Два метода для Decellularization растительных тканей для приложений, инженерия тканей

Summary

Здесь мы представляем, и контраст двух протоколов используется для decellularize растительных тканей: подход на основе моющих средств и моющих средств свободный подход. Оба метода оставить позади внеклеточного матрикса в тканях растений используется, который затем может быть использован как строительные леса для ткани инженерных приложений.

Abstract

Аутологичные, синтетические и животных, полученных графтов, в настоящее время используется как строительные леса для замены тканей имеют ограничения из-за низкой доступности, плохое биосовместимость и стоимость. Ткани растений имеют благоприятные характеристики, которые делают их уникально подходит для использования в качестве лесов, таких как большую площадь поверхности, отличный водный транспорт и удержания, взаимосвязанных пористость, существующий сосудистой сети и широкий спектр механических Свойства. Здесь описываются две успешные методы decellularization завод для ткани инженерных приложений. Первый метод основан на стиральный порошок ванны для удаления клеточной материи, которая похожа на ранее установленные методы, используемые для очистки тканей млекопитающих. Вторая — это моющее средство бесплатно метод, адаптированный вариант протокола, который изолирует листьев сосудистую и предполагает использование подогревом отбеливателя и солевая ванна для очистки листья и стебли. Оба метода дают подмости с сопоставимыми механическими свойствами и низкой сотовой метаболические последствия, таким образом позволяя пользователю выбрать протокол, который лучше подходит для их предполагаемого применения.

Introduction

Тканевая инженерия появилась в 80-х годов для создания живых тканей заменителей и потенциально адрес существенных органов и тканей нехватки¹. Одна из стратегий использовала подмостей стимулировать и направлять тела, чтобы регенерировать недостающие тканей или органов. Хотя производство подходы, такие, как 3-D печати дали подмости с уникальными физическими свойствами, способность производить строительные леса с разнообразными достижимых физических и биологических свойств остается задача^{2 , 3}. Кроме того, из-за отсутствия функциональной сосудистой сети, эти методы были ограничены в регене....

Protocol

1. decellularization растительной ткани, используя подход на основе моющих средств

1. Используйте свежие или замороженные F. hispida, образцы листьев. Заморозить неиспользованный свежих образцов в морозильник-20 ° C и хранить для будущего использования (до года).
   Примечание: Использование стволовых или листовой ткани практически любого желаемого завода. Длительного хранения раз может привести к повреждению тканей.
   1. Определить размер и форма образцов для обработки на основе предполагаемого использования образца (т.е. образцы, порезать на полоски хорошо подходят для механического тестирования приложений, тем временем ....

Results

Оба метода принесли лесов, которые были пригодны для культуры клеток и тканей, инженерных приложений. Рисунок 1 показывает общий рабочий процесс decellularization, используя нетронутыми лист для метода на основе моющих средств и вырезать образцы (диаметром 8 мм) для моющего средства, свободной метод. Успешное decellularization фикус hispida тканей после обоих методов дали четкие и сохранности проб (рис. 1A и 1B

Discussion

Здесь описываются два метода, decellularize растительных тканей. Результаты, представленные здесь, в сочетании с результатами предыдущих исследований²⁵, показывают, что протоколы выдвинули, вероятно, применимые к широкому спектру видов растений и может быть выполнена на стебли и листья. Эти процедуры просты и не требуют специального оборудования, поэтому decellularization завод может осуществляться в большинстве лабораторий. Примечательно, что после decellularization, подмостей должны быть функцио.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Додецилсульфат натрия	Sigma Life Science	75746-1KG
Triton X-100	MP Biomedicals, LLC	807426	неионогенное поверхностно-активное вещество, упомянутое в статье. Очень вязкий реагент, может помочь обрезать конец наконечника пипетки при его вытягивании.
Концентрированный отбеливатель (8,25% гипохлорита натрия)	Clorox	Артикул #: 31009	Стандартный концентрированный отбеливатель.
Бикарбонат натрия	Acros Organics	217120010	может быть заменен гидроксидом натрия или карбонатом натрия.
8 мм Biopunch	HealthLink	15111-80	Режет образцы, которые хорошо помещаются в 24-луночную пластину
Belly Dancer-Shake стола	Stovall Life Sciences	BDRAA115S	Используйте низкие скорости, чтобы не повредить ткани. Можно использовать любую модель/марку встряхивающего стола.
Isotemp горячая / перемешивающая пластина	Fisher		Scientific Может использовать любой стиль / марку горячей / перемешивающей плиты.
Стакан	любой		Можно использовать стакан любого размера, если он подходит к вашим образцам и не перегружает их.
Трис гидрохлорид	Fisher Scientific	BP153-500
DMEM	Corning	MT50003PC
Quant-iT Picogreen dsDNA анализ	Life Technologies	P11496	Можно использовать любой метод количественного определения дцДНК под рукой.