Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Устные биопленки на различных материалах для стоматологических имплантатов

11.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/57756

⸱

24 июня 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Dental Materials and Prosthodontics, School of Dentistry of Ribeirão Preto, University of São Paulo, 2Department of Restorative Dentistry, School of Dentistry of Ribeirão Preto, University of São Paulo

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для оценки устного биопленки на титана и циркония материалы для абатментов протезирование, включая анализ жизнеспособности клеток бактерий и морфологические характеристики. Модель на месте , связанная с мощными микроскопии методов используется для анализа устного биопленки.

Аннотация

Зубные имплантаты и их компоненты протеза, склонны к бактериальной колонизации и биопленки. Использование материалов, что обеспечивает низкий адгезию микробов может уменьшить распространенность и прогрессирование заболеваний Пери имплантат. С учетом устных среды сложности и устных биопленки неоднородность, микроскопия, необходимой техники, которая может позволить биопленки анализ поверхностей зубов и стоматологические материалы. Эта статья описывает последовательность протоколов, для сравнения устные биопленки на титана и керамических материалов для опоры протезов, а также методы, участвующих в устной биоплёнки анализы на морфологических и клеточном уровнях. В situ модель для оценки устного биопленки на титана и циркония материалы для протеза опор, как описано в настоящем исследовании обеспечивает удовлетворительный сохранение 48 h биопленки, продемонстрировав тем самым методологических адекватности. Multiphoton микроскопии позволяет анализ зональный представитель биопленки, сформированные на тестовые материалы. Кроме того использование флуорофоров и обработки изображений, с помощью multiphoton микроскопии позволяет анализ бактериальной жизнеспособности в очень гетерогенной популяции микроорганизмов. Подготовка электронной микроскопии биологических образцов способствует структурной сохранению биопленки, изображения с хорошим разрешением и никаких артефактов.

Введение

Бактериальные биопленки являются сложными, функционально и структурно организованы микробных сообществ, характеризуется разнообразием видов микроорганизмов, которые синтезировать внеклеточные, биологически активных полимеров матрица1,2. Бактериальной адгезии биотические или абиотические поверхностей предшествует формирование приобретенных пленкой, главным образом состоящая из слюнных гликопротеинов1,3,4. Слабая физико-химических взаимодействий между микроорганизмы и пленка изначально создаются и следуют сильнее взаимодействий между бактериальной адгезины и рецепторы гликопротеина приобретенных пленки. Микробного разнообразия постепенно увеличивает через coaggregation вторичного колонизаторами на рецепторы уже вложенных бактерий, образуя многовидовыми сообщества1,3,4, 5.

Гомеостаза устные микробиоту и симбиотические отношения с принимающей имеет важное значение в поддержании гигиены полости рта. Дисбактериоз в устной биоплёнки может увеличить риск развития кариеса и заболеваний пародонта2,5. Клинические исследования демонстрируют причинно следственные взаимосвязи между накоплением биопленки на зубы и имплантаты и развитие гингивита или Пери имплантат мукозита6,7. Прогрессирования воспалительного процесса приводит к периимплантита и последующей утрате имплантата8.

Зубные имплантаты и их компоненты протеза, склонны к бактериальной колонизации и биопленки формирования9. Использование материалов с химическим составом и топографии поверхности, что обеспечивает низкий адгезию микробов может уменьшить распространенность и прогрессирования заболевания Пери имплантат9,10. Титан является наиболее распространенным материалом для изготовления протезов абатментов для имплантатов; Однако керамические материалы были недавно введены и набирают популярность как альтернатива титана благодаря их эстетическим свойствам и биосовместимость11,12. Также важно, керамические материалы были связаны с якобы снижение потенциалом присоединиться к микроорганизмам, главным образом благодаря их шероховатости поверхности, смачиваемости и поверхности свободной энергии10,13.

В vitro исследования способствовали значительные успехи в понимании микробной адгезии для протезирования Абатмент поверхности9,14,,1516,17. Однако динамической среды полости рта, характеризуются различной температуры и рН и наличия питательных веществ, а также присутствие сил сдвига, не воспроизводится в пробирке экспериментально протоколы18, 19. Для преодоления этой проблемы, альтернативой является использование в situ моделей биопленки, который выгодно сохраняет свою трехмерную структуру для ex vivo анализа10,20, 21 , 22 , 23 , 24.

Анализ сложной структуры биопленки, сформированные на устные субстратов требует использования методов микроскопии, способного отображать оптически плотного вопрос25. Multiphoton лазерная сканирующая микроскопия является современным вариантом для биопленки структурный анализ26. Он характеризуется использованием нелинейной оптики с источником освещения рядом инфракрасные волны, пульсирующий до фемтосекунд27. Этот метод показан для захвата изображений аутофлюоресценция материалов или материалов, отмечен флуорофоров, помимо изображений, генерируемых нелинейных оптических сигналов, полученных от явления, известного как второе поколение гармонических. Среди преимуществ multiphoton микроскопии является глубина большие изображения, полученные с минимальным клеток, причиненный интенсивность света возбуждения27.

Для анализа жизнеспособности биопленки на абиотические поверхностей multiphoton микроскопии использование флуоресцентных нуклеиновой кислоты красители с различные спектральные характеристики и мощность проникновения в бактериальных клетках требуется28. Флуорофоров SYTO9 (зеленый люминесцентные) и пропидий йодидом (красный люминесцентные) может использоваться для визуального разграничения между живые и Мертвые бактерии28,29,30. Пропидий йодидом проникает только бактерии с поврежденной мембраны, в то время как SYTO9 входит бактериальной клетки с нетронутыми и нарушенной мембраны. Когда оба красители присутствуют внутри клетки, пропидий йодидом имеет большее сродство нуклеиновых кислот и вытесняет SYTO9, пометив его красный28,30.

С учетом устных среды сложности и устных биопленки неоднородность, микроскопия, необходимой техники, которая может позволить биопленки анализ поверхностей зубов и стоматологические материалы. Эта статья описывает последовательность протоколов, для сравнения устные биопленки на титана и керамических материалов для опоры протезов, а также методы, участвующих в устной биоплёнки анализы на морфологических и клеточном уровнях.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Это исследование был одобрен Советом по рассмотрению институциональных Школа стоматологии в Рибейран-Прету, и добровольцев участник подписал письменное согласие (процесс 2011.1.371.583).

1. биопленки в Situ

  1. Отбор участников
    1. Выберите пациентов, основанные на следующих критериях: здоровый человек с полным зубочелюстной системы и никаких клинических признаков заболевания полости рта.
    2. Исключить пациентов, основанные на следующих критериях исключения: беременности, лактации, кариес, заболевания пародонта или лечения антибиотиками в последние 3 месяца, курильщик или любые системные заболевания, которые могут повлиять на состояние пародонта.
  2. Подготовка интраоральные устройства
    1. Запись верхнечелюстной арка посредством альгината впечатление.
    2. Подготовьте тип IV камень, добавив 19 мл воды 100 г каменного порошка. Залейте камень в альгинатные прессформы сделать модель верхнечелюстной арки.
    3. Дизайн и изготовить акриловые интраоральные устройства для поддержки испытательных образцов (титана и керамические диски).
      1. Изготовить цепкой застежки из NiCr проволоки (0.7 мм в диаметре) с помощью ортодонтические плоскогубцы #139 и разместите их на модели. Чтобы разместить зажим между верхних премоляров, согните один конец каждого провода так, что они образуют цикл.
        1. Адаптировать цикла в регионе межзубных сосочков. Вставьте в окклюзии, Нежный кривизны, чтобы не вмешиваться с точки соприкосновения и окклюзии. Сделайте 90° складывать в конце зажим для крепления в акрил.
        2. Чтобы соответствовать зажим в верхней второй моляра, адаптировать кривизны провода в шейки матки третьей (вестибулярные) для контура зуба (дистальной части) и сделать 90° складывать в конце зажим для крепления в акрил.
          Примечание: В целях обеспечения надлежащего удержания/стабильность интраоральные устройство, цепкой застежки были размещены между верхних премоляров и дистальной аспект второй молярной по обе стороны зубной дуги.
      2. Управлять самостоятельно полимеризации акриловой смолы в соответствии с инструкциями производителя и нажмите акриловой смолы между 2 стекла (с 3 мм толщиной spacer вставил) во время этапа пластиковые, чтобы сделать лист толщиной 3 мм.
      3. Заложить акриловый лист на небной региона модели, по словам дизайн устройства и обрезать излишки акриловой смолы с Карвер, до полимеризации.
      4. Изготовить воск дисков с помощью металлической матрицы [10 мм в диаметре, 2 мм в толщину (площадь поверхности 78,5 мм2)], поместив расплавленный воск в матрице и ждет воск затвердеть. Вручную вставьте 4 дисков воск в акриловой смолы, из них 2 между премоляров и другие 2 рядом со вторых моляров.
      5. Пусть акриловой смолы полимеризоваться в горшочке давление сжатого воздуха за 20 мин до 20 psi.
      6. Закончить интраоральные устройства с электрическим стоматологической лаборатории наконечника и резец и отполировать абразивной резиной.
      7. Настройте устройство для надлежащего нужным в рот с использованием оборудования, описанных выше.
  3. Подготовка образцов для титана и циркония
    Примечание: Образцы (n = 14) являются 10 мм в диаметре и 2 мм в толщину и имеют площадь поверхности 78,5 мм2.
    1. Польский поверхности образцов с water-cooled шкурки уменьшения абразивности (600, 1200 и 2000 Грит), примерно 20 мин.
      Примечание: Полировка образцов была проведена стандартизировать шероховатости поверхности на 0,2 мкм.
    2. Очистки и дезинфекции образцов и интраоральные устройства с жидкого моющего средства и воды и затем использовать изопропиловый спирт ультразвуковой ванне для 15 мин высушить с бумажные полотенца.
    3. Исправьте образцы в интраоральные устных устройства с около 0,1 мл нетоксичные горячего расплава клея (рис. 1).
    4. Установка устройства, содержащие образцы в ротовой полости.
      Примечание: Интраоральные устройства, содержащие образцы должны носить в течение 48 часов. Устройство было удалено и хранятся в-фосфатный буфер (PBS) в то время как пациент ел и выполняющих устные очистки.

2. Оценка бактериальной жизнеспособности

Примечание: Размер выборки n = 10.

  1. Приготовляют раствор крашения, добавив 3 мкл SYTO9 (зеленая краска люминесцентные нуклеиновой кислоты) и 3 мкл пропидий йодидом (красный флуоресцентные нуклеиновой кислоты краской) по 1 мл стерильной дистиллированной воды.
    Примечание: Подготовьте решения защищены от света.
  2. Передача образцов к пластине 24-Ну и вымыть их с PBS для удаления любой non сторонник клеток.
  3. Добавьте соответствующий объем (1 мл) раствора Флюоресцентная краска для покрытия биопленки содержащих образца. Добавьте краситель очень осторожно чтобы не дезорганизовать биопленки.
  4. Проинкубируйте образцы для 20-30 минут при комнатной температуре, в защищенном от света.
  5. Осторожно промойте биопленки образца с стерильной дистиллированной водой, чтобы удалить любые излишки красителя.
  6. Поместите образец в блюдо дно стекла и выполнять multiphoton лазерной сканирующей микроскопии для анализа биопленки.
    Примечание: Жизнеспособности клеток бактерий был проведен анализ с использованием системы multiphoton микроскопии. Флуоресценции пропидий йодидом был обнаружен с помощью фильтра с длиной волны возбуждения/выбросов 546/680 нм и 477/600 Нм для SYTO9. Размер изображений, полученных был 5.16188 x 5.16188 мм, что соответствует 26,64 мм2 общей площади каждого образца (78,5 мм2) или 33.94% от общей площади. Изображения были сделаны из центральной части образца, с разрешением 1024 x 1024 пикселей. Красный канал и зеленый канал изображения были проанализированы отдельно с помощью программного обеспечения Фиджи31. Каждая ячейка был выбран с помощью инструмента выделения и интенсивность флуоресценции была измерена путем комплексного плотность пикселей, вычитание фона изображения.

3. анализ химического состава образцов по энергии дисперсионных спектроскопии (ЭЦП)

Примечание: Размер выборки n = 3.

  1. Выберите 3 образцов каждого материала биопленки бесплатный тест и оценить химический состав в 2 разных районах каждого образца с помощью сканирующего электронного микроскопа, в сочетании с дисперсионные энергии спектрометр с электронно пучка напряжением 10 кв32.

4. морфологический анализ бактериальные биопленки, сканирующая электронная микроскопия

Примечание: Размер выборки n = 1.

  1. Исправьте биопленки, погружая образцы в низкотемпературном растворе глютаральдегида 2,5%, разбавленных в 0,1 М натрия cacodylate буфера, рН 7,0-7.3, за 24 часа.
  2. Мыть образца в PBS буфере (рН = 7.6).
  3. Постфиксная биопленки с 1% осмия тетраоксид за 1 час.
  4. Мыть образца в PBS буфере (рН = 7.6).
  5. Обезвоживает биопленки образцы тщательно, сохраняя их погружен в повышении концентрации растворов этанола (50%, 70%, 90%, 95% и 100%).
    Примечание: Выполните 3 обмены этанола в концентрации 100%. Общее обезвоживание шаг занимает около 2 часов.
  6. Передача образцов сушилка критической точки и сделать несколько замен с углекислым газом (CO2) до тех пор, пока образцы являются сухими.
  7. Удаление сухих образцов из аппарата и смонтировать их на Держатели сканирующий электронный микроскоп.
  8. Распыления пальто 20 Нм слой золота на поверхности образца для 120 s.
  9. Вставляйте диски с покрытием золотом в зале сканирующий электронный микроскоп. Получение изображений из 5 различных областей каждого образца, в 20-30 кв под переменным давлением и увеличение 650 X12.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В этом исследовании колонизации плотность биопленки после 48 ч в situ роста была представлена доля области колонизированным на дисках титана и циркония по отношению к отсканированные площадь образца с помощью multiphoton микроскопии ( 26,64 мм2). Рисунок 2 представляет плотность бактериальной колонизации на поверхности 3 проверенных материалов. Выше плотность биопленки было отмечено на поверхностях актеров и на обработанной титановые диски...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Протокол, описанный в настоящем исследовании была разработана для оценки биопленки на титана и циркония материалы для протезирования опор, включая анализ жизнеспособности бактериальных клеток и морфологические характеристики. Для того, чтобы достичь этого, был разработан в situ модель биопленки, состоящий из интраоральные устройство, способное вместить образцы испытания материалов и держать их воздействию динамической устные среды для 48 ч. Устройство было сочтено удобной и легкой для вставки, удаления и очистки...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Авторы благодарят Хосе Аугусто Maulin микроскопии многопользовательской лаборатории (школа медицины Рибейран-Прету) за его щедрую помощь с ЭЦП и SEM анализов и Hermano Тейшейра Мачадо за его щедрую техническую помощь в издании видео.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Hydrogum 5Zhermack DentalC302070
Durone IVDentsply17130500002
NiCr проволока Morelli55.01.070
JET автополимеризующийся акриловыйClá ssico
Стоматологический воск Clá ssico
Напорный горшок Essencedental
с зернистостью 600NORTONT216
Наждачная бумага с зернистостью 1200 с зернистостьюNORTONT401
Наждачная бумага с зернистостью 2000NORTONT402
Металлообрабатывающая полировальная машинаArotec
Изопропиловый спиртSIGMA-ALDRICHW292907
Клей-расплавTECSILPAH M20017
Filmtracer LIVE/DEAD Набор для обеспечения жизнеспособности биопленкиInvitrogenL10316
наконечники для пипеток, 10 & микро; LKASVIK8-10   
Наконечники для пипеток, 1 000 & микро; LKASVIK8-1000B   
24-луночный планшет KASVIK12-024
Чашка со стеклянным дномThermo Scientific150680
AxioObserver инвертированный микроскоп ZEISS
Chameleon vision ii лазерCoherent
Objective EC Plan-Neofluar 40x/1.30 Oil DICZEISS440452-9903-000
SDD датчики - X-Max 20mm²Oxford Instruments
Глутаральдегидный растворSIGMA-ALDRICHG5882
Буфер какодилата натрия СИГМА-ОЛДРИЧ97068 
Тетраоксид осмияSIGMA-ALDRICH201030
Na2HPO4SIGMA-ALDRICHS9638Используется для получения фосфатного буферного физиологического раствора
KH2PO4SIGMA-ALDRICHP9791 
NaClMERK1.06404
KclSIGMA-ALDRICHP9333 
Абсолютный этанол для анализа EMSUREMERK1.00983
CPD 030 Осушитель критических точекBAL-TEC
JSM-6610 Series Сканирующий электронный микроскопJEOL
SCD 050 Распылитель для нанесения покрытийBAL-TEC
Наждачная бумага

Ссылки

  1. Do, T., Devine, D., Marsh, P. D. Oral biofilms: molecular analysis, challenges, and future prospects in dental diagnostics. Clinical, Cosmetic and Investigational Dentistry. 5, 11-19 (2013).
  2. Samaranayake, L., Matsubara, V. H. Normal Oral Flora and the Oral Ecosystem. Dental Clinics of North America. 61 (2), 199-215 (2017).
  3. Larsen, T., Fiehn, N. E. Dental biofilm infections - an update. Acta Pathologica, Microbiologica, et Immunologica Scandinavica. 125 (4), 376-384 (2017).
  4. Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. Influence of saliva on the oral microbiota. Periodontology 2000. 70 (1), 80-92 (2016).
  5. Marsh, P. D., Zaura, E. Dental biofilm: ecological interactions in health and disease. Journal of Clinical Periodontology. 44 Suppl 18, S12-S22 (2017).
  6. Zitzmann, N. U., Berglundh, T., Marinello, C. P., Lindhe, J. Experimental peri-implant mucositis in man. Journal of Clinical Periodontology. 28 (6), 517-523 (2001).
  7. Meyer, S., et al. Experimental mucositis and experimental gingivitis in persons aged 70 or over. Clinical and biological responses. Clinical Oral Implants Research. 28 (8), 1005-1012 (2017).
  8. Salvi, G. E., Cosgarea, R., Sculean, A. Prevalence and Mechanisms of Peri-implant Diseases. Journal of Dental Research. 96 (1), 31-37 (2017).
  9. Hahnel, S., Wieser, A., Lang, R., Rosentritt, M. Biofilm formation on the surface of modern implant abutment materials. Clinical Oral Implants Research. 26 (11), 1297-1301 (2015).
  10. Nascimento, C., et al. Bacterial adhesion on the titanium and zirconia abutment surfaces. Clinical Oral Implants Research. 25 (3), 337-343 (2014).
  11. Nakamura, K., Kanno, T., Milleding, P., Ortengren, U. Zirconia as a dental implant abutment material: a systematic review. The International Journal of Prosthodontics. 23 (4), 299-309 (2010).
  12. Scarano, A., Piattelli, M., Caputi, S., Favero, G. A., Piattelli, A. Bacterial adhesion on commercially pure titanium and zirconium oxide disks: an in vivo human study. Journal of Periodontology. 75 (2), 292-296 (2004).
  13. Nascimento, C., et al. Microbiome of titanium and zirconia dental implants abutments. Dental Materials. 32 (1), 93-101 (2016).
  14. Rimondini, L., Cerroni, L., Carrassi, A., Torricelli, P. Bacterial colonization of zirconia ceramic surfaces: an in vitro and in vivo study. The International Journal of Oral & Maxillofacial Implants. 17 (6), 793-798 (2002).
  15. de Avila, E. D., Avila-Campos, M. J., Vergani, C. E., Spolidorio, D. M., Mollo Fde, A. Jr Structural and quantitative analysis of a mature anaerobic biofilm on different implant abutment surfaces. Journal of Prosthetic Dentistry. 115 (4), 428-436 (2016).
  16. de Avila, E. D., et al. Impact of Physical Chemical Characteristics of Abutment Implant Surfaces on Bacteria Adhesion. Journal of Oral Implantology. 42 (2), 153-158 (2016).
  17. de Avila, E. D., et al. Effect of titanium and zirconia dental implant abutments on a cultivable polymicrobial saliva community. Journal of Prosthetic Dentistry. 118 (4), 481-487 (2017).
  18. Lin, N. J. Biofilm over teeth and restorations: What do we need to know? Dental Materials. 33 (6), 667-680 (2017).
  19. Prada-Lopez, I., Quintas, V., Tomas, I. The intraoral device of overlaid disk-holding splints as a new in situ oral biofilm model. Journal of Clinical and Experimental Dentistry. 7 (1), e126-e132 (2015).
  20. Prada-Lopez, I., Quintas, V., Vilaboa, C., Suarez-Quintanilla, D., Tomas, I. Devices for in situ Development of Non-disturbed Oral Biofilm. A Systematic Review. Frontiers in Microbiology. 7, 1055(2016).
  21. Burgers, R., et al. In vivo and in vitro biofilm formation on two different titanium implant surfaces. Clinical Oral Implants Research. 21 (2), 156-164 (2010).
  22. do Nascimento, C., et al. Oral biofilm formation on the titanium and zirconia substrates. Microscopy Research and Technique. 76 (2), 126-132 (2013).
  23. Al-Ahmad, A., et al. In vivo study of the initial bacterial adhesion on different implant materials. Archives of Oral Biology. 58 (9), 1139-1147 (2013).
  24. Al-Ahmad, A., et al. Bacterial adhesion and biofilm formation on yttria-stabilized, tetragonal zirconia and titanium oral implant materials with low surface roughness - an in situ study. Journal of Medical Microbiology. 65 (7), 596-604 (2016).
  25. Thomsen, H., et al. Delivery of cyclodextrin polymers to bacterial biofilms - An exploratory study using rhodamine labelled cyclodextrins and multiphoton microscopy. International Journal of Pharmaceutics. 531 (2), 650-657 (2017).
  26. Lakins, M. A., Marrison, J. L., O'Toole, P. J., van der Woude, M. W. Exploiting advances in imaging technology to study biofilms by applying multiphoton laser scanning microscopy as an imaging and manipulation tool. Journal of Microscopy. 235 (2), 128-137 (2009).
  27. Zipfel, W. R., Williams, R. M., Webb, W. W. Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences. Nature Biotechnology. 21 (11), 1369-1377 (2003).
  28. Stocks, S. M. Mechanism and use of the commercially available viability stain, BacLight. Cytometry Part A. 61 (2), 189-195 (2004).
  29. Johnson, M. B., Criss, A. K. Fluorescence microscopy methods for determining the viability of bacteria in association with mammalian cells. Journal of Visualized Experiments. (79), e50729(2013).
  30. Stiefel, P., Schmidt-Emrich, S., Maniura-Weber, K., Ren, Q. Critical aspects of using bacterial cell viability assays with the fluorophores SYTO9 and propidium iodide. BMC Microbiology. 15, 36(2015).
  31. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  32. Placko, H. E., Mishra, S., Weimer, J. J., Lucas, L. C. Surface characterization of titanium-based implant materials. The International Journal of Oral & Maxillofacial Implants. 15 (3), 355-363 (2000).
  33. So, P. T., Dong, C. Y., Masters, B. R., Berland, K. M. Two-photon excitation fluorescence microscopy. Annual Review of Biomedical Engineering. 2, 399-429 (2000).
  34. Benninger, R. K., Piston, D. W. Two-photon excitation microscopy for the study of living cells and tissues. Current Protocols in Cell Biology. , Chapter 4, Unit 4.11 11-24 (2013).
  35. Gardi, J. E., Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. The proportionator: unbiased stereological estimation using biased automatic image analysis and non-uniform probability proportional to size sampling. Computers in Biology and Medicine. 38 (3), 313-328 (2008).
  36. Melvin, N. R., Poda, D., Sutherland, R. J. A simple and efficient alternative to implementing systematic random sampling in stereological designs without a motorized microscope stage. Journal of Microscopy. 228 (Pt 1), 103-106 (2007).
  37. Neu, T. R., Kuhlicke, U., Lawrence, J. R. Assessment of fluorochromes for two-photon laser scanning microscopy of biofilms. Applied and Environmental Microbiology. 68 (2), 901-909 (2002).
  38. Neu, T. R., Woelfl, S., Lawrence, J. R. Three-dimensional differentiation of photo-autotrophic biofilm constituents by multi-channel laser scanning microscopy (single-photon and two-photon excitation). Journal of Microbiological Methods. 56 (2), 161-172 (2004).
  39. Neu, T. R., Lawrence, J. R. Innovative techniques, sensors, and approaches for imaging biofilms at different scales. Trends in Microbiology. 23 (4), 233-242 (2015).
  40. Lacroix-Gueu, P., Briandet, R., Leveque-Fort, S., Bellon-Fontaine, M. N., Fontaine-Aupart, M. P. In situ measurements of viral particles diffusion inside mucoid biofilms. Comptes Rendus Biologies. 328 (12), 1065-1072 (2005).
  41. Briandet, R., et al. Fluorescence correlation spectroscopy to study diffusion and reaction of bacteriophages inside biofilms. Applied and Environmental Microbiology. 74 (7), 2135-2143 (2008).
  42. Berney, M., Hammes, F., Bosshard, F., Weilenmann, H. U., Egli, T. Assessment and interpretation of bacterial viability by using the LIVE/DEAD BacLight Kit in combination with flow cytometry. Applied and Environmental Microbiology. 73 (10), 3283-3290 (2007).
  43. Bergmans, L., Moisiadis, P., Van Meerbeek, B., Quirynen, M., Lambrechts, P. Microscopic observation of bacteria: review highlighting the use of environmental SEM. International Endodontic Journal. 38 (11), 775-788 (2005).
  44. Hannig, C., Follo, M., Hellwig, E., Al-Ahmad, A. Visualization of adherent micro-organisms using different techniques. Journal of Medical Microbiology. 59 (Pt 1), 1-7 (2010).
  45. Knutton, S. Electron microscopical methods in adhesion. Methods in Enzymology. 253, 145-158 (1995).
  46. Fischer, E. R., Hansen, B. T., Nair, V., Hoyt, F. H., Dorward, D. W. Scanning electron microscopy. Current Protocols in Microbiology. , Chapter 2, Unit 2B.2 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Титановые материалыциркониевые материалымногофотонная микроскопиясканирующая электронная микроскопияанализ биопленокжизнеспособность бактерийподготовка образцовмодель in situ
Устные биопленки на различных материалах для стоматологических имплантатов
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.