных популяций (общие миелоидного прародителями, предшественники гранулоцитов/макрофагов, моноциты, моноцитарных макрофагов и моноцитарных DCs) могут быть определены на основе Ly6C и CD115 выражения.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Культур моноцитарных дендритных клеток (moDC) из костного мозга мыши с помощью гранулоцитарно-макрофагальный колонии стимулирующий фактор (ГМ-КСФ) недавно были признаны быть более неоднородными, чем ранее высоко. Эти культуры обычно содержат также моноцитарных moDC макрофагов (moMac) и даже некоторые менее развитые клетки, такие как моноцитов. Цель настоящего Протокола заключается в том, предоставить согласованный метод для выявления и отделения многих типов клеток, присутствующие в этих культурах, как они развиваются, так, что их конкретные функции может быть дальнейшее расследование. Стратегию сортировки, представленные здесь разделяет клетки сначала на четыре населения на основе выражения Ly6C и CD115, оба из которых выражаются временно клетками, как они развиваются в ГМ-КСФ driven культуры. Эти четыре группы населения включают общие миелоидного прародителями или CMP (Ly6C-, CD115-), предшественники гранулоцитов/макрофагов или GMP ("Ly6C +", "CD115-"), моноцитов (Ly6C +, CD115 +) и моноцитарных макрофаги или moMac (Ly6C-, CD115 +). CD11c также добавляется в стратегию сортировки различать две популяции в пределах Ly6C-, CD115-население: CMP (CD11c-) и moDC (CD11c +). Наконец две популяции могут различаться далее в пределах Ly6C-, CD115 + населения, основанные на уровень MHC класса II выражение. MoMacs Экспресс более низкий уровень MHC класса II, в то время как прекурсор моноцитарных DC (moDP) выражает выше MHC класса II. Этот метод позволяет для надежной изоляции несколько развивающих собственный населения в цифрах достаточно для различных анализов, функциональной и развития. Мы выделяем один из таких функциональных индикация, дифференциальной ответы этих типов клеток для стимуляции с Pathogen-Associated молекулярных структур (PAMPs).

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Культивирование клеток костного мозга мышиных с цитокина гранулоцитарно-макрофагальный колонии стимулирующий фактор (ГМ-КСФ) широко используется как метод для создания моноцитарных дендритных клеток (moDC; также известен как воспалительные DC) в больших количествах 1, 2,3,4,5. Эти клетки были чрезвычайно полезными в различных исследований дендритных клеток (DC) функция 6,,78. Как правило эти клетки костного мозга мышиных культивировали для 6-8 дней и затем используются для изучения дендритные клетки функции 5. Эти культуры давно считается основном однородной, состоящий из большинства дифференцированных moDC. Совсем недавно стало ясно, что в конце этого периода 6-8 день культуры, есть действительно много moDC, а также большое подмножество дифференцированной моноцитарных макрофагов (moMacs) 9,10,11. Далее наши собственные исследования расширили эти результаты демонстрируют, что другие подмножеств менее развитых клеток, таких как moDC прекурсоров (moDP) и моноцитов, остаются в культурах низкой частотой даже после 7 дней 10. Таким образом исследования дендритных клеток (DC) функции с использованием клеток, порожденных этой системы может отражать ответы широкой когорты типов клеток, чем ранее высоко.

Мы узнали многое из сферы исследования ГМ-КСФ генерируется moDC, касающиеся функции этих клеток в заключительной стадии дифференцировки 12,,1314. Однако, мы понимаем значительно меньше о пути развития этих клеток 2,,1516 и как и когда они выставки конкретные функции, такие как: реагировать возбудителя связанные молекулярные Шаблоны (PAMPs), фагоцитоз, обработки и презентации антигена 13и антибактериальная активность. Протокол для изоляции большого числа обычных Flt3L-driven DC прародителями и прекурсоров был сообщил 17. Изоляция этих различных групп населения была достигнута с помощью Карбоксифлуоресцеина succinimidyl эфира (CFSE)-окрашенных клеток костного мозга (для отслеживания деления клеток) и культуры в Flt3L на 3 дня. Клетки затем были истощены построчная оплата позитивных клеток и рассортированы прародителем и прекурсоров населения, основанные на CD11c выражение 17. Другой подход Leenen в группы для выявления ранних прародителями DC в ГМ-КСФ driven культуры был для сортировки клеток, основанные на CD31 и Ly6C 18. Первоначальной целью было создать аналогичный метод для получения прародителями и прекурсоров ГМ-КСФ driven moDC. Из-за определенных ячеек типы, созданные с помощью GM-CSF мы адаптировали подход и сортировка стратегию, основанную на экспрессию молекул, которые были высказаны на ранних и более поздних стадиях развития. Мы в конечном счете определил, что Ly6C, CD115 (РСУ-1 рецепторов), и CD11c были лучшие маркеры для разграничения этих клеток типов 10.

Здесь мы представляем метод для изоляции клеток в несколько различных этапов развития по пути дифференциации, движимый ГМ-КСФ: общие миелоидного Progenitor (CMP), гранулоцитарно-макрофагального Progenitor (GMP), моноцитов, макрофагов, моноцитарных (MoMac) и моноцитарных DC (MoDC). MoMac населения можно далее подразделить на основе на уровень MHC класса II выражение, выявление прекурсоров moDC населения (moDP) 10. Мы используем высокоскоростной флуоресценции активированный ячейку Сортировка (FACS) стратегия изолировать эти 5 населения на основе выражения, Ly6C, CD115 и CD11c. Затем мы показываем изучение этих клеток в функциональных анализов, раскрывая свои ответы PAMP стимуляции.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все животные работы был одобрен Auburn университета институциональных животное уход и использование Комитетом согласно рекомендациям, изложенным в руководстве для ухода и использования лабораторных животных национальных институтов здоровья.

1. Подготовка к коллекции костного мозга

  1. Подготовить полный СМИ 250 мл, добавив раствором Розуэлл парк Мемориальный институт (RPMI) 1640 среды с 10% плода телячьей сыворотки, глютамин 2 мм и 50 мкм 2-меркаптоэтанол в верхней части 0,22 мкм вакуумные колбы фильтр и вакуум.
    Примечание: Полный среднего может храниться при температуре 4 ° C на срок до 2 месяцев.
  2. Подготовка 70% этанола раствор путем смешивания 350 мл 100% этанола с 150 мл стерильного H2O в 500 мл флакон.
  3. Набор центрифуги до 4 ° C.
  4. Стерилизуйте щипцы, скальпель и ножницы в 70% этиловом спирте.
  5. С помощью Серологические Пипетки, добавьте 5 мл полной СМИ три чашки Петри 60 мм.
  6. С помощью Пипетки серологические, добавьте 30 мл полной СМИ в 50 мл Конические трубки.

2. сбор клеток костного мозга мышиных

  1. Усыпить мыши C57BL/6 от наркоза CO2 в соответствии с правилами, установленными 2013 американской ветеринарной медицинской ассоциации (AVMA) руководящие принципы эвтаназии.
  2. Удалите и Стрип задних ног.
    1. Saturate задние ноги и туловище с 75% этанола и сделать неглубокие порезы через кожу вокруг тазобедренного сустава с изогнутой ткань ножницами. С помощью щипцов, твердо тяните кожу от бедра к щиколотке, раскрывая мышцы. Используйте ножницы, чтобы удалить кожного лоскута.
    2. Удалите всю заднюю ногу, проходящем через кости непосредственно над бедренной кости/тазобедренного сустава.
      Примечание: в дополнение к стерилизации области, этанол будет помощь в предоставлении сокращение чистого и предотвратить загрязнение образцов волос.
    3. Если ноги будут переведены на новое место для уборки костного мозга, опускайте ноги в полной СМИ.
  3. Работая в стерильных биобезопасности кабинета, передать ноги один из ранее подготовленных Петри.
  4. Используйте ножницы, чтобы вырезать только ниже лодыжки и тщательно удалить как можно больше мышц и упругой соединительной ткани как можно скорее. Передачи очищены кости на второй подготовленный Петри блюдо.
    Примечание: Хотя это не обязательно для удаления всех мышц, слишком много оставшихся ткани может сделать это трудно вымывать костного мозга.
  5. Отдельные, бедра, колена и голени.
    1. С помощью щипцов, держать ногу в колене и найдите костного мозга.
      Примечание: костного должны быть видны как слабая красная линия внутри полость кости на верхней части бедра и голени в конце.
      1. С помощью ножниц, сделайте три отрубов следующим образом.
        1. Вырежьте голени чуть выше где костного мозга, как представляется, конец.
        2. Вырежьте чуть ниже коленного сустава.
        3. Вырежьте чуть выше коленного сустава.
        4. Если тазобедренного сустава до сих пор подключен к бедренной кости, вырежьте чуть ниже тазобедренного сустава.
      2. Возвращение трех фрагментов на Петри блюдо и повторите этот процесс на другой ноге.
  6. Флеш костного мозга от бедра и голени.
    1. Заполните шприц 10 мл с полным СМИ от 50 мл Конические трубки и крышка с иглой 23 G.
    2. Проведение кости с щипцами выше третий подготовленный Петри, вставить иглу в костный канал и нажмите средств массовой информации, смыв клетки (которые могут возникнуть как нетронутыми «пробка» или несколько кластеров). Повторяйте до тех пор, пока не больше цвета можно увидеть через кости. Наполните шприц с СМИ в случае необходимости.
  7. Раздавить эпифизов.
    1. Хотя до сих пор в втором Петри, крепко коленного сустава с щипцами и пюре колени с кончика шприца. Продолжайте, пока эпифизов больше не красный.
  8. С помощью шприца, клетки перехода от второго и третьего Петри Тюбик 50 мл. Распад вверх сгустки, нежно закупорить вверх и вниз. Старайтесь не создавать пузыри. Центрифуга на 250 x g при 4 ° C на 10 мин.
  9. Лизировать клетки крови
    1. Удалить супернатант с Серологические Пипетки, выбить Пелле, стряхивая и лизируют красные кровяные клетки путем инкубации в 1 мл буфера Lysis ACK (аммония хлорид калия) за 1 мин при комнатной температуре.
    2. С помощью Пипетки серологические, добавьте 40 мл буфера HBSS (Хэнкс сбалансированного солевого раствора).
  10. С помощью Пипетки серологические, фильтр клетки хотя стрейнер ячейки 70 мкм в новой 50 мл Конические трубки. Центрифуга на 250 x g при 4 ° C на 10 мин.
  11. С помощью Серологические Пипетки, удалите супернатант и вымыть клетки с 40 мл полной СМИ. Центрифуга на 250 x g при 4 ° C на 10 мин.
    Примечание: На данном этапе положительные лимфоциты линии можно удалить СУИМ или магнитные столбец очистки. Однако лимфоциты не поддерживаются долгосрочной перспективе в культуре. Хотя большое количество позитивных клеток линии присутствуют в Ly6C-CD115-населения в костного ex vivo, почти все отсутствуют в день 5 (рис. 2).
  12. Использование Пипетки серологические, удалить супернатант и культуры клеток костного мозга в полной СМИ с 10 нг/мл рекомбинантных мыши ГМ-КСФ на плотности 1 х 106 клеток/мл.
    Примечание: Как правило, 4 x 107 всего клетки могут быть собраны после лизиса красных кровяных клеток. Однако ожидаете как маленькое как 2 x 10-7 для начинающих и до 5 x 107 клеток для опытных комбайнов.
  13. Использование Серологические Пипетки, передавать клетки культуры ткани пластины и инкубировать при 37 ° C в 5% CO2. Если с помощью 24-ну плита, семена каждый хорошо с 2 мл суспензии клеток.
  14. Чтобы удалить половину средств массовой информации и заменить свежей полной СМИ и ГМ-КСФ каждые 48 ч, используйте Серологические Пипетки.
    Примечание: Культур может храниться 9 дней. Однако со временем меняется состав. Для получения дополнительной информации см. раздел 3.

3. Выбор день рода

  1. Как клетки населения менялся со временем, выберите день, что дает наибольшее количество желаемых клеток.
  2. Смотрите таблицу 1 для сортировки пост урожайность ожидается ячейки для каждой из групп населения после 3, 5 и 7 дней культуры в ГМ-КСФ за 1 x 10-7 клеток.

4. Окрашивание стратегия

  1. Используйте небольшие аликвоты клеток для подготовки контрольных образцов. Безупречная управления, компенсация контрольных образцов, окрашенных с только одной флуоресцентные антитела, включать и флуоресценции минус один управляет, в котором все антитела добавляются за исключением одного, чтобы контроль-неспецифический флуоресценции в этом канале. Если с помощью косвенных маркировки, включают начальной средней только, только и как первичный и вторичный.
    Примечание: Фикоэритрин (PE) и аллофикоцианин (APC) с меткой антитела обеспечивают различные отделения с минимальным кровоточить над при совместном использовании. Однако если флюрохром варианты ограничены, CD115 выражается на относительно низком уровне, в то время как Ly6C выражается на очень высоком уровне. Таким образом ярче флуорохромов желательны для анти CD115, и анти Ly6C флуорохромов выбираются для предотвращения кровотечения над.
  2. Подготовка 100 мл из буфера мытья СУИМ (FWB) путем смешивания 97 мл охлажденного Дульбекко фосфатный буфер (DPBS) с 3 мл сыворотки плода теленка в 50 мл Конические трубки и место в ледяной бане.
  3. Используйте пипетку, чтобы мягко, но тщательно, Пипетка клетки вверх и вниз, чтобы выбить любой слабо адэрентных клеток.
  4. С помощью Пипетки серологические, клетки перехода к 50 мл Конические трубки. Центрифуга на 250 x g при 4 ° C на 10 мин.
    1. Если объем ячейки превышает 50 мл, передать необходимое количество трубок клетки и объединить на окрашивание шаг.
  5. Осторожно слить супернатанта и Вымойте гранулированных ячейки, добавив 30 мл FWB с Серологические Пипетки. Центрифуга на 250 x g при 4 ° C на 10 мин и повторять мыть.
    Примечание: Если ожидается высокая клеточной смерти, клетки могут быть вымыты с FWB с как низко как 0,5% плода телячьей сыворотки (FCS). Это позволит избежать слипания клеток.
  6. Приостановить и пятен ячеек на антитела с инструкциями производителя.
    1. Приостановить 5 x 107 клеток в 1 мл FWB и добавить 2 мкг анти Ly6C и анти CD115 помечены флуорофоров (по выбору исследователя). Для дальнейшего отличить CMP от moDC (оба-Ly6C - и CD115-), добавить 2 мкг антител анти CD11c (CMP являются CD11c-; moDC, CD11c+). Инкубируйте 30 мин на льду.
      Примечание: На рисунке 3 был создан с помощью Ly6C-PE и CD115-APC.
  7. С помощью Пипетки серологические, добавьте 10 мл FWB и центрифуги на 250 x g при 4 ° C на 10 мин.
  8. Осторожно слить супернатанта и Вымойте гранулированных ячейки, добавив 30 мл FWB с Серологические Пипетки. Центрифуга на 250 x g при 4 ° C на 10 мин и повторять мыть.
  9. Перед отключением клетки, Флик трубки тщательно, чтобы выбить гранулы. Используйте Серологические Пипетки приостановить клеток в 1 x 10 FWB7 клеток/мл, и процеживают через фильтр ячейки 35 мкм. Используйте Серологические Пипетки для передачи фильтрованного клетки в полипропиленовые трубы и место на льду до готовности для сортировки.
    Примечание: Если недоступен полипропилена, полистирола трубы белка с покрытием (обезжиренное сухое молоко или FCS) может использоваться для уменьшения привязки.

5. установить ворота, на основе контрольных образцов

Примечание: Для предотвращения разрушения клеток из-за давления потока высокоскоростной поток, используйте 100 – 130 мкм насадку для сортировки клеток.

  1. Запустите неокрашенных управления (см. шаг 4.1) через ячейки сортировщик и применять ворота исключить мелких частиц мусора (низкая вперед разброс; FSC) и высоко гранулированный (высокой стороне разброс; SSC) частиц.
    1. Чтобы проанализировать лишь на более поздних этапах (моноциты, moMac/MoDP и MoDC), применяются стробирования только включить более крупных клеток (высокая FSC).
    2. Если используются жизнеспособности пятна, используйте их для исключить окрашенных, нежизнеспособных события (пример показан на рисунке 1).
  2. Запустить один флуоресцентные контрольные образцы через ячейки сортировщик и корректировать компенсацию по мере необходимости.
  3. Запуск образца multi меченых образца. Соблюдать четыре различных популяций: Ly6C + CD115-(ГИП), Ly6C + CD115 + (моноциты), Ly6C-CD115 + (moMacs/moDP) и Ly6C-CD115 - (CMPs/moDCs). Примените ворота изолировать каждый из четырех основных групп населения.
    Примечание: CMPs и moDC доля Ly6C-CD115-фенотип. Однако, они могут быть продифференцированы основаны на выражение CD11c: CMP не хватает CD11c, тогда как MoDCs Экспресс CD11c.

6. сбор изолированных популяций

  1. Подготовить коллекцию трубок, добавив достаточно FCS для достижения по меньшей мере 20% конечная концентрация при полной. Например при использовании 5 мл пробирок, добавляют 1 мл FCS до сортировки и снять трубку, когда он достигает 5 мл общий объем.
  2. Чтобы избежать поглощения оборот и антитела мембраны, держите все образцы (смешанные и сортировка) при 4 ° C на протяжении сортировки.
    1. Если это не представляется возможным, держите трубку, содержащие клетки, чтобы быть отсортированы на льду как можно больше и передать сортировщик аликвоты, при необходимости.
    2. Кроме того передача отсортированные образцы для льда каждые 20 – 30 мин.
  3. После того, как были собраны нужное количество клеток, используйте Серологические Пипетки для передачи клетки на новой Конические трубки. Центрифуга на 250 x g при 4 ° C на 10 мин.
    1. Подтвердите чистоту анализ выполняемых после сортировки на небольших аликвоты каждого собранного населения.
  4. Удалить супернатант, приостановить в 10 мл FWB и центрифуги на 250 x g при 4 ° C на 10 мин повторить в общей сложности двух стирок.
    Примечание: Это может быть трудно удалить супернатант без выбивании гранулы. Присоедините наконечник пипетки для вакуумной магистрали может помочь с удаления. Если это не доступно, предполагается, что супернатант собраны в свежий трубку при диссоциации Пелле.
  5. После второго мыть удалите супернатант.
  6. Если пользователя экспериментальный дизайн диктует клетки быть повторно культивировали, выполните шаги 2.12 – 2.14. В противном случае если клетки будут использоваться для немедленного анализа, подготовьте ячеек в зависимости от желаемого протокола.
    Примечание: На рисунке 4включен пример типичной функционального анализа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В попытке сохранить как много каналов, доступных для анализа как можно, жизнеспособные клетки регулярно отбирались на основе прямых и сбоку разброс, за исключением очень маленьким и очень гранулированных событий (типичная ворота применяется ко всем, что точка участков в Рисунок 1A). Чтобы определить, если эта стратегия стробирования надежно исключить мертвые клетки, мы окрашенных с 7-аминокислоты актиномицин Д (7-AAD) (рис. 1B). ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол способствует изоляции ГМ-КСФ driven прародителем и прекурсоров типов клеток в количествах, достаточных для нескольких видов анализов, включая биохимические анализы, анализов клеточную функцию в пробирке, или инстилляции в естественных условиях. Этот метод представляет собой значительный шаг вперед в области развития моноцитарных дендритных клеток, позволяя надежной изоляции и идентификации клеток в начале этого пути развития, а также те типы дифференцированных клеток чаще изолированные в п...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы имеют конфликты не разглашать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарны за технической помощи от Элисон церковь птица в Auburn университета Школа по ветеринарной медицины потока цитометрии объект, для финансирования из низ EHS R15 R15 AI107773 и клеточной и молекулярной биологии программа в университете Оберн для летних исследований финансирование PBR.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
RPMI 1640Corning15-040-CV
Фетальная сыворотка теленка (FCS)HyCloneSV30014.04для добавки полной среды и FWB
GlutaMAXGibco35050для добавки полной среды
2-меркаптоэтанол (2-ME)MP Биомедицинская190242для добавки полной среды
75 мМ Вакуумный фильтрThermo Scientific156-4045для стерилизации полных сред
ACK Lysis BufferLonza10-548Eдля лизиса эритроцитов
HBSS bufferCorning 21-020-CMдля спасения лейкоцитов после лизиса эритроцитов
фосфатным солевым буфером (PBS), Dulbecco'sLonza17-512Fдолжен быть не содержит эндотоксинов; охлажден при 4°С; С
35 и микро; m Клеточный фильтрFalcon352235для разбивания комков перед прогоном через цитометр.
GM-CSFBiosourcePMC2011полезной концентрации 10 нг/мл
Тканевая культивируемая обработанная пластинаVWR10062-896для клеток костного мозга после сбора
Anti-Ly6C, клон HK1.4Biolegend128018
Anti-CD115, клон AFS98Tonbo Bioscience20-1152-U100
Anti-CD11c, клон HL3BD Biosciences557400для дифференциации CMP и MoDCs
MoFlo XPD Проточный цитометрBeckman CoulterML99030
BD Accuri C6BD Biosciences660517
100% этанолPharmco-Aaper111000200CSPP
60 мм Чашка ПетриCorning, Inc353002
50 мл Коническая трубкаVWR21008-242
C57BL/6 мышейЛаборатория Джексона000664женщина; 10-20 недель
Капюшон биобезопасностиThermo Scientific8354-30-0011
10 мл ШприцBD Biosciences301604
иглой 23 г BDBiosciences305145
центрифуга 5810  Reppendorf22625501
FlowJo Software v10BD BiosciencesVersion 10flowjo.com

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhan, Y., Xu, Y., Lew, A. M. The regulation of the development and function of dendritic cell subsets by GM-CSF: more than a hematopoietic growth factor. Mol Immunol. 52, 30-37 (2012).
  2. Zhan, Y., et al. The inflammatory cytokine, GM-CSF, alters the developmental outcome of murine dendritic cells. Eur J Immunol. , (2012).
  3. van de Laar, L., Coffer, P. J., Woltman, A. M. Regulation of dendritic cell development by GM-CSF: molecular control and implications for immune homeostasis and therapy. Blood. 119, 3383-3393 (2012).
  4. Steinman, R. M., Inaba, K. Myeloid dendritic cells. J Leukoc Biol. 66, 205-208 (1999).
  5. Inaba, K., et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J Exp Med. 176, 1693-1702 (1992).
  6. Steinman, R. M., Pack, M., Inaba, K. Dendritic cell development and maturation. Adv Exp Med Biol. , 1-6 (1997).
  7. Pierre, P., et al. Developmental regulation of MHC class II transport in mouse dendritic cells. Nature. 388, 787-792 (1997).
  8. Steinman, R. M., Witmer-Pack, M., Inaba, K. Dendritic cells: antigen presentation, accessory function and clinical relevance. Adv Exp Med Biol. , 1-9 (1993).
  9. Na, Y. R., Jung, D., Gu, G. J., Seok, S. H. GM-CSF Grown Bone Marrow Derived Cells Are Composed of Phenotypically Different Dendritic Cells and Macrophages. Mol Cells. 39, 734-741 (2016).
  10. Rogers, P. B., Driessnack, M. G., Hiltbold Schwartz, E. Analysis of the developmental stages, kinetics, and phenotypes exhibited by myeloid cells driven by GM-CSF in vitro. PLoS One. 12, e0181985(2017).
  11. Helft, J., et al. GM-CSF Mouse Bone Marrow Cultures Comprise a Heterogeneous Population of CD11c(+)MHCII(+) Macrophages and Dendritic Cells. Immunity. 42, 1197-1211 (2015).
  12. Alloatti, A., Kotsias, F., Magalhaes, J. G., Amigorena, S. Dendritic cell maturation and cross-presentation: timing matters! Immunol Rev. 272, 97-108 (2016).
  13. Jakubzick, C. V., Randolph, G. J., Henson, P. M. Monocyte differentiation and antigen-presenting functions. Nat Rev Immunol. 17, 349-362 (2017).
  14. Mbongue, J. C., Nieves, H. A., Torrez, T. W., Langridge, W. H. The Role of Dendritic Cell Maturation in the Induction of Insulin-Dependent Diabetes Mellitus. Frontiers in immunology. 8, 327(2017).
  15. Shortman, K., Naik, S. H. Steady-state and inflammatory dendritic-cell development. Nat Rev Immunol. 7, 19-30 (2007).
  16. Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking. J Immunol. 179, 7577-7584 (2007).
  17. Naik, S. H. Generation of large numbers of pro-DCs and pre-DCs in vitro. Methods Mol Biol. 595, 177-186 (2010).
  18. Nikolic, T., de Bruijn, M. F., Lutz, M. B., Leenen, P. J. Developmental stages of myeloid dendritic cells in mouse bone marrow. Int Immunol. 15, 515-524 (2003).
  19. Hettinger, J., et al. Origin of monocytes and macrophages in a committed progenitor. Nat Immunol. 14, 821-830 (2013).
  20. Fogg, D. K., et al. A clonogenic bone marrow progenitor specific for macrophages and dendritic cells. Science. 311, 83-87 (2006).
  21. Traver, D., et al. Development of CD8{alpha}-Positive Dendritic Cells from a Common Myeloid Progenitor. Science. 290, 2152-2154 (2000).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Ly6C CD115CD11c MHC IIGM CSFFACS

Похожие статьи