Методическая статья

Анализ AtHIRD11 внутренние беспорядки и привязки к ионов металлов Капиллярный электрофорез и близость капиллярного электрофореза

5.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57749

⸱

22 августа 2018 г.

 ,  ,  , 
1Institute of Medicinal and Pharmaceutical Chemistry, TU Braunschweig

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол сочетает в себе характеристики образец протеина Капиллярный электрофорез и быстро привязки скрининга для заряженных лигандов, близость капиллярного электрофореза. Рекомендуется для белков с гибкой структурой, например неразрывно неупорядоченных белки, чтобы определить какие-либо различия в привязке для различных конформеров.

Аннотация

Растения сильно зависят от окружающей их среды. Для того, чтобы приспособиться к стрессовым изменениям (например, засухи и высокой солености), высших растений развиваться классы неразрывно неупорядоченных белков (ВПЛ) для уменьшения окислительного и осмотического стресса. Эта статья использует комбинацию Капиллярный электрофорез (КГЭ) и мобильность сдвиг сродство электрофореза (ACE), чтобы описать поведение привязки различных конформеров AtHIRD11 ВПЛ из Arabidopsis thaliana. КГЭ используется для подтверждения чистоты AtHIRD11 и исключить фрагменты, Посттрансляционная изменений и других примесей, как причин для сложных пик шаблонов. В этой части эксперимента различные примеры компонентов разделенных их различных масс вязкой гелем внутри капилляра и обнаружены с детектором массив диода. Потом ACE исследуется поведение привязки образца к различных ионов металлов. В этом случае лигандом добавляется буферного раствора и сдвиг в миграции время измеряется для того, чтобы определить, произошло ли событие привязки или нет. Одним из преимуществ использования комбинации КГЭ и ACE определить поведение привязки МВУ является возможность автоматизировать электрофорез геля и пробирного привязки. Кроме того КГЭ показывает нижний предел обнаружения, чем классические гель-электрофорез и туз может определить порядок привязки лиганд в быстром образе. Кроме того ACE также может применяться для других заряженных видов чем ионы металла. Однако использование этого метода для привязки эксперименты ограничен в его способность определить количество сайтов связывания. Тем не менее сочетание КГЭ и туз может быть адаптирована для характеризующие поведение привязки любой образец протеина к многочисленные заряженных лигандами.

Введение

Растения являются более зависимыми от их окружающей среды, чем многие другие формы жизни. Поскольку растения не может переехать в другие места, они должны адаптироваться к изменениям в их окружении (например, засухи, холодной и высокая концентрация соли). Следовательно высших растений разработана специализированная стресс белки как дегидринов, которые выполняют многообразные задачи, чтобы уменьшить стресс ячейки, относящиеся к высокой солености. Эти белки связывают воды и ионов внутри клеток, уменьшить окислительный стресс путем привязки Cu2 +-ионов и взаимодействовать с фосфолипидами, а также cytoskeletons. Кроме того, привязка Zn2 +-ионов позволяет эти белки выступают в качестве факторов транскрипции. Их способность фиксироваться Ca2 +-ионов после фосфорилирования был также сообщили1.

Многофункциональный поведение этих белков связана с отсутствием гидрофобные аминокислотных остатков. Следовательно им не хватает любой гидрофобных взаимодействий внутри пептидные цепи, а также ограничением структуры. Однако потому что эти белки отсутствие ограничительного структуры, они могут занимать различные конформеров на тех же условиях. Таким образом они могут быть описаны лучшие, как ансамбль сооружений, а не один конформации. Белки с этими свойствами известны как внутренне неупорядоченным белков (ВПЛ) и широко используется понятие стресса белков и перекрестных помех между различными путями в эукариотической клетки2.

Один из этих связанных со стрессом ВПЛ является AtHIRD11. Это один из Arabidopsis thalianaнаиболее высоко засухи выразил ВПЛ. Следовательно различные конформеров могут быть разделены их эффективный радиус для зарядки соотношение и капиллярного электрофореза (CE) был использован для дальнейшего расследования. Предыдущие эксперименты ACE продемонстрировал взаимодействия между AtHIRD11 и ионов переходных металлов таких как Cu2 +-, Zn2 +-, Co2 +и Ni2 +-ионов. Подробные результаты можно найти в Хара и др. 3 и Люберцах и др. 4.

ACE метод, который будет использоваться здесь основан на нашей ранее опубликованных работ6. Однако добавление acetanilide маркер EOF для Образец протеина не подходит. AtHIRD11 показывает широкий пик шаблоны, и добавление метки EOF образца будет замаскировать две вершины. Таким образом маркер используется в отдельном сеансе. Прежде чем рассматривается поведение привязки, он подтвердил, что пики, найденные во время предыдущих экспериментов являются из разных конформеров. Таким образом КГЭ используется для различения между конформеров белка, столб-поступательные изменения протеина и примесей, таких как фрагменты AtHIRD11, их разными массами. Впоследствии Исследовано поведение характеризуется AtHIRD11 Пример привязки к различных различных ионов металлов.

Целью этой статьи является описание экспериментальной установки для различения МВУ и другие компоненты образца для того чтобы оценить различия в поведении привязки различных конформеров.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка документов капиллярного электрофореза

  1. Подготовить капилляры
    1. Используйте стеклорез для нарезать голые кварцевое кремнезема капилляра с внешнее покрытие полиимида и внутренний диаметр 50 мкм 33 см (для КГЭ эксперимента) и длиной 30 см (для эксперимента, ACE) капилляров. Выполните резки на стеклянной пластины.
      Примечание: 2 различных экспериментальных установок были разработаны для 2 различных инструментов. Для того, чтобы использовать их на других инструментах, надлежащего метода передачи должна быть выполнена и длина капилляра должен корректироваться на допустимую длину документа.
    2. Используйте перо для обозначения в середине окна широкий обнаружения 1 см на расстоянии 24,5 см от одного конца капилляра для эксперимента КГЭ и 21,5 см от одного конца капилляра для ACE эксперимента (эффективная длина).
    3. Удаление полиимида внешнее покрытие из капилляров, сжигая его с паяльной лампой, 0,5 см до и после знака. Аналогично Использование паяльной лампой для удаления 1 см покрытия на обоих концах капилляров.
      Примечание: Эффективная длина может отличаться поскольку он полагается на приборе капиллярного электрофореза используется.
    4. Очистите концы капилляров и обнаружения windows с этанолом и мягких тканей.
      Примечание: Немелованной капилляров являются менее гибкими и, вероятно, сломать.
  2. Установите капилляров
    1. Установите капилляр в системе CE с окном обнаружения вблизи розетки.
      Примечание: Различные модели инструмента CE имеют различные Холдинг систем для капилляров. Обратитесь к руководству используемый инструмент для точных инструкций.

2. подготовить решения

  1. Подготовка решения для анализа КГЭ
    1. Подготовьте трис (гидроксиметил) aminomethane (Tris)-SDS буфера (100 mM/1% w/v) при pH 8.0.
      1. Используйте респираторные маски и стенд для взвешивания 1.00 g додецилового сульфата натрия (SDS) в 100-мл стакан.
      2. Добавьте 1,21 г в 100 мл стакан трис и растворить его с использованием 50 мл деионизированной воды и магнитные перемешать бар на магнитной мешалкой.
      3. Помещать рН электрода в раствор и скорректировать рН 8.0, используя 1.0 М HCl.
      4. Заполните решение в объемном колбу 100 мл и Добавьте деионизированной воды до отметки. Встряхните его осторожно, чтобы избежать любого образования пены.
    2. Приготовляют раствор NaOH 0,1 М.
      1. Весят 4.0 г NaOH в объемный флакон 100 мл. Заполните его до отметки с дейонизированной воды, чтобы сделать запас 1 М.
      2. Использование пипетки лампы 10 мл для передачи 10 мл этого раствора в другой объемный флакон 100 мл и заполнить его до отметки деионизированной водой.
    3. Подготовьте раствор HCl 0,1 М.
      1. Положите 10 мл 10 М HCl в 100 мл объемные колбу с использованием 10 мл Объемный дозатор и заполнить его до отметки деионизированной водой. Повторите этот шаг для получения 0,1 М HCl.
    4. Подготовка примера решения.
      1. Вес 0,5 мг белка в 1 мл трубку. Добавьте 0,5 мл буфера Tris-SDS гель из шага 2.1.1 с микропипеткой.
      2. Растворите белка путем встряхивания осторожно во избежание формирования пены и деградации белка.
        Примечание: Используйте ultrasonication если протеин не может быть распущен как описано; Избегайте любого нагрева раствора.
    5. Заполните решения во флаконы.
      1. Фильтр для каждого решения через 0,22 мкм поливинилиденфторид (ПВДФ) фильтр с помощью адекватных шприц непосредственно в пробирку.
        Примечание: Для решения гелем содержащих, обратное давление может быть высоким из-за его высокой вязкости.
      2. Подготовка 15 флаконов в общей сложности и Марк каждого, чтобы избежать любой путаницы.
        1. Заполните 3 флаконов с коммерчески доступных натрия Додециловый сульфат (SDS) гель буфера при pH 8.
          Примечание: Использование коммерчески доступных буфера гель SDS обеспечивает более точные результаты.
        2. Залейте 1 флакон 0,1 М NaOH и 1 флакон с 0,1 М HCl для промывки.
        3. Заполните 1 флакон с примером решения.
        4. Заполните 5 ампул с деионизированной воды и 4 флаконы с 0,1 мл деонизированной воды (погружение ампул).
          Примечание: Погружения флаконы используются как отходов пузырьки во время промывки капилляра до каждого запуска. Капиллярные концы, смоченной в воде, чтобы смыть остатки геля.
  2. Подготовка решения для анализа ACE
    1. Приготовляют раствор NaOH 1 M.
      1. Весят 4.0 г NaOH в объемный флакон 100 мл.
      2. Заполните его до отметки с дейонизированной воды, чтобы сделать запас 1 М.
    2. Подготовьте 0,1 М ethylendiaminetetraacetic кислоты (ЭДТА) в 0,1 М растворе NaOH.
      1. Передача 10 мл 0,1 М NaOH в 100 мл объемные колбу с помощью пипетки лампы 10 мл. Заполните его до отметки деионизированной водой.
      2. Весят 2,42 г ЭДТА на лодке весом и растворяет твердые соединения в 100 мл 0.1 М NaOH.
    3. Приготовляют раствор трис буфера (30 мм).
      1. Добавление 3.63 г трис, 200 мл деионизированной воды и перемешать бар в 500 мл стакан. Поместите стакан на тарелку, перемешать и включите его.
      2. РН электроды в стакан и скорректировать рН 7,4, используя 0,1 М HCl.
      3. Заполните решение в объемном флакон 1 Л и заполнить до отметки деионизированной водой.
        Примечание: Эта процедура должна повторяться или большие объемные колбу это необходимо, поскольку для всего анализа требуется более 1 Л.
    4. Подготовка acetanilide электроосмотического потока (EOF)-решение маркер (60 мкм).
      1. Добавьте 6 мг, acetanilide и 100 мл трис-буфер в объемный флакон 100 мл.
      2. Положите объемные колбу в ультразвуковой ванне и переключить его 30 мин.
    5. Подготовьте решение примера (1 мг/мл).
      1. Положить трубку microcentrifuge 0,5 мл на балансе точности и добавлять 0,3 мг порошка лиофилизированных AtHIRD11 в трубку.
      2. Используйте микропипеткой для добавления 0,3 мл буфера Tris 30 мм (рН 7,4) в трубе. Встряхните трубки тщательно, чтобы распустить белка.
    6. Подготовка решений лиганда.
      1. Подготовьте Стоковый раствор CaCl2 (5 мм).
        1. Возьмите лодку взвешивания, положить его на весы аналитические и весят 36.76 мг CaCl2* H2O.
        2. С помощью микропипеткой, флеш CaCl2* H2O от весом катера в 50 мл объемные колба с ранее подготовленными буфера Tris.
        3. Заполните объемный колбу с трис-буфер до отметки.
      2. Подготовьте решение оставшихся запасов (5 мм).
        1. Повторите шаг 2.2.6.1, используя другие металлические соли вместо CaCl2* H2O [MgCl2: 23.80 мг, BaCl2: 26.02 мг, Sr (№3)2: 52.91 мг, НКД2: 31.46 мг, SeCl4: 52.91 мг, CoCl 2* 2 H2O: 41.47 мг, CuCl2* 2 H2O: 42.62 мг, ZnCl2: 3.41 мг и NiCl2* 6 H2O: 59.43 мг].
          Примечание: Решение ZnCl2 имеет концентрацию 0,5 мм. Так как наблюдались сильные взаимодействия ионов и внутренней стенки капилляров, концентрация была снижена с коэффициентом 104.
      3. Приготовляют раствор2 500 мкм CaCl.
        1. 10 мл раствора штока2 CaCl, заполните и положил его в объемный флакон 100 мл.
        2. Заполните объемный колбу с буфером трис для знака и встряхнуть флакон.
      4. Приготовляют раствор2 250 мкм CaCl.
        1. 5 мл раствора штока2 CaCl, заполните и положил его в объемный флакон 100 мл.
        2. Заполните объемный колбу с буфером трис для знака и встряхнуть флакон.
      5. Повторите шаги 2.2.6.3 и 2.2.6.4 для других фондовых решения.
    7. Заполните решения во флаконах.
      Примечание: Каждый повторный запуск требуется набор впускных и выпускных флаконов. Использование свежей лигандом решений на входе и выходе уменьшает сдвиги в время миграции после каждого запуска.
      1. Заполните 250 мкм CaCl2 раствор в шприц 10 мл.
      2. Положите фильтр PVDF 0,22 мкм на шприц и push 2 мл раствора через фильтр, с помощью шприца, чтобы отменить этот отфильтрованный раствор.
      3. Заполните 10 ампул до максимального допустимого объема оставшихся 250 мкм CaCl раствором2 шприца. Марк каждый как 250 мкм CaCl 2 решения входе флакона.
      4. Заполните 10 ампул, пока они наполовину заполненный с 250 мкм CaCl2 решения. Марк каждый как 250 мкм CaCl решения 2 розетки во флаконе.
      5. Повторите шаги 2.2.7.1 - 2.2.7.4 металлические соли содержащих решений.
      6. Повторите действия для каждой пары входе и выходе флаконов, вместо этого с помощью 30 мм трис-буфере (рН 7,4) решение.
        Примечание: 30 ммоль/Л трис буфер рН 7,4 используется между запусками для получения данных время миграции для протеина в отсутствие ионов металлов. Это необходимо для того, чтобы игнорировать изменения в EOF.
      7. Повторите вышеуказанные шаги для одного флакона, вместо этого с помощью acetanilide метка EOF (60 мкм) решение. Кроме того повторите эти шаги, вместо этого использовать решение примера (1 мг/мл).

3. Капиллярная гель электрофоретического разделения

Примечание: Подготовьте разделения в соответствии с методом, описанным в предыдущей работе в Люберцах и др. 4.

  1. Подготовить анализ
    1. Состояние капилляров
      1. Установите термостат на 23 ° C.
      2. Промойте капилляра для 10 мин на 2,5 бар с 0,1 М NaOH.
      3. Промойте капилляр 5 мин на 2,0 бар с 0,1 М HCl.
      4. Промойте капилляра 2 мин на 2,0 бар деионизированной водой.
    2. Заполните в буфере гель SDS
      1. Заполните капилляр для 10 мин на 2,0 бар с коммерчески доступных буфера гель SDS при pH 8.0.
    3. Промойте капилляр до каждого запуска разделения
      1. Промойте капилляров на 3 мин на 4.0 бар с 0,1 М NaOH.
      2. Промойте капиллярные за 1 мин на 4.0 бар с 0,1 М HCl.
      3. Промойте капиллярные за 1 мин на 4.0 бар деионизированной водой.
      4. Промойте капилляра для 10 мин на 4.0 бар с буфером гель SDS.
  2. Запуск разделения
    1. Придать эжекции пример решения для КГЭ экспериментов (шаг 2.1.4), применяя 0,1 бар на 4 мин на входе.
    2. Применить-16.5 кв и давлении 2,0 бар на обоих концах капилляра для 25 мин.

4. близость капиллярного электрофореза анализ

Примечание: Подготовьте разделения в соответствии с методом, описанным в предыдущих работах, Люберцах и др. 4 и Alhazmi и др. 5.

  1. Состояние капилляров
    1. Установите термостат на 23 ° C.
      Примечание: Температура используется согласно опубликованные протоколы и может быть изменено для других температур4,5. Однако взаимодействия зависят от температуры и соответственно изменится.
    2. Флеш капилляр для 40 мин на 2,5 бар с 0,1 М NaOH.
    3. Промойте капилляра для 10 мин на 1,0 бар деионизированной водой.
    4. Промойте капилляра для 30 мин при 1,0 бара с буфером Трис 30 мм (рН 7,4).
  2. Подготовка для методов ACE
    1. Подготовьте метод для измерений без лигандами.
      Примечание: Acetanilide не был добавлен для примера решения, как это маскирует 2 белка пиков.
      1. Промойте капиллярные за 1 мин на 2,5 бар с 0,1 М раствором ЭДТА.
      2. Промойте капиллярные за 1 мин на 2,5 бар деионизированной водой.
      3. Промойте капилляра для 1,5 мин на 2,5 бар с буфером трис для уравновешивания.
      4. Внедрять решение acetanilide для 6 s на 0,05 бар и изменением входе и выходе флаконы для флаконов буфера Tris.
      5. Применить 0,05 бар 2.4 s нажать acetanilide решение от кончика капиллярной еще внутри.
      6. Применить 10,0 кв 6 мин и обнаруживать acetanilide пик на длине волны 200 Нм.
      7. Повторите шаги 4.2.1.1. -4.2.1.6. с помощью белка образца вместо решения acetanilide и обнаружить все вершины белка.
    2. Подготовьте метод для измерения с лигандами.
      1. Промойте капиллярные за 1 мин на 2,5 бар с 0,1 М раствором ЭДТА.
      2. Промойте капиллярные за 1 мин на 2,5 бар деионизированной водой.
      3. Промойте капилляра для 1,5 мин на 2,5 бар с решением лигандом для уравновешивания.
      4. Внедрять решение acetanilide для 6 s на 0,05 бар и изменением входе и выходе флаконы для флаконов лиганд содержащие буфер.
      5. Применить 0,05 бар 2.4 s нажать acetanilide решение от кончика капиллярной еще внутри.
      6. Применить 10,0 кв 6 мин и обнаруживать acetanilide пик на длине волны 200 Нм.
      7. Повторите шаги 4.2.2.1 - 4.2.2.6, используя образец протеина вместо решения acetanilide и обнаружить все вершины белка.
    3. Попеременно повторите шаги 4.2.1 и 4.2.2 для того чтобы рассчитать изменения в заряд размер коэффициентов для различных белков металл Ион взаимодействий (описано в разделе Представитель результаты).
      1. Измените решение белка после каждые 60 h на свежие.
        Примечание: на данный момент, этот эксперимент может быть приостановлена. Эта процедура является по крайней мере неоднократные 10 x для каждого концентрации лигандов, поскольку пик шаблон изменяется незначительно от запуска к запуску. Если решение используется более чем 60 h, вариации становится слишком большим.
    4. Запустить методы
      1. Запустите метод, описанный в разделе Шаг 4.2.2, используя Щёлочноземельные лигандом решения (CaCl2, MgCl2, BaCl2и SrCl2 решения).
      2. Далее, с помощью метода, описанного в разделе Шаг 4.2.2, вместо решения лигандом Щёлочноземельные НКД2, SeCl4, CoCl2, CuCl2, ZnCl2и NiCl2 решения.
        Примечание: Хлориды последний переходных металлов показали более взаимодействия с капиллярной и не могут быть полностью удалены. Эти взаимодействия результат в сдвиги в миграции время от запуска к запуску. Следовательно они были расследованы после других ионов металлов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Рисунок 1 показывает electropherogram для AtHIRD11 образца, полученные в ходе экспериментов КГЭ. Пептид размер увеличивается слева направо. Максимальное число 4 имеет большой массы и указывает интактных белков. Меньшие вершины 2 и 3 представляют собой меньше примесей (например, продуктов разложения). Первый пик и непоследовательность базовой линии до также могут быть воспроизведены без образец протеина. Таким образом, это связано с ПБ гель себе и не ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Для всех CE экспериментов подготовка капилляра является важным шагом. Поскольку это стеклянную трубку с малого диаметра, он может легко сломать в местах, где покрытие удаляется, когда он обрабатывается. Установка капилляра, в инструмент следует делать очень осторожно.

Важнейшие шаги, связанные в основном с помощью метода ACE относятся к экспериментальной установки. Другим важным шагом является нахождение правый образец параметров впрыска. Вводится количество образца должно быть достаточно для ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Мы признательны поблагодарить Masakuza Хара (исследовательский институт зеленый науки и технологий, Университет Шизуока, Япония) для предоставления образцов белка AtHIRD11.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
AtHIRD11 образецУниверситета Сидзуока (группа проф. М. Хара)-дегидриновый белок из Arabidopsis thaliana экспрессируется в Escherichia coli
Barefused silica capillararyPolymicro Technologies (Phoenix, США)106815-0017TSP050375, 50 μ внутренний диаметр м, 363 мкм; m наружный диаметр, полиимидное покрытие
Agilent 1600AAgilent Technologies (Вальдбронн, Германия)в связи с чем уже не доступенинструмент для капиллярного электрофореза; Agilent 7100 CE может быть использован вместо
Agilent 7100 CEAgilent Technologies (Вальдбронн, Германия)G7100AИнструмент для капиллярного электрофореза
Injekt 2 mLB. Braun (Мельзунген, Германия)4606051VШприц для фильтрации
Ротилабо-шприцевые фильтрыCarl Roth GmbH + Co. KG (Карлсруэ, Германия)KY62.1Мембранный фильтр PVDF для фильтрации раствора
Eppendorf Research plus 10 μ LEppendorf (Wesseling-Berzdorf, Германия)3121 000.023Микродозатор для работы с пробами
Eppendorf Research plus 10 μ LEppendorf (Wesseling-Berzdorf, Германия)3121 000.120Микропипетка для работы с лигандными растворами
Bulb pipette 10 mLDuran Group GmbH(Майнц, Германия)24 338 08Приготовление раствора NaOH
Bulb pipette 25 млDuran Group GmbH(Майнц, Германия)24 338 14Приготовление раствора лиганда
Duran glas объемная колба 25 млDuran Group GmbH (Майнц, Германия)24 671 1457Приготовление стокового раствора лиганда
Duran glas объемная колба 10 млDuran Group GmbH (Майнц, Германия)24 671 1054Приготовление стокового раствора лиганда
Proteome Lab SDS MW Gel BufferBeckman Coulter (Brea, США)комерциально больше не доступноРазделение во время электрофореза капиллярного геля / Альтернативный буфер SDS: прогонный буфер CE-SDS от Bio-Rad Laboratories (Mü nchen, Германия) Каталожный номер: 1485032 
АцетанилидSigma-Aldrich (Steinheim, Германия)397229-5GЭлектроосмотический маркер потока
Марганец(II) хлоридSigma-Aldrich (Steinheim, Германия)13217Лиганд
Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА)Sigma-Aldrich (Штайнхайм, Германия)431788-100GПромывочный ингредиент
БарийхлоридSigma-Aldrich (Штайнхайм, Германия)202738-5GЛиганд
Додецилсульфат натрияSigma-Aldrich (Steinheim, Германия)71729-100GРастворяющий белок для электрофореза капиллярного геля
Гексагидрат хлорида никеля(II)Sigma-Aldrich (Steinheim, Германия)654507-5GЛиганд
Селена(IV) хлоридSigma-Aldrich (Steinheim, Германия)323527-10GЛиганд
2- амино-2-гидроксиметилпропан-1,3-диол (Трис)Sigma-Aldrich (Штайнхайм, Германия)252859-100GБуферный ингредиент
Хлорид цинка(II)Merck Millipore (Дармштадт, Германия)1088160250Лиганд
Стронция НитратMerck Millipore (Дармштадт, Германия)1078720250Лиганд
Кальция хлорид дигидрат MerckMillipore (Дармштадт, Германия)1371015000Лиганд
37% соляной кислотыMerck Millipore (Дармштадт, Германия)1003171000Регулятор pH
Дигидрат хлорида меди(II)Riedel-de Haë n (Seelze, Германия)31286Ligand
Sonorex Longlife RK 1028 CH 45LAllpax (Папенбург, Германия)10000084; 0Ультразвуковая ванна
Agilent ChemStation Rev. 8.04.03-SP1Agilent Technologies (Вальдбронн, Германия)G2070-91126Программные пакеты для работы с приборами CE, получения данных и их оценки

Ссылки

  1. Hara, M. The multifunctionality of dehydrins: An overview. Plant Signaling & Behavior. 5 (5), 1-6 (2010).
  2. Uversky, V. N. Dancing protein clouds: the strange biology and chaotic physics of intrinsically disordered proteins. Journal of Biological Chemistry. 291 (13), 6681-6688 (2016).
  3. Hara, M., et al. Biochemical characterization of the Arabidopsis KS-type dehydrin protein, whose gene expression is constitutively abundant rather than stress dependent. Acta Physiologia Plantarum. 33 (6), 2103-2116 (2011).
  4. Nachbar, M., et al. Metal ion - dehydrin interactions investigated by affinity capillary electrophoresis and computer models. Journal of Plant Physiology. 216, 219-228 (2017).
  5. Alhazmi, H. A., et al. A comprehensive platform to investigate protein-metal ion interactions by affinity capillary electrophoresis. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 107, 311-317 (2015).
  6. Redweik, S., Xu, Y., Wätzig, H. Precise, fast, and flexible determination of protein interactions by affinity capillary electrophoresis: Part 1: Performance. ELECTROPHORESIS. 33 (22), 3316-3322 (2012).
  7. Ghosal, S. Electrokinetic flow and dispersion in capillary electrophoresis. Annual Review of Fluid Mechanics. 38 (1), 309-338 (2006).
  8. Xuan, X., Li, D. Analytical study of Joule heating effects on electrokinetic transportation in capillary electrophoresis. Journal of Chromatography A. 1064 (2), 227-237 (2005).
  9. Oledzka, I. Comparative evaluation of tissue protein separations applying one- dimensional gel electrophoresis and capillary gel electrophoresis. The Open Proteomics Journal. 5 (1), 17-21 (2012).
  10. Alhazmi, H. A., et al. Optimization of affinity capillary electrophoresis for routine investigations of protein-metal ion interactions. Journal of Separation Science. 38 (20), 3629-3637 (2015).
  11. Busch, M. H. A., Carels, L. B., Boelens, H. F. M., Kraak, J. C., Poppe, H. Comparison of five methods for the study of drug-protein binding in affinity capillary electrophoresis. Journal of Chromatography A. 777 (2), 311-328 (1997).
  12. Mozafari, M., Balasupramaniam, S., Preu, L., El Deeb, S., Reiter, C. G., Wätzig, H. Using affinity capillary electrophoresis and computational models for binding studies of heparinoids with P-selectin and other proteins. ELECTROPHORESIS. 38 (12), 1560-1571 (2017).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

AtHIRD11

Похожие статьи