Методическая статья

Электропроводящий эшафот чтобы модулировать и доставить стволовых клеток

DOI:

10.3791/57367

⸱

13 апреля 2018 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology and Neurological Sciences, Stanford University School of Medicine, 2Stanford Stroke Center and Stanford University School of Medicine

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этот протокол описывает изготовление системы культуры клетки позволяют посева стволовых клеток на леске проводящего полимера в vitro электрической стимуляции и последующих в vivo имплантации с помощью стволовых клеток посеян эшафот Миниинвазивная техника.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Терапия стволовой клетки стала интересной инсульта терапевтического, но метод оптимального доставки остается неясным. Хотя техника микроинъекции был использован на протяжении десятилетий доставить стволовых клеток в ход модели, этот метод ограничен отсутствием способность манипулировать стволовые клетки до инъекции. Этот документ подробно описывает метод с использованием электропроводных полимеров леску для доставки стволовых клеток. Электрической стимуляции стволовых клеток с использованием проводящих полимеров леску изменяет гены стволовых клеток, участвующих в выживание клетки, воспалительной реакции и синаптическую ремоделирования. После электрические предварительной подготовки, стволовые клетки на эшафот интракраниально пересаживают в мышиной модели окклюзии дистального средней мозговой артерии. Этот протокол описывает мощный метод манипулировать стволовые клетки через проводящего полимера леску и создает новое средство для дальнейшего развития на основе стволовых клеток лечение.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Инсульт является второй ведущей причиной смерти в мире и пятой ведущей причиной смерти в Соединенных Штатах. Несмотря на эти высокие показатели смертности лечение инсульта восстановление в настоящее время остается проблема не жизнеспособным медицинской вариантов имеющихся в настоящее время1. В настоящее время около 300 клинических испытаний, занимающихся ишемических инсультов, из которых только 40 использовать стволовые клетки. Предыдущие исследования показали, что терапия стволовой клетки имеют положительное влияние на ход ремонта2,3. Паракринными такие факторы, как мозг нейротрофическ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все стволовых клеток и животных процедуры были утверждены Комитетом по надзору исследования стволовых клеток Стэнфордского университета и административной группой Стэнфордского университета на лабораторных животных уход (SCRO-616 и APLAC-31909).

1. травление стекла ITO

  1. Подготовьте Индий оксид олова (ИТО)-крытая стеклянное скольжение, поместив маскирующий агент проводящих стороне стекла.
    Примечание: Большинство коммерческих прозрачная лента может использоваться как маскирующий агент.
    1. Удалите излишки маски с помощью лезвия, оставив только желаемую форму окончательного дизайна Ито распространяется на стекле.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Схема, показанный на рисунке 1 представляет общий процесс электрической стимуляции hNPCs и потенциальных нисходящие приложения. Текущее ограничение в клеточной терапии является, что стволовые клетки подвергаются суровой окружающей среды после трансплантации, включая воспаление и ишемического условий. Эти трудные условия могут ограничить их терапевтическую эффективность14,15. Использование проводящего .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Растущих доказательств показал обещание стволовых клеток как Роман ход терапии. Это обещание привела к значительные усилия для продвижения в постели с по меньшей мере 40 текущих или завершенных клинических испытаний клеточной терапии. Инсульта патологии предлагает уникальный неврологические расстройства, что поддается терапии стволовой клетки, потому что после острого оскорбление, не существует нейродегенеративных процесса предотвращения восстановления. Точный механизм стволовых клеток расширение инсульта восстановления .......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют никаких конфликтов интересов объявить с этой работой.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим д-р Kati Andreasson (Кафедра неврологии и неврологических наук, Стэнфордский университет) для использования машины qRT-PCR. Работа была поддержана национальными институтами здравоохранения грантов K08NS098876 (для P.M.G.) и Стэнфордский Школы медицины Дин докторской стипендии (B.O.).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
FGF-BasicInvitrogenCTP026120 нг/мл для рабочих сред
MatrigelCorningcb40234a1:200 разбавление
LIF Protein, Recom. Hum. (10 µ г/мл)EMD MilliporeLIF101010 нг/мл для рабочих сред
Силгард 184 силикон 3,9 кгFisherbrandNC0162601
Соляная кислотаFisherbrandSA56-4
сертифицированный) ACS, Fisher ChemicalFisherbrandSA95
ITO GlassDelta TechnologiesCG-40IN-0115
Додецилбензолсульфонат натрияSigma289957-1KG
ПирролSigma131709-500MLЗащитный раствор пиррола от света и комнатной температуры
8 лунок стеклянных камерThermo Sci Nuc 125658Отсоедините камеру клетки и храните ее в стерилизованных условиях
Кронштейн с плоской поверхностью, 3 x 1 дюймMcMaster-Carr 1030A4
ДВУХКОМПОНЕНТНАЯ СЕРЕБРЯНАЯ КРАСКА 14GЭлектронная микроскопия Наук 1264214Смешайте две части (1:1) в пластиковой пластине
DPBS, 1x, с Ca и Mg, без фенола RedGenesse 25-508C
AB2 ArunA Набор сред для культуры нейронных клетокAruna Biomedical ABNS7013.2
hNP1 Набор для расширения нейронного предшественника человекаAruna Biomedical   hNP7013.1
Бесконтактный клапан регулировки расхода, никелированная латунь, для трубки от 3/32" до 5/8" наружный диаметрMcMaster-Carr 5330K22
МультиметрKeysight E3641A
Генератор волновой пеныKeysight33210A-10 МГц
Pt сеткиSigma-Aldrich 298107-425MGЭлектрод сравнения с размерами, 1x1 см
ЖИВОЙ/МЕРТВЫЙ Набор для обеспечения жизнеспособности/цитотоксичности, для клеток млекопитающихThermo Fisher Scientific L3224
BDNFThermo Fisher Scientific 
THBS1Thermo Fisher Scientific 
GAPDHThermo Fisher Scientific 
RNeasy Mini Kit (250)Qiagen74106
QIAshredder (250)Qiagen79656
Набор ДНКазы без РНКазы (50)QIAGEN79254
iScript набор для синтеза кДНК, 100 x 20 и микро; L rxnsBIORAD1708891
TaqMan Gene Expression Master MixThermo Fisher Scientific 
7-8 недель, кобель, RNU RatsNCI-Frederick
4-0 Ethicon Silk SutureeSutures.com683G
IsofluraneHenry Schein29405
V-1 Настольная система анестезии лабораторных животныхVetEquip901806
Surgicel Original Absorbable HemostatEthicon1952
Лабораторный стандартный стереотаксический прибор, RatStoelting51600
Kimberly-Clark Professional  Безопасные фиолетовые нитриловые стерильные смотровые перчаткиFisherbrand19-063-130
Стерильная простыняMedlineDYNJSD1092
Thermo Scientific  Рукоятка лезвия скальпеля из нержавеющей стали Shandon, удерживает No 20-25 лезвийFisherbrand53-34
Walter Stern Скальпельное лезвие серии 300Fisherbrand17-654-456
QuantStudio 6 Flex Система ПЦР в реальном времениThermo Fisher Scientific4484642
Frazier Микродиссекционный крючокHarvard Apparatus52-2706
Концентрат азотной кислоты (Hs02718934_s1Hs00962908_m1Hs02758991_g14369510

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. The Science of Stroke: Mechanisms in Search of Treatments. Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).
  2. George, P. M., et al. Electrical Preconditioning of Stem Cells with a Conductive Polymer Scaffold Enhances Stroke Recovery....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

in vitroin vivoBDNF

Похожие статьи