Здесь мы представляем organotypic культивирование протокол вырастить эмбриональные куриные органов в пробирке. С помощью этого метода, развитие эмбриона курицы ткани могут быть изучены, сохраняя при этом высокую степень контроля над окружающей среде культуры.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Культура organotypic метод для изучения развития тканей эмбриона курицы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Эмбриональные куриные обычно используется как организм надежная модель для развития позвоночных. Его доступность и короткий инкубационный период делает его идеально подходит для экспериментов. В настоящее время изучение этих путей развития в куриного эмбриона проводится путем применения ингибиторов и наркотики на локализованных участках и при низких концентрациях, с использованием различных методов. В vitro культивирования тканей — это метод, который позволяет исследование тканей, отделены от организм хозяина, минуя одновременно многих физических ограничений при работе с весь эмбрионов, например восприимчивость эмбрионов высокие дозы потенциально смертоносных химических веществ. Здесь мы представляем organotypic протокол для культивирования эмбриональные куриные половины головы в пробирке, который открывает новые возможности для изучения процессов развития за пределами в настоящее время установленных методов культивирования.
Введение
Эмбриональные куриные (Gallus gallus) является организма отличную модель широко используется в области биологии. Ее инкубационный период составляет около 21 дней, и много яиц может быть инкубировали одновременно, делая эксперименты быстро и эффективно. Возможно самое главное, эмбрион также легко манипулировать, позволяя обширное исследование из ключевых процессов развития и генов и белков, которые управляют эти процессы.
Эмбриональные куриные глаз это сложный орган, который развивается через взаимодействия целого ряда различных тканях похож на многих других систем организма. Этот метод позволяет исследование развития этих ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: На стадии эмбриона, используйте гамбургер и Гамильтон12 (HH) Промежуточная таблица.
1. эмбриона инкубации
- Инкубируйте яйца оплодотворенные куриные в инкубатор стерильные, контролем температуры при 37 ° C ± 1 ° C и ~ 40% влажности.
- Поверните яйца 1 x в день и позволяют им инкубировать в HH34 (8 дней после оплодотворения).
2. Подготовка и стерилизации материалов
- Для 12 эмбрионов, автоклав, 2 Л дистиллированной воды, 1 Л 0,85% куриных физраствора, 12 стеклянной пипетки, 1 коробка бумажных салфеток, 24 2,5 х 2,5 см квадратов полу пористой фильтро....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
С помощью этого метода, эмбриональные куриные глаз может культивированный от 8 день его развития (HH34) в vitro на 4 дня. Четыре дня в ovo развития соответствует HH38.
Этот метод культивирования поддерживает развитие бутонов перо вокруг глаз и на веках (рис. 1B). Эти перья почки не являются настоящей в ovo в HH34 до культивирования (рис. 1а), .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Этот протокол использует установленные ткани, культивирование методы для достижения роста, курица глаза от эмбриональных день 8 (HH34) в vitro на 4 дня. Этот метод культивирования сетки первоначально был описан Trowell15. Мы оптимизировали протокол от Пинто и холл в 1991 исследование16 используя полу пористые мембраны с сеткой для изучения индуктивный сигналов между слоями разделенных тканей эмбриона курицы глаз15. С помощью этого метода, пл.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Авторы хотели поблагодарить Грегори Халлер (Маунт Сент Винсент университет) за его предварительную работу по разработке протокола. Авторы хотели бы также поблагодарить Николас Джонс (Университет Маунт Сент-Винсент) для его технического опыта и помощи с съемок и производства аудио визуальной части рукописи. Дэниэл Эндрюс был поддержан финансирование от МСВУ и естественных наук и инженерных исследований Совет Канады (СЕНТИ) через награду исследования студент бакалавриата. Тамара а. Франц-Odendaal поддерживается грантом Сенти обнаружения.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Чашки Петри для клеточных культур 35 мм | Чашка | 353001 | удобным захватом, полистирол, непирогенный |
| 100 мм чашки Петри для клеточной культуры | Чашки Corning | 353003 | для культуры тканей, полистирол, непирогенная |
| бумажная салфетка | Kimtech | 34155 | Kimtech Science Brand Wipe Wipers, 280 на картонную |
| проволочную сетку | н/д | /д | проволочная сетка из нержавеющей стали (размер сетки 0,7 мм) |
| одноразовые стеклянные пипетки | VWR | 14673-010 | Боросиликатное стекло одноразовые 5 3/4" |
| питательная среда | Gibco | 12591-038 | Fitton-Jackson Modification, [+] L-глутамин с феноловым красным (BGJB) |
| пенициллин-стрептомицин | Sigma-Aldrich | P4458 | 10000 единиц/мл пенициллин стрептомицин раствор стабилизированный |
| фильтр бумага | Ватман | 1454 090 | полупористая фильтровальная бумага 90мм |
| оплодотворенные куриные яйца | Сельскохозяйственный колледж Университета Далхаузи | н/д можно | получить на местных фермах |
| хлорид натрия (NaCl) | EMD | SX0420-3 | кристаллы хлорида натрия, реагент класс |
| 1 л стеклянная бутылка | VWR | 89000-240 | 1 л пирекс автоклавируемая стеклянная бутылка |
| этанол | Fisher Scientific | BP82011 | 70% молекулярно-биологические |
| контейнеры для посуды | н/д | н/д магазинные | стерилизованные |
| одноразовыми бритвенными лезвиями | EtOH VWR | 55411-050 | однолезвийные промышленные бритвенные лезвия (хирургическая углеродистая сталь) |
| пластиковые ложки | н/д н | /д н/д | магазинные и стерилизованные с |
| пылезащитной маски | 3M | н/д | 3M 8500 Comfort Mask |
| параформальдегид | Sigma-Aldrich | P6148 | параформальдегид, реагентный класс, кристаллический |
| нейтральный буферизованный формалин | Fisher Scientific | 72210 | 10% нейтральный буферизованный формалин |
| фосфатный буферный физиологический раствор (PBS) | н/а | /д | 10X фосфатно-солевой буферный pH 7,4 (137 мМ NaCl, 2,5 мМ KCl, 4,3 мМ Na2HPO4, 1,4mM KH2PO4)15 |
| мл соколиные пробирки | VWR | 21008-216 | предварительно стерилизованные центрифужные пробирки |
| щипцы | FST | н/д | мелкие щипцы |
| цыплый физиологический раствор | н/д | н/ | 0,85% NaCl |
| фольга | н/д | н/д | магазинное |
| бумажное полотенце | н/д | /д | магазинный |
Ссылки
- Franz-Odendaal, T. A. Towards understanding the development of scleral ossicles in the chicken, Gallus gallus. Developmental Dynamics. 237 (11), 3240-3251 (2008).
- Scholey, J. M. Functions of motor proteins in echinoderm embryos: an argument in support of antibody inhibition experiments. Cell Motility and the Cytoskeleton
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
