Вспомогательные репродуктивные методы (ARTs) находятся в постоянной оценке для улучшения результатов и снижения связанных с этим рисков. В этой рукописи описывается минимально инвазивная процедура переноса эмбрионов с эффективным криоконсервативным протоколом, который позволяет использовать кроликов в качестве идеальной модели животных для воспроизводства человека.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Малоинвазивный перенос эмбрионов и Витрификация эмбрионов на оптимальном этапе развития эмбриона в кроличьей модели
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Вспомогательные репродуктивные методы (искусство), такие как экстракорпоральное развитие эмбриона или криоконсервация эмбрионов, влияют на естественные модели развития с перинатальными и послеродовых последствиями. Для обеспечения безвредности Арт-приложений необходимы исследования на животных моделях. Кроме того, в качестве последнего шага исследования в области развития эмбриона требуют оценки их способности к развитию здорового потомства на полную перспективу. Здесь, перенос эмбрионов в матку незаменим для выполнения любого эксперимента, связанного с искусством.
Кролик использовался как образцовый организм для изучения воспроизводства млекопитающих на протяжении более века. В дополнение к своей филогенетическое близости к человеческому виду и его небольшого размера и низкой стоимости обслуживания, он имеет важные репродуктивные характеристики, такие как индуцированная овуляция, Хронология раннего эмбрионального развития, похожая на человека, и короткая беременность которые позволяют нам легко изучить последствия применения Арт. Более того, искусство (например, интрациклический впрыск спермы, культура эмбриона или криоконсервация) применяется с подходящей эффективностью для этого вида.
Используя лапароскопическую технику переноса эмбрионов и протокол криоконсервации, представленный в этой статье, мы описываем 1) как перенести эмбрионы через легкую, минимально инвазивную технику и 2) эффективный протокол для долгосрочного хранения кролика эмбрионов, чтобы обеспечить гибкий материально-технический потенциал и возможность транспортировки образца. Результаты, полученные после переноса эмбрионов кролика на различных стадиях развития, указывают на то, что морула является идеальной стадией для восстановления и переноса эмбрионов кролика. Таким образом, требуется перенос эмбриона, оправдывающий хирургическую процедуру. Кроме того, кролик morulae успешно витрифицированных и лапароскопию переданы, доказывая эффективность описанных методов.
Введение
С целью обхода человеческого бесплодия или улучшения распространения скота высокой генетической ценности и сохранения животных генетических ресурсов, набор методов коллективно называют вспомогательных репродуктивных технологий, таких как суперовуляции, в Экстракорпоральное оплодотворение, культура эмбриона или криоконсервация были разработаны1,2. В настоящее время гормональное лечение дается, чтобы стимулировать яичники и производить большое количество антрального яичника фолликулов1. Ооциты, собранные из этих фолликулов, могут созреть, оплодотворены и развиваться в пробирк....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все экспериментальные процедуры, используемые в данном исследовании, были выполнены в соответствии с директиве 2010/63/EU ЕЭК для экспериментов на животных и рассмотрены и утверждены этическим Комитетом по экспериментам с животными в университете Politècnica де València, Испания (исследовательский кодекс: 2015/VSC/горох/00170). XGD, ФМДЖ, ПВХ и ССВ имеют сертификат авторизации, выданный Валенсийским правительственным управлением для экспериментов с животными. XGD уполномочен на месте контролировать благосостояние и заботу о животных во время эксперимента.
1. перенос эмбрионов
- Подготовка реципиентов женского пола ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Минимально инвазивная лапароскопическая передача свежих или витрифицированных эмбрионов помещает кролика в число лучших моделей животных для репродуктивных исследований. Таблица 1 показывает результаты свежего et на различных стадиях развития (рис.4) переданных эмбрионов. Выживаемость при рождении (процент эмбрионов в результате щенка) доказали эффективность лапароскопической техники описаны в этой бумаге. Более высокие значения были достигну.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
С первых документально живых случае рождения из переданных эмбрионов9, этот метод и кроликов видов стали решающими в репродуктивные исследования. Кроме того, исследования эмбриона, включающие манипуляции, производство, криоконсервацию и т.д. , требуют в качестве последнего шага оценки способности эмбриона генерировать здоровое полноценное потомство. Таким образом, метод переноса эмбрионов незаменим13,28. На протяжении многих лет х.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана Министерством экономики и конкурентоспособности Испании (AGL2017-85162-С2-1-R) и обобщением исследовательской программы в Валенсиане (пропрос-2014/036). Английская текстовая версия, пересмотренная службой английского языка N. Macowan
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Бычий сывороточный альбумин (БСА) | VWR | 332 | |
| Бупренорфина гидрохлорид | Alvet Escartí | 626 | По заказу лицензированного ветеринарного врача. |
| Бусерелин ацетат | Sigma Aldrich | B3303 | |
| Клорексидина диглюконат мыло | Alvet Escartí | 0265DCCJ500B | |
| Раствор клорексидина диглюконата | Alvet Escartí | 0265DCCA500B | |
| CO2 | Air Liquide | 99921 | CO2 N48. |
| CO2 инкубатор | Fisher scientific | 15385194 | |
| диметилсульфоксид | Sigma Aldrich | W387509 | |
| Dulbecco' s фосфатно-солевой буфер (DPBS) | Sigma Aldrich | D5773 | Без хлорида кальция. |
| Электробритва | Oster Golden A5 | 078005-140-002 | |
| Эндоскоп камера | Optomic Spain S.A | OP-714 | |
| Эндоскоп троакар с силиконовым клапаном створки | Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A. | 30114GK | Модель легкого троакара. |
| Энрофлоксацин | Алвет Эскарт; | 9993046 | По заказу лицензированного ветеринара. |
| Эпикранальная игла 23G | Alvet Escartí | 514056353 | Также можно использовать иглы меньшего размера. |
| Эпидуральный катетер | Vygon corporate | 187.10 | |
| Эпидуральная игла | Vygon corporate | 187.10 | |
| Этиленгликоль | Sigma Aldrich | 102466-M | |
| Глазная мазь | Alvet Escartí | 5273 | |
| Кетамина гидрохлорид | Алвет Эскарт; | 184 | По заказу лицензированного ветеринарного врача. |
| Лапароскопическое оборудование | Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A. | 26003 А.А. | Хопкинс® Лапароскоп, 0º-мм прямообзорный лапароскоп, длина 30 см, рабочий канал 5 мм. |
| Источник света | Optomic Spain S.A | Fibrolux 250 | |
| Жидкий азот | Air Liquide | P1505XXX | |
| Механический инсуффлятор CO2 | Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A. | Эндофлатор® | |
| Мелоксикам | Алвет Эскарт; | 9993501 | По заказу лицензированного ветеринара. |
| чашки Петри, 35-мм | Sigma Aldrich | CLS430165-500EA | |
| Пластиковая повязка (Nobecutan) | IBOR medica | 7140028 | |
| Пластиковая соломинка 0,25 мл | IMV - технологии | 6431 | |
| Повидон йодид раствор | Alvet Escartí | 02656DPYS500S | |
| Ножницы | ROBOZ | RS-5880 | Любые обычные маленькие прямые ножницы из хирургической стали подойдут. |
| Силиконовая трубка для инсуффлятора | Karl Storz Endoscopia Ibé rica S.A. | ||
| Стереомикроскоп | Leica | MZ16F | Существуют более дешевые варианты, такие как Leica MZ8 или Nikon SMZ-10 или SMZ-2B, и это лишь некоторые из них. |
| Перчатки стерильные | Alvet Escartí | 087GL010075 | |
| Стерильный халат | Alvet Escartí | ||
| Стерильная маска | Alvet Escartí | 058B15924B | |
| Заглушка для соломинки | IMV - технологии | 6431 | |
| Сахароза | Sigma Aldrich | S7903 | |
| Шприц, 1-мл | Fisher научный | 11750425 | |
| Шприц, 5-мл | Fisher научный | 11773313 | |
| Мочевой катетер | IMV - технологии | 17722 | |
| Водяная баня | RAYPA | BAE-4 | |
| Ксилазин | Алвет Эскарт; | 525225 | По заказу лицензированного ветеринара. |
| Rabbits | Universitat Politè cnica de Valè | ncia Line A | Можно использовать другие материнские линии, такие как Line V или Line HP. |
Ссылки
- Chen, M., Heilbronn, L. K. The health outcomes of human offspring conceived by assisted reproductive technologies (ART). Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 8 (4), 388-402 (2017).
- Lavara, R., Baselga, M., Marco-Jiménez, F., Vicente, J. S.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
