Ирис неоваскуляризация, частым осложнением ишемической болезни сетчатки, может привести к зрение угрожая Неоваскулярная Глаукома. Здесь мы описываем мышиных протокол для стимулирования экспериментальной Ирис неоваскуляризация, которые могут быть использованы для неинвазивной оценки по ангиогенез модулирующих веществ.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Пункция индуцированной неоваскуляризации Iris как модель мыши Рубеоз Радужки
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Мы описываем модель неоваскуляризация прокола индуцированной Ирис как общая модель для неинвазивной оценки по ангиогенез. Эта модель также имеет отношение к ориентации Неоваскулярная Глаукома, прицел угрожая осложнения диабетической ретинопатии. Этот метод основан на индукции Ирис сосудистой реакции ряда самоуплотняющийся увеальной проколы на мышей BALB/c и использует послеродовой созревания глазной сосудистую мыши. Щенков мыши проходят увеальной проколы от послеродового дня 12.5, когда щенки естественно открыть их глаза, до послеродового дня 24.5. Благодаря прозрачности роговицы Ирис сосудистую могут быть проанализированы легко через время методом неинвазивной в естественных условиях . Кроме того полупрозрачная Ирис мышей BALB/c может быть flatmounted для анализа подробные immunohistologic с минимальными неспецифической фон окраски. В этой модели, ангиогенез главным образом управляется воспалительных и плазминогена, активация системы. Пункция индуцированной модели является первым, чтобы побудить неоваскуляризация Ирис в мелких грызунов и имеет то преимущество, позволяя прямой неинвазивной в естественных условиях анализ процесса ангиогенных. Кроме того модель может сочетаться с ангиогенных модулирующих веществ, который подчеркивает свой потенциал в изучении ангиогенеза с перспективой в естественных условиях .
Введение
Ирис, вместе с Цилиарное тело и сосудистое, включает в себя сосудистая оболочка глаза, который является наиболее васкуляризированной ткани глаза. Iris сосудистую имеет важное значение в поддержании гомеостаза в передней камере глаза. В результате обильные анастомоза соединения между артерий и вен Ирис кровеносных сосудов обеспечивают питательных веществ и кислорода не только Ирис, сам, но весь переднего сегмента глаза1.
Формирование новых кровеносных сосудов, или ангиогенеза из уже существующих, является основополагающим в физиологических процессах, таких, как развитие и ранозаживляющее2. Анги....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Щенков мыши BALB/c обоего пола были использованы в соответствии с заявлением для использования животных в офтальмологические и видение научных исследований, и протоколы были одобрены Комитетом Стокгольма этических исследований животных. Мышей были размещены в пометах, вместе с кормящей матери, с 12 ч. дневной/ночной цикл, свободный доступ к продовольствию и воде и контролируются ежедневно.
Примечание: Для хирургической процедуры, мышей держали под наркозом с летучих изофлюрановая. Глазной мази рекомендуется при глазных процедур, поскольку они могут мешать лечения и веществ, используемых. При необходимости, для предотвращения сухого глаза, к....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Альбинос щенков мыши BALB/c в P12.5 были подвергнуты увеальной проколы, повторяется каждый четвертый день (экспериментальный день 0, 4, 8, 12), до P24.5. В P27.5 были умерщвлены мышей и ирисы тщательно расчлененный (экспериментальный день 15). Мышь глаз были снимки с камеры, прикрепленной к хирургической стереоскоп перед каждой серии прокол в каждой экспериментальной день оценить неинвазивной оценки сосудистой реакции Ирис. Увеальной проколы побудить сосудистой ответ от радужки, вызывая р.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В настоящем Протоколе представлен новый метод для индукции Ирис сосудистой реакции увеальной прокол. Пункция запускает механизмы заживления раны и способствует сосудистой ответы в Ирис10,11. Это согласуется с глазных патологий, таких как НДР и NVG, где усугубляется ангиогенных ответы от сетчатки в заднего отрезка глаза кульминацией клинического состояния Рубеоз Радужки, увеличение васкуляризации Ирис12 ,13
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Авторы благодарят Linnea Tankred и Диана Rydholm для животноводства.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Боннские глазные ножницы | Bausch & Lomb | 23060 | |
| Clayman-Vannas изогнутые ножницы | Bausch & Lomb | E3383 C | |
| Прямые ножницы Clayman-Vannas | Bausch & Lomb | E3383 S | |
| Адаптер для объектива для фотоаппарата | Ручной работы | Н/Д | Или любая система, позволяющая адаптировать фотоаппарат к микроскопу |
| Грелка 100-110 Вт | Неприменимо Н | /Д | Доступно в зоомагазинах/ветеринарных магазинах |
| Игла для подкожных инъекций 30г скошенная | KDM GmBH Германия | 911914 | |
| Iphone 4S | Apple | Не применимо | Или другое устройство для получения изображения с высоким разрешением |
| Isoflurane | Baxter | KDG 9623 | |
| McPherson связывающие щипцы | Bausch & Lomb | E1815 S | |
| Щипцы для микросвязывания | Bausch & Lomb | 63140 | |
| Minims тетракаина гидрохлорид | Bausch & Lomb | N/A | 1 % (w/v) Глазные капли |
| Нейтральный буферизованный формалин | Bioreagens | 0018-40 | |
| Обычный солевой раствор | Fresenius Kabi | 210352 | 0,9 % (w/v) NaCl в инъекционной воде |
| Фосфатно-солевой буфер | ThermoFisher Scientific | 10010023 | Сбалансированный и буферизированный PBS pH 7,4 |
| Чашка Петри 10 см | Starstedt | 83.3902 | |
| Чашка Петри 3 см | Starstedt | 83.3900 | |
| Safe Seal Tube 2,0 мл | Starstedt | 72.685.200 | Или любая трубка типа eppendorf |
| TC plate 96-луночная | Starstedt | 83.3924 | |
| Трансферная пипетка 3,5 мл | Starstedt | 86.1171 | Или любая другая пипетка Пастера типа |
| Univentor 400 анестезиологический аппарат | Univentor Limited | N/A | Или эквивалентный регулятор потока с индукционной камерой и маской для летучей анестезии |
| Wild M650 хирургический микроскоп | Wild Heerbrugg | N/A | Или другой хирургический или увеличительный стереоскоп |
Ссылки
- Morrison, J. C., Van Buskirk, E. M. Anterior collateral circulation in the primate eye. Ophthalmology. 90 (6), 707-715 (1983).
- Dreyfuss, J. L., Giordano, R. J., Regatieri, C. V. Ocular Angiogenesis. J Ophthalmol. 2015, 892043(2015).
- Breuss, J. M., Uhrin, P.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
