Переходный рецептор потенциальных ваниллоид типа 1 (TRPV1) в надспинной области было предложено играть определенную роль в функции мозга. Описано здесь протокол для интрацеребровентрикулярной инъекции смолифератоксина для супраспинальной десенсибилизации TRPV1 у мышей. Процедуры для некоторых обезболивающих тестов также представлены.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Интрацеребровентрикулярное лечение с помощью рецифератоксина и обезболивающих тестов у мышей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Переходный рецептор потенциальных ваниллоид типа 1 (TRPV1), термочувствительный канал катиона, как известно, вызывают боль в периферических нервов. В дополнение к своей периферической функции, его участие в функции мозга также было предложено. Известно, что рецифератоксин (RTX), ультрапотентный агонист TRPV1, вызывает долгосрочную десенсибилизацию TRPV1, и эта десенсибилизация является альтернативным подходом для изучения физиологической значимости клеток, выражаюющих TRPV1. Здесь мы описываем протокол для intracerebroventricular (i.c.v.) обработки с RTX в мышах. Процедуры описаны для тестирования ноцицепции периферической стимуляции TRPV1 (тест RTX) и механической стимуляции (тест давления хвоста), а затем следовать. Хотя ноцицептивные реакции мышей, которые вводились RTX i.c.v. были сопоставимы с ответами контрольных групп, RTX-i.c.v.-administered мышей были нечувствительны к обезболивающему эффекту ацетаминофена, предполагая, что лечение i.c.v. RTX может вызвать супрастинал-селективную десенсибилизацию TRPV1. Эта модель мыши может быть использована в качестве удобной экспериментальной системы для изучения роли TRPV1 в мозге / супраспинальной функции. Эти методы также могут быть применены к исследованиям центральных действий других препаратов.
Введение
Животные получают различные физические и химические стимулы из окружающей среды с помощью датчиков на периферических нервах. Переходный рецептор потенциальных ваниллоид типа 1 (TRPV1) является одним из термочувствительных, неселективных каналов катионации, которые действуюткак датчики тепла 1,2, и активации и / или модуляции TRPV1, как известно, является ключевым шагом для ноцицепции в нормальных и воспалительныхконтекстах 3. Хотя общая модель выражения является спорным, выражение TRPV1 также было предложено в супраспинальных регионах, будучи вовлеченным в различные виды деятельности мо....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все используемые здесь экспериментальные протоколы были одобрены Комитетом по уходу за животными и использованию Университета Мусашино. Мышей-мышей (SLC, Сидзуока, Япония) держали по крайней мере 7 дней под 12-ч свет / темный цикл до экспериментов с водой и пищевой объявление libitum. Для экспериментов использовались 5- или 6-недельные мыши.
1. Подготовка лекарственных средств
-
Rtx
ПРИМЕЧАНИЕ: Алкогольное решение RTX может вызвать сильные ожоги кожи и повреждения глаз. Убедитесь в том, чтобы использовать резиновые перчатки и очки для защиты при обработке. Это решение запасов может быть использовано в течение 6 ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
I.c.v.-обработанные мыши не показывают никаких явных отклонений в их внешнем виде, спонтаннойдеятельности, массе тела 19 и температуре тела ядра (группа, обработанная транспортным средством, 38,4 и 0,3 градуса по Цельсию, n No 6; Группа, обработанная RTX, 38,7 и 0,2 градуса по Цельсию, n No 6).
Рисунок 2A-B-B показывает отзывчивость s.c.- или i.c.v.-обработан.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Наиболее важным шагом в этих экспериментах является успех инъекций i.c.v. Техника инъекций i.c.v., используемая здесь, довольно проста, но требует некоторой практики. Перед экспериментами рекомендуется практиковаться с красителями (например, 0,5% трипан-голубого солевого раствора). Если инъекция выполнена правильно, на корональной шве должна быть видна игольчатая метка, а впрыскиваемый краситель должен присутствовать в контралатеральной желудочки и третьем желудочки. Кроме того, при инъекциях следует избегать прикоемной .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет конфликта интересов, чтобы
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Ресинифератоксин | LKT Laboratories | R1774 | используемый для предварительной обработки s.c./i.c.v. и тест RTX |
| Ацетаминофен | IWAKI SEIYAKU | подаренный из IWAKI SEIYAKU | |
| Пентобарбитал натриевая соль | Tokyo Chemical Industry | P0776 | используемый для анестезии |
| Этанол (99,5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | используемый для растворения RTX |
| Полиоксиэтилен(20) Сорбитан моноолеат | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | используется для растворения RTX |
| 25 μ L микрошприц | Hamilton | 1702LT | используется для внутривенного введения |
| 100 μ L микрошприц | Hamilton | 1710LT | для внутриплантационного введения |
| одноразовая игла 26 калибра | TERUMO | NN-2613S | для внутривенного введения |
| одноразовая игла 30 калибра | NIPRO | 01134 | для внутриподошвенного введения |
| Измеритель давления | Ugo Basile | Analgesy-Meter Type 7200 | используется для испытания давления в хвосте |
Ссылки
- Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons. J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).
- Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
