Методическая статья

Caenorhabditis Сито: Низкотехнологичные инструмент и методологии для сортировки мелких многоклеточных организмов

DOI:

10.3791/58014

⸱

4 июля 2018 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biology and Wildlife, University of Alaska Fairbanks, 2Institute of Arctic Biology, University of Alaska Fairbanks, 3Department of Chemistry and Biochemistry, University of Alaska Fairbanks, 4Departments of Biology and Chemistry, Earlham College, 5Department of Biological Sciences, College of Natural Science and Mathematics, California State University Long Beach

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Текущий протокол включает в себя методологию для сортировки и очистки соответствует возрасту населения Caenorhabditis elegans. Она использует простой, недорогой и эффективный инструмент по индивидуальному заказу для получения большой экспериментальной популяции нематод для научных исследований.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Caenorhabditis elegans (C. elegans) является устоявшейся модельный организм, используется в различных основных и биомедицинских исследований. В пределах нематоды исследовательского сообщества существует необходимость для доступный и эффективный способ поддерживать большие, соответствует возрасту население C. elegans. Здесь мы представляем методологии для механически сортировки и очистки C. elegans. Наша цель-обеспечить экономически, эффективный, быстрый и простой процесс получения животных единообразных размеров и этапов жизни для их использования в экспериментах. Этот инструмент, Caenorhabditis сито, использует систему заказ крышкой, которая нити на общей трубы конической лаборатории и сортирует C. elegans на основе размера тела. Мы также продемонстрировать, что Caenorhabditis сито эффективно передает животных от одной культуры пластины другой позволяет для быстрой сортировки, синхронизация и очистки без влияния на маркеры здравоохранения, включая подвижность и стресс индуцибильный Джин репортеры. Это доступным и новаторский инструмент является быстрый, эффективный и не напряженный вариант для сохранения популяций C. elegans .

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нематоды червей Caenorhabditis elegans, является премьер модельный организм. В дополнение к простой и управляемый характер их выращивания в лаборатории их весь геном последовательности1 и развития судьба каждой ячейки известен2. Благодаря этим свойствам C. elegans является широко используется модель организма для генетических исследований. Однако наряду с этими полезными характеристиками приходят некоторые проблемы для исследователей. Вследствие их быстрого поколения время C. elegans населения можно быстро запустить из пищи и/или стать смешанных популяций с нескольких поколений и этапы развития представит сразу. Таким образом эксперименты, проведенные на твердых нематоды роста СМИ (НГМ) требуют исследователи переехать физически животных свежие пластины до источника бактериального пищи истощает и новые личинки развиваются. Это может быть утомительно, как частые передачи животных требуется для предотвращения экспериментальной популяций от став смешивается с потомства поколений. Тем не менее некоторые эксперименты требуют как большое количество животных и длительное время точек (например, ДНК или РНК добыча в зрелом возрасте). Это усугубляет проблемы точно поддерживать синхронизированные населения и передачи большого количества животных.

Нынешние методы передачи C. elegans культивированный на NGM комплектации или мытья животных от плиты к плита; химически лечения животных (например, с fluorodeoxyuridine ингибитор репликации ДНК или FUDR); или с помощью проточной цитометрии для сортировки животных в нескольких хорошо пластины. Сбор включает в себя использование ручной инструмент, с тонкий провод платины или ресниц, внесенные вручную передачи отдельных или нескольких животных3,4. Этот метод является точной, но требует мастерства и времени и является ограничением для исследований с участием большого количества животных. Сбор мая также быть физически повреждения и напряженным для животных, потенциально подвергая лица неестественным и непоследовательных количество беспорядков и силы. Стиральная включает полоскания культуры блюдо с буферным раствором и передачи решения с животными через стеклянные пипетки Пастера новой культуры пластины. Этот метод является быстрым и эффективным, но не является точной, как несколько поколений и этапы развития животных передаются навалом. Химической обработки, такие как FUDR, может быть распущен в культивирования СМИ для предотвращения производства потомства через блокирование любых репликации ДНК и таким образом, развитие производства и яйцо гамет. В то же время эффективный, этот метод должен быть применен после развития созревания, чтобы не нарушить нормального развития процессов, и это означает, что все еще существует требование для передачи животных до его администрации3. Этот метод также влияет несколько сотовых сигнальные пути, что приводит к заметное воздействие на животных, как они возраста (например, продление срока службы или изменены proteostasis) в зависимости от штамма C. elegans используется5, 6,,78,9,10. Проточная цитометрия методы автоматически сортировать и передать еще11отдельных C. elegans от одной мульти хорошо пластины. Хотя этот метод является весьма эффективной и действенной, поток цитометрии оборудование чрезмерно дорогими и недоступными для многих исследователей. Альтернативой передачи животных является использование мутант моделей, которые температуры чувствительных, например Фер-15 и fem-1, которые становятся стерильные с регулировки температуры12. Хотя с помощью мутанта животных является полезным в некоторых ситуациях, эти конкретные штаммов растут медленнее, чем одичал тип животных, и они полагаются на изменения генома, выступающей в качестве бедных представителей для старения или здоровые черви. Кроме того, зависимость от температуры перехода побудить стерильности приводит также в отсутствие статической окружающей среды, и изменения температуры легко доказано влияние генов выражения13,14, 15. исследовательские группы опубликовали ранее методы, описывающие использование сетки для фильтрации C. elegans , размер16. Однако мы не смогли найти предыдущую работу, тестирование на любые изменения в общих результатов в отношении здоровья, которые могут быть связаны с использованием таких фильтров.

Таким образом, существует необходимость в C. elegans исследовательского сообщества для доступной, эффективного, быстрого и точного метода для передачи большого количества животных между пластинами культуры. Мы разработали улучшения, доступный кусок оборудования (название Caenorhabditis сито) и связанный протокол для его производства и эксплуатации, которая отвечает потребностям C. elegans научно-исследовательского сообщества. Здесь мы разделяем дизайн Caenorhabditis сито и методы для ее использования, и мы демонстрируем, что его использование не влияет на общее здоровье или любой стресс маркеры по сравнению с Стандартный ручной сбор и лечения с наиболее часто используемых ограничение рождаемости химических FUDR.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Caenorhabditis сито строительство и использование

  1. Строительство протокол
    1. Приобрести 2 крышки от 50 мл конические трубы (рис. 1A).
    2. Снимите центральную область внутри внутренней губы крышки (если смотреть снизу, рис. 1B) с помощью горелки Бунзена и горячего металла зонд или паяльник или шагнуло сверла.
      Примечание: Использование тепла сократить пластиковой крышкой предпочтительнее лезвием, потому что есть меньше риск получения травмы.
    3. Чистота и песок срезанных краев и топ поверхности с изогнутой файл или роторные, шлифовальный инструмент (например, Dremel). Смотрите Рисунок 1 c.
    4. Вырежьте круг леска сетки для соответствующего диаметра (рис. 1 d). Для этого проследить крышкой на листе сетка нейлон Мононить и вырезать только внутри нарисованную линию.
    5. Вырежьте канавки/косые черты в верхней поверхности крышки для повышения адгезии двух крышек, когда клей применяется для пластика (Рисунок 1E).
    6. Очистить крышки с этанолом и дайте им высохнуть.
    7. Прикладываете Цианакрилатный клей к верхней поверхности обоих крышками, сохраняя к внешнему краю.
      Примечание: немного клея проходит долгий путь.
    8. Положите леска сетки, согласно таблице 1, на один из клееного крышкой (Рисунок 1F). Поместите крышку второй Перевернутый поверх сетки; Обе крышки должны иметь их вершины вместе. Нажмите твердо вместе (рис. 1 g). Убедитесь, что Сетка натянута.
      Примечание: как меру безопасности, использование пинцета поставить сетки на крышках.
    9. После начального слоя клей высохнет, применять кольцо Цианакрилатный клей вокруг внешней разрыв между крышками. Быть щедрым, поскольку это добавляет целостности и предотвращает любой пилинг врозь или утечки.
    10. Этикетка фильтр с размером пор сетки леска сетки.
      Примечание: Здесь, мы используем два размера поры сетки — 20 мкм и 50 мкм.
  2. Использовать протокол
    1. Предварительно Влажные сито.
      1. Пипетка физиологический раствор, например M9 [5 г NaCl, 6 g Na2HPO4, 3 g KH2PO4, 1 Л сверхчистого H2O и 1 мл MgSO4 (1 М)]17, через центр сита до формы капли , конденсируется и капает от центра дно фильтра (рис. 2A). При необходимости наносить ворса протрите (например, Kimwipe) на дно формы или капельку влаги на сетке.
      2. Поместите сито 50 мл Конические трубки. Этикетке трубки как «Отходы пробки» (рис. 2B).
    2. Вымойте население C. elegans от плиты агара.
      1. Вымойте тарелку с M9 буфера и место червь содержащих среднего на верхней части сетки леска 1 мл одновременно (рис. 2 c). Убедитесь в том работать в центре сетки. Вымойте все черви от пластины.
        Примечание: Как правило, 3 мл M9 60 мм пластины является достаточным.
      2. Чтобы свести к минимуму количество червей, потеряли в закупорить, используйте стеклянные пипетки Пастера для перемещения червей пластине и на центр сетки (повторять при необходимости).
      3. Промойте фильтр с буфером M9 сверху. Опять же убедитесь, что для работы в центре сетки и промойте все черви в этой области. Вымойте, как столько раз, сколько необходимо обеспечить, чтобы все бактерии и мелких червей прошло через сетку.
    3. Урожай размер соответствует животных из сита.
      1. Прикрепите новый 50 мл Конические трубки в верхней части сита, с взрослых червей из шага 1.2.2.3 обращена внутрь новой коллекции трубки (Рисунок 2D).
      2. Удалите первый трубки (отходов трубки) и быстро Переверните сито и новые трубки сохранить дроплет от миграции (Рисунок 2E).
        Примечание: Если стерильность не требуется, используйте ворса протрите (например, Kimwipe) чтобы фитиль жидкости из нижней части сетки до листать.
      3. Промойте сетку с M9 в новый Тюбик 50 мл от новой верхней (Рисунок 2F). Опять же работают в центре сетки и сохранить дроплет на нижней части сетки.
      4. Разрешить червей, чтобы урегулировать или нежно спина их вниз (например, < 16 x g) для примерно 1 мин (рис. 2 g).
      5. Аспирационная буферный раствор из Пелле червей, идеально вниз > 0,5 мл, или удалить как можно больше жидкости как можно не нарушая гранулы.
      6. Пипетка червей с помощью стеклянной пипетки Пастера на пластину НГМ и дайте им высохнуть. Несколько капель места вне на новой пластинкой так они высыхают быстрее (Рисунок 2 H).
    4. Очистите сетчатый фильтр.
      1. Промойте сито этанола и обратного осмоса вода мягко и тщательно. Дайте ему высохнуть.
      2. Храните его в чистый контейнер для неопределенного будущего использования.
      3. Отменить его, когда сетка развивается «sag» внешний вид.

2. Проверка Caenorhabditis сито, метод сортировки

  1. Общее техническое обслуживание
    1. Для всех экспериментов, культура черви на стандартные средства роста нематода17 (1 Л NGM состоит из 2,5 g Пептон, 17 g агар, 3 г NaCl, 975 мл двойной дистиллированной воды, 1 мл холестерин 5 мг/мл, 1 мл 1 М CaCl2 1 мл 1 М MgSO4, 25 мл 1 М KHPO4и 0,5 мл стрептомицина 100 мг/мл) при 25 ° C.
  2. Экспериментальное лечение администрация
    1. Сравните три группы: подбор, fluorodeoxyuridine (FUDR) и Caenorhabditis сито.
      1. Для лечения группы FUDR добавить 100 мг/мл FUDR NGM СМИ до конечной концентрации 100 мкм для предотвращения любого производства потомства и передать свежие NGM пластины избежать истощения Еда черви каждый день.
      2. Для выбора группы выберите и передачи червей, вручную с помощью платины цикла.
      3. Для группы лечения сито Caenorhabditis выполните шаг 1.2 и Пипетка червей на пластину NGM.
  3. Caenorhabditis Сито процентная доходность
    1. Дать количественную оценку, насколько эффективна при сортировке C. elegansсито, растут возраст синхронных N2 животных до 1 день совершеннолетия при 25 ° C (т.е., 48 ч после откладки) и затем передать их, выбирая их на свежий NGM пластины (группировка N = 50 или N = 100 животных на tre atment группы).
    2. После того, как 24 h восстановления, передать новые пластины NGM населения с Caenorhabditis сито после выше протокола (см. шаг 1.2) и подсчитать количество успешно переданных животных.
    3. Вычислить доходность в процентах как отношение числа животных, передаваемых по сравнению с начальный номер в начале передачи, умноженное на 100 (%).
  4. Healthspan анализов
    Примечание: Оценка healthspan параметров класса моторики, глоточные насоса и передней и задней нежное прикосновение ответ на дни, 2, 4, 6 и 8 совершеннолетия для синхронизации возраст N2 животных на уровне 25 ° C.
    1. Подвижность отслеживание
      1. Присвоить оценки подвижности, на основе системы, основанной на классе (классы A, B и C) следующие методы Херндон и др. 18. сравнить эффекты трех экспериментальных групп с использованием порядкового логистической статистики модели в статистический анализ программного обеспечения.
        Примечание: Класс A лиц спонтанно двигаться в нормальной, синусоидальные шаблон. Класс B лица двигаться в заметно несинусоидальных движений и могут потребовать подталкивание для поощрения движения. Класс C лиц переместить их головы или хвоста в ответ на давление, но не в состоянии двигаться через агар.
    2. Глоточные насоса
      1. Граф точильщика движения животного терминала глоточные колбы визуально под стереомикроскопом 600 X окончательное увеличение за 1 мин.
      2. Проводить статистический анализ с односторонний дисперсионный анализ с α = 0,05 и Бонферрони после испытания с α = 0,05.
    3. Ответ ощупь
      1. Запишите ответ нежное прикосновение и сравнения между группами три лечения. Выполнение анализов на основе методов, описанных в Каликсто et al. 19.
      2. Запись передней и задней сенсорных ответ, осторожно поглаживая ресниц забрать перпендикулярно через хвост или головы (5 x, чередуя голова и хвост) животных.
      3. Оценка любое движение в противоположном направлении ход как 1 балл по шкале от 0 до 5, как для передней и задней ответ.
      4. Проводить статистический анализ с односторонний дисперсионный анализ с α = 0,05 и Бонферрони после испытания с α = 0,05.
  5. Плодовитость пробирного
    1. Чтобы определить использование сито Caenorhabditis воздействия на репродуктивную функцию, возраст синхронных N2 животных расти 2 день совершеннолетия при 25 ° C.
    2. 60 h после откладывают яйца, передавать новые NGM пластины с Платиновый кирку или сито Caenorhabditis животных и дать им 4 h для восстановления (сухое, котор фильтруют пластины для 20-30 мин).
    3. После восстановления, индивидуально пластины животных через ресниц выбрать NGM тарелки, дать им 24 h откладывают яйца и удалить животных. Разрешите потомства на каждой табличке развивать при нормальных условиях для другой 24 ч при температуре 25 ° C.
      Примечание: Для ресниц забрать это человека ресницы прикрепленной к концу пипетки Пастера с лаком и стерилизации с этанолом.
    4. Подсчитать количество жизнеспособных людей поколения F1. Выполнять статистический анализ с использованием T-тест с α = 0,05.
      Примечание: Жизнеспособное потомство считаются яйца, которые успешно люк и начать их развитие посредством регулярных циклов личинок.
  6. Флуоресцентный репортер стресс ответ анализов
    1. Выполните три часто используемые флуоресцентные репортер анализов для выявления потенциальных маркеров стресса: DAF-16::GFP транслокации в ядрах клеток в штамм [TJ356-zIs356 (pDAF-16::DAF-16-GFP; rol-6)]20; hsp 16,2 выражение [TJ375-gpIs1 (hsp-16.2p::GFP)]21; и дерново-3 выражение [CF1553-muIs84([pAD76]sod-3p::GFP+rol-6[su1006])]22.
    2. Для калибровочных, культура возраст синхронных животных от групп три лечения при 20 ° C и рассмотреть их на 3 день совершеннолетия: используйте отрицательный контроль (на ежедневной основе, передача группе животных вручную с платиновым забрать), положительный контроль (на ежедневной основе Группа животных вручную с платиновым забрать плюс установленные стрессор передача) и Caenorhabditis сито (пройти животных через сито и дать им возможность восстановить 30 мин на NGM перед изображений).
    3. В assay DAF-16::GFP тепловой шок положительный контроль животных при 37 ° C за 30 мин до20изображений. Для hsp 16,2 assay тепловой шок животных положительный контроль 90 мин, 20 h до21изображений. Для дерново-3 assay лечить животных положительный контроль с параквата 100 мм за 4 ч до визуализации22.
    4. Урожай червей сразу с ресниц забрать и смонтировать их на coverslip с 1 мкл раствора 407 ПАВ Плюроники 36% для иммобилизации червей.
    5. Сэндвич-навесные червей с другой coverslip. Подключите два coverslips для изображения и слайд микроскопии стандартного стекла червей с помощью 8 крат на Перевернутый флуоресцентный микроскоп (для общего увеличения 80 X) и постоянной экспозиции с фильтром FITC.
    6. Чтобы обнаружить любые различия между тремя группами в assay DAF-16::GFP, классифицировать животных на основе расположения (ядерной если репортер перемещен в ядрах, цитозольной если репортер расположен в цитозоле и промежуточных если репортер DAF-16::GFP репортер, расположенный в ядрах и цитозоле).
    7. Сравните результаты, с использованием статистической модели порядковое логистики в статистический анализ программного обеспечения. Hsp 16,2 и дерново-3 выражение анализов, использовать односторонний дисперсионный анализ с α = 0,05 и Тьюки должность Специального тесты с α = 0,05 сравнить общее флуоресценции глава региона.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Caenorhabditis сито состоит из 2 колпачки, обеспечение области ткани нейлоновая сетка леска меньше, чем диаметр тела желаемого развития возраста, используемое для извлечения живой популяции организмов, используя метод простой промывки. Он придает стандартные конические трубы и использует на экране сетки для механически сортировки животных по диаметру тела, оставляя желаемого животных в трубе готова для дальнейшего обслуживания и эксперименты (например, передача или генет...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы ввели дизайн и использования доступных, эффективных Caenorhabditis сито как инструмент для сортировки и поддержание C. elegans. Этот инструмент имеет ряд преимуществ для вручную выбрать отдельных животных, Стиральная населения, химической обработки (например, FUDR) и более дорогостоящие методы разделения животных. Во-первых, Caenorhabditis сито эффективно и быстро (меньше чем 20 мин) сортирует потомков от крупных смешанных популяций животных (Таблица 2). Кроме...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать. Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы хотели бы поблагодарить Хизер Керрей ее первоначальный вклад дизайн исследования и доктор Сваруп Mitra для его критический обзор рукописи. Мы также хотели бы поблагодарить д-р Майкл б. Харрис для комментариев, уточнений и помощь в подготовке демонстрации этой методологии. Штаммы были предоставлены центром генетики Caenorhabditis, который финансируется Управлением NIH инфраструктуры научно-исследовательских программ (P40 OD010440). Исследования в этой публикации было поддержано, национального института Генеральной медицинских наук национальных институтов здоровья под награду номера UL1GM118991, TL4GM118992 или RL5GM118990 и институционального развития Award (IDeA) от Национальный институт Генеральной медицинских наук национальных институтов здравоохранения грант номер 5P20GM103395-15. Содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения национальных институтов здоровья. UA — AA/EO работодателя и учебное заведение и запрещает незаконной дискриминацию в отношении любого лица: www.alaska.edu/titleIXcompliance/nondiscrimination.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Защитные очкиUlineS-21076
Защитная термостойкая перчаткаGraingerАртикул # 3AT17 Mfr. Модель # 3AT17 Страница каталога # 1703
50 мл коническая трубкаFalcon14-432-22
Синтетическая нейлоновая сеткаDynamic
Aqua-Supply Ltd		NTX20 и NTX50
Цианоакрилатный клейScotch Super Glue LiquidSAD114
ПлоскогубцыVampliersVMPVT-001-8
Инструмент Dremmel с циркулярным напильникомLowe'sItem # 525945 Model # 100-LG
FUDRSigmaF0503
M9 химикаты ( NaCl, Na2HPO4, KH2PO4, MgSO4)Сигма S7653, RES20908-A7, 1551139, M7506
NGM пластинчатые химикаты (бактопептон, агар, KH2PO4, K2HPO4, CaCl2, холестерин, стрептомицин)BD Biosciences (бактопептон), Lab express (агар), Sigma (отдых)BD bioscience 211677, Lab Express 1001,  Sigma 1551139, 1551128, C1016, C8667, S6501
Pluronic F-127SigmaP2443
Гидрат дихлорида паракватаSigma36541
Инвертированный флуоресцентный микроскопOlympusFSX100

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. C elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282 (5396), 2012-2018 (1998).
  2. Herman, M. A. Hermaphrodite cell-fate specification. WormBook. , 1-16 (2006).
  3. Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
  4. Chalfie, M., Hart, A. C., Rankin, C. H., Goodman, M. B. Assaying mechanosensation. WormBook. , (2014).
  5. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Deletion of the Mitochondrial Superoxide Dismutase sod-2 Extends Lifespan in Caenorhabditis elegans. PLoS Genetics. 5 (2), e1000361(2009).
  6. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. FUdR causes a twofold increase in the lifespan of the mitochondrial mutant gas-1. Mechanisms of Ageing Development. 132 (10), 519-521 (2011).
  7. Gandhi, S., Santelli, J., Mitchell, D. H., Stiles, J. W., Sanadi, D. R. A simple method for maintaining large, aging populations of Caenorhabditis elegans. Mechanisms of Ageing Development. 12 (2), 137-150 (1980).
  8. Aitlhadj, L., Stürzenbaum, S. R. The use of FUdR can cause prolonged longevity in mutant nematodes. Mechanisms of Ageing and Development. 131 (5), 364-365 (2010).
  9. Davies, S. K., Leroi, A. M., Bundy, J. G. Fluorodeoxyuridine affects the identification of metabolic responses to daf-2 status in Caenorhabditis elegans. Mechanisms of Ageing Development. 133 (1), 46-49 (2012).
  10. Feldman, N., Kosolapov, L., Ben-Zvi, A. Fluorodeoxyuridine improves Caenorhabditis elegans proteostasis independent of reproduction onset. PLoS One. 9 (1), e85964(2014).
  11. Pulak, R. Techniques for analysis, sorting, and dispensing of C. elegans on the COPAS flow-sorting system. Methods Molecular Biology. 351, 275-286 (2006).
  12. Argon, Y., Ward, S. Caenorhabditis elegans fertilization-defective mutants with abnormal sperm. Genetics. 96 (2), 413-433 (1980).
  13. Lee, S. J., Kenyon, C. Regulation of the longevity response to temperature by thermosensory neurons in Caenorhabditis elegans. Current Biology. 19 (9), 715-722 (2009).
  14. Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mechanisms of Ageing Development. 6 (6), 413-429 (1977).
  15. Zhang, B., et al. Environmental Temperature Differentially Modulates C. elegans Longevity through a Thermosensitive TRP Channel. Cell Reports. 11 (9), 1414-1424 (2015).
  16. Michaelson, L. C. C. elegans: A Practical Approach. Ian A. Hope (ed.). Oxford University Press, Oxford. 1999. Pp. 281. ISBN 0 19 963738 5. Heredity. 85 (1), 97-100 (2000).
  17. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).
  18. Herndon, L. A., et al. Stochastic and genetic factors influence tissue-specific decline in ageing C. elegans. Nature. 419 (6909), 808-814 (2002).
  19. Calixto, A., Chelur, D., Topalidou, I., Chen, X., Chalfie, M. Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1. Nature Methods. 7 (7), 554-559 (2010).
  20. Henderson, S. T., Johnson, T. E. daf-16 integrates developmental and environmental inputs to mediate aging in the nematode Caenorhabditis elegans. Current Biology. 11 (24), 1975-1980 (2001).
  21. Rea, S. L., Wu, D., Cypser, J. R., Vaupel, J. W., Johnson, T. E. A stress-sensitive reporter predicts longevity in isogenic populations of Caenorhabditis elegans. Nature Genetics. 37 (8), 894-898 (2005).
  22. Libina, N., Berman, J. R., Kenyon, C. Tissue-specific activities of C. elegans DAF-16 in the regulation of lifespan. Cell. 115 (4), 489-502 (2003).
  23. Keith, S. A., Amrit, F. R., Ratnappan, R., Ghazi, A. The C. elegans healthspan and stress-resistance assay toolkit. Methods. 68 (3), 476-486 (2014).
  24. Scerbak, C., Vayndorf, E. M., Hernandez, A., McGill, C., Taylor, B. E. Mechanosensory neuron aging: Differential trajectories with lifespan-extending alaskan berry and fungal treatments in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Aging Neuroscience. 8, 173(2016).
  25. Vayndorf, E. M., et al. Morphological remodeling of C. elegans neurons during aging is modified by compromised protein homeostasis. npj Aging and Mechanisms of Disease. 2, 16001(2016).
  26. Murakami, S., Johnson, T. E. A genetic pathway conferring life extension and resistance to UV stress in Caenorhabditis elegans. Genetics. 143 (3), 1207-1218 (1996).
  27. Abbas, S., Wink, M. Green Tea Extract Induces the Resistance of Caenorhabditis elegans against Oxidative Stress. Antioxidants (Basel). 3 (1), 129-143 (2014).
  28. Yanase, S., Hartman, P. S., Ito, A., Ishii, N. Oxidative stress pretreatment increases the X-radiation resistance of the nematode Caenorhabditis elegans. Mutation Research. 426 (1), 31-39 (1999).
  29. Chung, K., Crane, M. M., Lu, H. Automated on-chip rapid microscopy, phenotyping and sorting of C. elegans. Nature Methods. 5 (7), 637-643 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

C elegansM9NGM

Похожие статьи