Здесь мы представляем, и контраст двух протоколов используется для decellularize растительных тканей: подход на основе моющих средств и моющих средств свободный подход. Оба метода оставить позади внеклеточного матрикса в тканях растений используется, который затем может быть использован как строительные леса для ткани инженерных приложений.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Два метода для Decellularization растительных тканей для приложений, инженерия тканей
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Аутологичные, синтетические и животных, полученных графтов, в настоящее время используется как строительные леса для замены тканей имеют ограничения из-за низкой доступности, плохое биосовместимость и стоимость. Ткани растений имеют благоприятные характеристики, которые делают их уникально подходит для использования в качестве лесов, таких как большую площадь поверхности, отличный водный транспорт и удержания, взаимосвязанных пористость, существующий сосудистой сети и широкий спектр механических Свойства. Здесь описываются две успешные методы decellularization завод для ткани инженерных приложений. Первый метод основан на стиральный порошок ванны для удаления клеточной материи, которая похожа на ранее установленные методы, используемые для очистки тканей млекопитающих. Вторая — это моющее средство бесплатно метод, адаптированный вариант протокола, который изолирует листьев сосудистую и предполагает использование подогревом отбеливателя и солевая ванна для очистки листья и стебли. Оба метода дают подмости с сопоставимыми механическими свойствами и низкой сотовой метаболические последствия, таким образом позволяя пользователю выбрать протокол, который лучше подходит для их предполагаемого применения.
Введение
Тканевая инженерия появилась в 80-х годов для создания живых тканей заменителей и потенциально адрес существенных органов и тканей нехватки1. Одна из стратегий использовала подмостей стимулировать и направлять тела, чтобы регенерировать недостающие тканей или органов. Хотя производство подходы, такие, как 3-D печати дали подмости с уникальными физическими свойствами, способность производить строительные леса с разнообразными достижимых физических и биологических свойств остается задача2 , 3. Кроме того, из-за отсутствия функциональной сосудистой сети, эти методы были ограничены в регене....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. decellularization растительной ткани, используя подход на основе моющих средств
-
Используйте свежие или замороженные F. hispida, образцы листьев. Заморозить неиспользованный свежих образцов в морозильник-20 ° C и хранить для будущего использования (до года).
Примечание: Использование стволовых или листовой ткани практически любого желаемого завода. Длительного хранения раз может привести к повреждению тканей.- Определить размер и форма образцов для обработки на основе предполагаемого использования образца (т.е. образцы, порезать на полоски хорошо подходят для механического тестирования приложений, тем временем ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Оба метода принесли лесов, которые были пригодны для культуры клеток и тканей, инженерных приложений. Рисунок 1 показывает общий рабочий процесс decellularization, используя нетронутыми лист для метода на основе моющих средств и вырезать образцы (диаметром 8 мм) для моющего средства, свободной метод. Успешное decellularization фикус hispida тканей после обоих методов дали четкие и сохранности проб (рис. 1A и 1B
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь описываются два метода, decellularize растительных тканей. Результаты, представленные здесь, в сочетании с результатами предыдущих исследований25, показывают, что протоколы выдвинули, вероятно, применимые к широкому спектру видов растений и может быть выполнена на стебли и листья. Эти процедуры просты и не требуют специального оборудования, поэтому decellularization завод может осуществляться в большинстве лабораторий. Примечательно, что после decellularization, подмостей должны быть функцио.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить Джона Wirth Ольбрих садов за любезное предоставление образцы, используемые в этом проекте. Эта работа частично поддерживается национальный сердца, легких и крови института (R01HL115282 G.R.G.) Национальный научный фонд (DGE1144804 J.R.G и G.R.G.) и университета штата Висконсин Департамент хирургии и выпускников фонда (H.D.L.). Эта работа также поддержали частично агентства по охране окружающей среды (Грант № 83573701 звезда), национальные институты здравоохранения (R01HL093282-01A1 и UH3TR000506) и Национальный научный фонд (IGERT DGE1144804).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Додецилсульфат натрия | Sigma Life Science | 75746-1KG | |
| Triton X-100 | MP Biomedicals, LLC | 807426 | неионогенное поверхностно-активное вещество, упомянутое в статье. Очень вязкий реагент, может помочь обрезать конец наконечника пипетки при его вытягивании. |
| Концентрированный отбеливатель (8,25% гипохлорита натрия) | Clorox | Артикул #: 31009 | Стандартный концентрированный отбеливатель. |
| Бикарбонат натрия | Acros Organics | 217120010 | может быть заменен гидроксидом натрия или карбонатом натрия. |
| 8 мм Biopunch | HealthLink | 15111-80 | Режет образцы, которые хорошо помещаются в 24-луночную пластину |
| Belly Dancer-Shake стола | Stovall Life Sciences | BDRAA115S | Используйте низкие скорости, чтобы не повредить ткани. Можно использовать любую модель/марку встряхивающего стола. |
| Isotemp горячая / перемешивающая пластина | Fisher | Scientific Может использовать любой стиль / марку горячей / перемешивающей плиты. | |
| Стакан | любой | Можно использовать стакан любого размера, если он подходит к вашим образцам и не перегружает их. | |
| Трис гидрохлорид | Fisher Scientific | BP153-500 | |
| DMEM | Corning | MT50003PC | |
| Quant-iT Picogreen dsDNA анализ | Life Technologies | P11496 | Можно использовать любой метод количественного определения дцДНК под рукой. |
Ссылки
- Vacanti, J. Tissue engineering and regenerative medicine: from first principles to state of the art. Journal of Pediatric Surgery. 45 (2), 291-294 (2010).
- Kim, S., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Больше статей
Децеллюляризация растенийметод дециллюляризации в детергентной ваннеметод без использования детергентовванна с отбеливателем и сольюкаркасы для тканевой инженерииобработка растительных тканейанализ механических свойстввлияние на клеточный метаболизмрост стволовых клетокиспользование средств индивидуальной защиты
