Методическая статья

Оценивая роль митохондриальной функции в связанных с раком усталость

DOI:

10.3791/57736

⸱

17 мая 2018 г.

 ,  ,  , 
1National Institute of Nursing Research, National Institutes of Health

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нашей целью было разработать практический протокол для оценки митохондриальной дисфункции, связанные с усталостью в раковых больных. Этот инновационный протокол оптимизирован для клинического использования с участием только стандартные кровопускания и основных лабораторных процедур.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Усталость является общей и изнурительных условие, которое затрагивает большинство больных раком. На сегодняшний день, усталость остается плохо характеризуется не диагностический тест объективно измерить тяжесть этого состояния. Здесь мы описываем оптимизированный метод для оценки митохондриальной функции получения, собранных из усталость раковых больных. Используя компактный внеклеточного потока системы и впрыска респираторные ингибиторы, мы изучили КСДОР митохондриальной функциональное состояние, измеряя базальную митохондриальное дыхание, запасные дыхательных емкости и фенотип энергии, который описывает предпочтительной энергии путь реагировать на стресс. Свежий получения легко доступны в клинических условиях, с использованием стандартных кровопускания. Весь assay, указанных в настоящем Протоколе может быть завершена в менее чем 4 часа без участия сложных биохимических методов. Кроме того мы описываем метод нормализации, который необходим для получения воспроизводимых данных. Простые процедуры и нормализации представленные методы позволяют повторных проб от того же пациента и поколения воспроизводимость данных, которые могут быть сопоставлены между моментами времени оценить потенциальные эффекты лечения.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Усталость является распространенным и мучительное условие, что оказывает негативное воздействие на качество жизни больных раком1. К этой дате усталость рак остается плохо определены и полагается только на субъективных отчетности больных2. Таким образом существует настоятельная необходимость определить легко адаптируемые диагностических лабораторных испытаний объективно характеризовать усталость в клинических условиях3,4.

Были предложены несколько основных механизмов, включая дисфункцию митохондрии, вызвать усталость5. Митохондрии являются органеллы электростанция, обеспечивая 95% потребностей клеточной энергии через окислительное фосфорилирование и играть важную роль в сигнализации кальция, апоптоз, иммунные сигнализации и регулирование других внутриклеточных сигнальных события6 . Соответственно нарушение митохондриальной биоэнергетики и дефекты в производстве энергии может способствовать усталости. Поддерживая эту гипотезу, предыдущих исследований наблюдали мутации в митохондриальной ДНК у больных с синдромом хронической усталости7. Хотя она остается неясным ли патофизиологические происхождения усталости лежит в пределах центральной нервной системы или периферических тканях, например, скелетных мышц8,9, в настоящее время нет прямой метод, чтобы точно оценить митохондриальной дисфункции, относящиеся к усталости в живой, дышащими клетками.

С помощью мононуклеаров периферической крови (получения) для изучения функции митохондрий предлагает несколько преимуществ. Во-первых получения легко доступны в клинических условиях, с использованием стандартных кровопускания и могут быть изолированы, быстро, используя основные лабораторные методы. Во-вторых сбор крови менее инвазивна, чем сбор других тканей, таких как биопсия мышц. Таким образом могут быть собраны образцы крови из той же пациентки неоднократно с течением времени, что облегчает Продольная Оценка эффектов лечения. Интересно, что функции митохондрий в репликацию, как представляется, быть хорошо коррелирует с митохондриальных статус почек в животной модели10. Кроме того иммунных клеток митохондрий используются в качестве прокси-сервера для обнаружения системных изменений при различных заболевания условия11,12. Митохондрий в циркулирующие иммунные клетки особенно чувствительны к изменениям в иммунной функции и иммунных сигнальных молекул, таких как цитокинов13,14,15. Например было отмечено, что получения от пациентов с острой ревматической воспалительных заболеваний exhibit потребление кислорода высокой базовой14. Напротив потребление кислорода был сокращен в репликацию, изолированы от пациентов с системных воспалительных процессах, включая сепсис16. При воспалительных процессах свободные радикалы, производимые неблагополучных митохондрий может способствовать дальнейшему повышенный Оксидативный стресс и длительное воспаление17. Центральная роль митохондрий в производстве энергии, а также окислительного стресса предполагает потенциальную полезность использования функции митохондрий как прокси для изучения усталость в раковых больных 13.

Предыдущие исследования, изучение митохондриальной функции используются биохимические методы, измерение потенциала митохондриальной мембраны или изоляции определенных клеточных популяций, которые не могут быть легко адаптированы в клинических условиях5, 14,18. В последние годы развитие внеклеточного потока анализов позволило исследователям легко и точно проанализировать изменения в скорости потребления кислорода (OCR) в ответ на автоматизированных инъекции респираторные ингибиторы19,20 , 21 , 22. Однако большинство из этих исследований предназначены для типов конкретных клеток и большой формат высокой пропускной способности не могут быть применимы в клинических условиях. В этой рукописи мы описываем оптимизированный протокол для изучения митохондриальной функции для клинического использования.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Текущие исследования (NCT00852111) был утвержден институционального обзора Совет (IRB) национальных институтов здравоохранения (НИЗ), Бетесда, штат Мэриленд. Участники, поступил в этом исследовании были euthymic мужчины, 18 лет или старше, которые были диагностированы с не метастатического рака предстательной железы с или без предварительного простатэктомия и были планируется получить внешний пучка излучения терапии (ДГТ). Потенциальные участники были исключены, если они имели прогрессирующее заболевание, которое может привести к значительным усталость, имели психиатрические заболевания в течение последних пяти лет, нескорректированной гипотиреоз или анемии, или имели второй злокачественности. Люди, которые использовали седативные, стероиды или нестероидные противовоспалительные агенты были также исключены. Образцы крови здорового управления были получены в низ Департамента трансфузионной медицины от здоровых доноров под IRB-утвержден протоколом (NCT00001846). Все участники набираются Магнусон Клинический исследовательский центр на низ. До участия в исследовании были получены подписанного письменного информированного согласия.

1. митохондриальной функции измерения подготовка (1 день эксперимента)

  1. Гидрат датчик картриджа (см. Таблицу материалов; приблизительная продолжительность: 5 мин).
    1. Выньте картридж датчик из пакета. Добавить 200 мкл Calibrant решение в каждой скважине утилита пластины, а затем заполнить каждый ров с 400 мкл Calibrant решения.
    2. Обратный датчик пластины к пластине утилиты, которая теперь имеет Calibrant решение в нем. Гидрат картридж в инкубаторе 37 ° C-CO2 на ночь.
      Примечание: Датчик картриджа необходимо быть увлажненной минимум 4 часа и более 72 ч.

2. Клинический пробоподготовки (день 2 эксперимента)

  1. Мера усталости с помощью 13-пункт функциональной оценки хронической болезни терапии - усталость (FACIT-F)2,,2324 базовой линии (до начала ДГТ), медианы и завершение ДГТ и 1-год пост ДГТ.
    1. Используйте 0 - 4 шкала для каждого элемента ответа, где 0 представляет «не на всех», и 4 указывает, что ответчик относится соответствующее заявление «очень много.» Всего баллов должны варьироваться от 16-53, с более низкие баллы, отражающие высокая усталостная интенсивности.
    2. Определите усталость как FACIT-F Оценка ниже, чем 43, со счетом FACIT-F ≥43, указывающие на отсутствие или не установлено клинически значимого усталость2.
      Примечание: FACIT-F балл 43 Лучший делит усталость десятки больных раком и общего населения2.
    3. Включить следующие пункты 13 в шкале усталость FACIT: 1) я чувствую усталость; 2) я чувствую себя слабым повсюду; 3) я чувствую себя вялым («вымываются»); 4) я чувствую усталость; 5) я имею проблемы с запуском вещи, потому что я устал; 6) я имею проблемы с отделкой вещи, потому что я устал; 7) я имею энергии; 8) я могу сделать мой обычной деятельности; 9) мне нужно спать в течение дня; 10) я слишком устал, чтобы поесть; 11) мне нужна помощь, делая моей обычной деятельности; 12) я разочарование, будучи слишком устал, чтобы делать вещи, которые я хочу сделать; и 13) у меня ограничить моей социальной активности, потому что я устал.
  2. Изолировать КСДОР из свеже собранных крови (приблизительная продолжительность: 1 ч).
    1. Собрать 8 мл крови в трубу подготовки мононуклеарных клеток (см. Таблицу материалы).
      Примечание: Образцы крови должны быть обработаны в течение 2 ч коллекции. Если образцы крови обрабатываются более 2 ч после взятия пробы, качество получения может быть нарушена.
    2. Центрифуга на 1750 x г за 30 мин при комнатной температуре (18-25 ° C). Передать облачный слой 15 мл Конические трубки. Добавить до 15 мл PBS и инвертировать 5 раз.
    3. Центрифуга на 300 x g 15 минут при 4 ° C. Осторожно снимите и выбросьте супернатант без тревожных Пелле. Вновь приостановить гранулы, добавив до 10 мл PBS и инвертировать 5 раз.
    4. Центрифуга на 300 x g 10 мин при 4 ° C. Отменить супернатанта жидкости и вновь приостановить клеток в 1 мл PBS. Передача репликацию до 1,5 мл отцентрифугировать.
    5. Центрифуга на 610 x g за 10 минут. Тщательно удалить супернатант и Ресуспензируйте Пелле в полной RPMI 1640 (RPMI 1640 с 10% FBS, 10 мм пенициллина/стрептомицина).
  3. Слой клеток пластины для non сторонник клетки (приблизительная продолжительность: 30 мин).
    1. Подготовка клеток и тканей клеевой раствор (см. Таблицу материалы) путем разбавления Стоковый раствор бикарбоната натрия 0,1 М рН 8.0. Рабочая решение должно быть на 3,5 мкг/см2 площади поверхности.
      Примечание: Это решение содержит полифенольные белки, извлеченные из морской мидии Mytilus edulis. Эти белки являются ключевыми компонентами клея, выделяемый мидий на якорь самой поверхности. Мы находим, что клетки-так работает лучше с получения.
    2. Добавьте 100 мкл разбавленного клея решения для каждой скважины и инкубировать в течение по крайней мере 20 минут при комнатной температуре. Промойте три раза ди воду и воздух сухой.

3. митохондриальной функции измерения

  1. Подготовка анализа СМИ (приблизительная продолжительность: 10 мин).
    Примечание: Assay СМИ должны быть свежеприготовленный на день эксперимента.
    1. Добавьте L-глютамина, пируват и глюкозы основывать средства массовой информации (же составляющие как средний Дульбекко изменение орла (DMEM), но без бикарбонат натрия, глюкоза, глютамин или пируват натрия) чтобы сделать анализ средств массовой информации. Разогреть СМИ до 37 ° C, затем скорректировать рН 7,4.
      Примечание: Концентрация L-глютамин, пируват и глюкозы, как правило, то же самое, как концентрации в СМИ нормального роста, но может быть скорректирована на основании анализа.
  2. Подготовить репликацию для Mito стресс-тест (приблизительная продолжительность: 2 h).
    1. Плиты достаточно получения из шага 2 в каждой скважине до 80-90% confluency. По нашему опыту 1,5 x 105 клеток/также принесли наиболее последовательных результатов.
      Примечание: Колодцы A и H фон колодцев и должен содержать только пробирного СМИ не клетками. В скважинах B-G мы рекомендуем, покрытие по крайней мере 3-6 скважин на пациента сэмпл с целью учета выбросов.
    2. Вращаются пластины вниз на 200 x g за 2 мин позволить клетки придерживаться нижней части скважины. Вымойте клетки один раз с Assay СМИ. Этот шаг удаляет из питательных сред сыворотки и бикарбоната натрия.
      Примечание: В нашем опыте, Стиральная шаг обычно удаляет 20-30% клеток.
    3. Добавьте 180 мкл Assay СМИ в каждой скважины, включая колодцы фон A и H. инкубировать в инкубатор-CO2 37 ° C за 45-60 мин.
  3. Выполнение стресс-тест Mito
    1. Воссоздания наркотиков в Mito стресс комплект с Пробирной СМИ следующим образом:
      1. Oligomycin: Добавьте 252 мкл пробирного СМИ в пробирку для создания Стоковый раствор на 50 мкм.
      2. FCCP: Добавьте 288 мкл пробирного СМИ в пробирку для создания Стоковый раствор на 50 мкм.
      3. Antimycin A / ротенон: добавить 216 мкл пробирного СМИ в пробирку для создания Стоковый раствор на 25 мкм.
    2. Вихревой воссоздана препаратов для примерно 1 минуту. Развести в рабочие решения.
      Примечание: Концентрации рабочих растворов следует титруют и заранее до эксперимента в зависимости от типа ячейки. Для получения, мы находим, что 1 мкм Oligomycin, 1 мкм FCCP и 0,5 мкм antimycin A / ротенон работать лучше.
    3. Пипетка наркотики в каждый порт картриджа датчика последовательно:
      1. Порт A: Пипетка 20 мкл 10 мкм Oligomycin, для окончательного концентрации в каждой скважине 1 мкм.
      2. Порт B: пипеткой 22 мкл 10 мкм FCCP, для окончательного концентрации в каждой скважине 1 мкм.
      3. Порт C: Пипеткой 25 мкл 5 мкм antimycin A / ротенон для конечной концентрации в каждой скважине 0,5 мкм.
  4. Выберите «Mito стресс-тест» на инструменте внеклеточного потока. Выполните запрос документа и вставьте датчик картридж. Этот документ будет автоматически выполнять калибровку датчика. Вставьте ячейки пластины после калибровки датчика и инструмент будет закончить остальной части assay. Динамика кислорода измеряется на 530 Нм (возбуждение) / 650нм (выбросов), и Протон концентрация измеряется в 470 Нм (возбуждение) / 530 Нм (выбросов).

4. Нормализация данных митохондриальной функции

  1. Приготовляют раствор распространения Assay клетки (приблизительная продолжительность: 5 мин).
    1. Добавить 48 мкл пятен нуклеиновой кислоты (500 x) и 240 мкл подавитель фона в 11,7 мл PBS (2 x). Пятен нуклеиновой кислоты клетки permeant ДНК связывающих красителя, и подавитель фона маскирования краситель, который блокирует отмершие клетки или клетки с нарушенной клеточной мембраны целостности от будучи окрашенных. Сочетание ДНК связывающих красителя и подавитель фона гарантирует, что только живые клетки витражи.
    2. Добавьте одинаковый объем 2 x рабочего раствора (180 мкл) непосредственно в среду в каждой скважине после завершения Mito стресс-тест.
  2. Инкубации клеток при наличии клеток распространения пробирного решение в инкубаторе 37 ° C на 45-60 мин Quantify количество живых клеток (флуоресцентный) на пластину читателя на 508 Нм (возбуждение) / 527 Нм (выбросов) и нормализации данных OCR (приблизительная продолжительность: 10 min) .
    Примечание: в дополнение к количество живых клеток, пользователи могут также выбрать нормализовать свои данные с общее количество клеток, количество нуклеиновой кислоты, концентрации белка, и т.д.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Стресс-тест Mito опирается на измерения скорости потребления кислорода (OCR) после впрыска различных респираторные ингибиторы на карте митохондриальной полный профиль. OCR измерений после каждой инъекции наркотиков может использоваться для вычисления следующие параметры, относящиеся к митохондриального здоровья: Базальной OCR сначала измеряется до любых наркотиков путем инъекций для оценки потребления кислорода, необходимых для удовлетворения отдыха уровня АТФ спроса. Баз...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Усталость в онкологических больных является изнурительной условии, что не является хорошо определенным или характеризуется1. Диагноз усталости полностью основывается на субъективной отчетности и нет текущий стандарт диагностики или лечения этого состояния, во многом объясняется отсутствием понимания в своем pathobiology2. Предлагаемых механизмов, лежащих в основе усталость в раковых больных обесценение в митохондриальной функции является одним из наиболее терапевтически ори...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это исследование полностью поддерживается Отделом интрамуральных исследований из Национального института сестринского исследований низ, Бетесда, штат Мэриленд.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Трубка для приготовления мононуклеарных ячеек CPT BD Biosciences362761Для выделения PBMC после флеботомии
RPMI-1640 Corning10-040Для изготовления питательных сред для PBMCs
Фетальная бычья сыворотка (FBS)Corning35-010-CVДля изготовления питательных сред для PBMCs
Пенициллин/стрептомицинThermoFisher15140122Для изготовления питательных сред для PBMCs
Cell-TakCorning354240Клеточный и тканевый адгезивный раствор; позволяет суспензионным клеткам прилипать к поверхности
Seahorse XF Calibrant SolutionAgilent103059-000Для гидратационных картриджей
XFp Fluxpak (минипланшеты и сенсорные картриджи)Agilent103022-100Содержит минипланшеты для клеточных культур XFp и сенсорные картриджи
Базовая среда XFAgilent103335-100Для изготовления фильтрующих сред для анализа XF
45% клеточной культуры D-(+)-раствора глюкозыCorning25-037-CIДля изготовления XF Пробирная среда
Раствор пирувата натрияCorning 25-000-CIДля изготовления пробирных сред для анализа XF
L-глутаминаThermoFisher25030081Для приготовления сред для анализа XF
Seahorse XFp Mito Stress Test KitAgilent103010-100Содержит олигомицин, FCCP, антимицин А/ротенон
CyQUANT Анализ прямой пролиферации клетокThermoFisherC35011Для количественного определения живых клеток и нормализации данных
Seahorse XFp AnalyzerAgilentS7802AEAДля измерения митохондриальной функции в живых клетках
Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode Reader (или любой прибор, который может количественно оценить флуоресцентные клетки в планшете)BioTekBTCYT5PVДля количественного определения живых клеток и нормализации данных
раствор

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Berger, A. M., et al. Cancer-Related Fatigue, Version 2.2015. Journal of the National Comprehensive Cancer Network. 13 (8), 1012-1039 (2015).
  2. Feng, L. R., Dickinson, K., Kline, N., Saligan, L. N. Different phenotyping approaches lead to dissimilar biologic profiles in men with chronic fatigue following radiation therapy. Journal of Pain and Symptom Management. 52 (6), 832-840 (2016).
  3. Feng, L. R., et al. Clinical Predictors of Fatigue in Men With Non-Metastatic Prostate Cancer Receiving External Beam Radiation Therapy. Clinical Journal of Oncology Nursing. 19 (6), 744-750 (2015).
  4. Feng, L. R., Wolff, B. S., Lukkahatai, N., Espina, A., Saligan, L. N. Exploratory Investigation of Early Biomarkers for Chronic Fatigue in Prostate Cancer Patients Following Radiation Therapy. Cancer Nursing. 40 (3), 184-193 (2017).
  5. Myhill, S., Booth, N. E., McLaren-Howard, J. Chronic fatigue syndrome and mitochondrial dysfunction. International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 2 (1), 1-16 (2009).
  6. Pernas, L., Scorrano, L. Mito-Morphosis: Mitochondrial Fusion, Fission, and Cristae Remodeling as Key Mediators of Cellular Function. Annual Review of Physiology. 78 (1), 505-531 (2016).
  7. Vecchiet, L., et al. Sensory characterization of somatic parietal tissues in humans with chronic fatigue syndrome. Neuroscience Letters. 208 (2), 117-120 (1996).
  8. Jones, D. E. J., Hollingsworth, K. G., Taylor, R., Blamire, A. M., Newton, J. L. Abnormalities in pH handling by peripheral muscle and potential regulation by the autonomic nervous system in chronic fatigue syndrome. Journal of Internal Medicine. 267 (4), 394-401 (2010).
  9. Feng, L. R., Suy, S., Collins, S. P., Saligan, L. N. The role of TRAIL in fatigue induced by repeated stress from radiotherapy. Journal of Psychiatric Research. 91, 130-138 (2017).
  10. Karamercan, M. A., et al. Can peripheral blood mononuclear cells be used as a proxy for mitochondrial dysfunction in vital organs during hemorrhagic shock and resuscitation. Shock. 40 (6), (2013).
  11. Ijsselmuiden, A. J. J., et al. Circulating white blood cells and platelets amplify oxidative stress in heart failure. Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine. 5, 811(2008).
  12. Kong, C. -W., et al. Leukocyte mitochondrial alterations after cardiac surgery involving cardiopulmonary bypass: Clinical correlations. Shock. 21 (4), 315-319 (2004).
  13. Straub, R. H. The brain and immune system prompt energy shortage in chronic inflammation and ageing. Nature Reviews Rheumatology. 13, 743(2017).
  14. Kuhnke, A., Burmester, G., Krauss, S., Buttgereit, F. Bioenergetics of immune cells to assess rheumatic disease activity and efficacy of glucocorticoid treatment. Annals of the Rheumatic Diseases. 62 (2), 133-139 (2003).
  15. Kramer, P. A., Ravi, S., Chacko, B., Johnson, M. S., Darley-Usmar, V. M. A review of the mitochondrial and glycolytic metabolism in human platelets and leukocytes: Implications for their use as bioenergetic biomarkers. Redox Biology. 2, Supplement C 206-210 (2014).
  16. Garrabou, G., et al. The Effects of Sepsis on Mitochondria. The Journal of Infectious Diseases. 205 (3), 392-400 (2012).
  17. Mittal, M., Siddiqui, M. R., Tran, K., Reddy, S. P., Malik, A. B. Reactive oxygen species in inflammation and tissue injury. Antioxidants & Redox Signaling. 20 (7), 1126-1167 (2014).
  18. Adrie, C., et al. Mitochondrial Membrane Potential and Apoptosis Peripheral Blood Monocytes in Severe Human Sepsis. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164 (3), 389-395 (2001).
  19. Traba, J., Miozzo, P., Akkaya, B., Pierce, S. K., Akkaya, M. An optimized protocol to analyze glycolysis and mitochondrial respiration in lymphocytes. Journal of Visualized Experiments. (117), e54918(2016).
  20. Nicholls, D. G., et al. Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells. Journal of Visualized Experiments. (46), e2511(2010).
  21. Van den Bossche, J., Baardman, J., de Winther, M. P. J. Metabolic characterization of polarized M1 and M2 bone marrow-derived macrophages using real-time extracellular flux analysis. Journal of Visualized Experiments. (105), e53424(2015).
  22. Boutagy, N. E., et al. Using isolated mitochondria from minimal quantities of mouse skeletal muscle for high throughput microplate respiratory measurements. Journal of Visualized Experiments. (104), e53216(2015).
  23. Yellen, S. B., Cella, D. F., Webster, K., Blendowski, C., Kaplan, E. Measuring fatigue and other anemia-related symptoms with the Functional Assessment of Cancer Therapy (FACT) measurement system. Journal of Pain and Symptom Management. 13 (2), 63-74 (1997).
  24. Yost, K. J., Eton, D. T., Garcia, S. F., Cella, D. Minimally important differences were estimated for six Patient-Reported Outcomes Measurement Information System-Cancer scales in advanced-stage cancer patients. Journal of Clinical Epidemiology. 64 (5), 507-516 (2011).
  25. Kang, J. -G., Wang, P. -y, Hwang, P. M. Methods in Enzymology. Galluzzi, L., Kroemer, G. 542, Academic Press. 209-221 (2014).
  26. Chacko, B. K., et al. Methods for defining distinct bioenergetic profiles in platelets, lymphocytes, monocytes, and neutrophils, and the oxidative burst from human blood. Laboratory Investigation. 93 (6), 690-700 (2013).
  27. Jones, L. J., Gray, M., Yue, S. T., Haugland, R. P., Singer, V. L. Sensitive determination of cell number using the CyQUANT® cell proliferation assay. Journal of Immunological Methods. 254 (1), 85-98 (2001).
  28. Hartman, M. -L., et al. Relation of mitochondrial oxygen consumption in peripheral blood mononuclear cells to vascular function in type 2 diabetes mellitus. Vascular Medicine. 19 (1), London, England. 67-74 (2014).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Mitochondrial FunctionCancer FatiguePBMC IsolationExtracellular FluxMito Stress TestSpare Respiratory CapacityBasal RespirationOligomycin FCCPAntimycin RotenoneCell Proliferation Assay

Похожие статьи