Здесь мы представляем протокол к изоляции и охарактеризовать структуру, обонятельные потенции и поведенческие реакции предполагаемого феромонов соединений морской миноги.
Методическая статья
Здесь мы представляем протокол к изоляции и охарактеризовать структуру, обонятельные потенции и поведенческие реакции предполагаемого феромонов соединений морской миноги.
Биопроб руководствуясь Фракционирование это итеративный подход, использующий результаты физиологических и поведенческих bioassays изоляции и выявление активных феромонов соединения. Этот метод привела к успешной характеристика химических сигналов эту функцию как феромоны в широком диапазоне видов животных. Море миноги полагаются на обоняние обнаружить феромоны, которые посредником физиологических или поведенческих реакций. Мы используем эти знания биологии рыб постулировать функций предполагаемым феромоны и направлять изоляции и идентификации компонентов активного феромонов. Хроматография используется для извлечения, сконцентрироваться и отдельных соединений с кондиционерами воды. Электро olfactogram (ЭОГ) записи проводятся для определения, какой фракции вызывают обонятельных ответы. 2 выбор лабиринт поведенческих анализов затем используется для определения если любой из пахучих фракций поведенчески также активны и побудить предпочтение. Спектрометрические и спектроскопические методы предоставляют молекулярный вес и структурной информации для оказания помощи с разяснения структуры. Биологическую чистых соединений подтверждено ЭОГ и поведенческих анализов. Поведенческие реакции, наблюдается в лабиринте в конечном счете должно проверяться в поле параметр для подтверждения их функции в обстановке естественный поток. Эти bioassays играть двойную роль 1) направлять процесс фракционирования и 2) подтвердить и далее определять биологическую изолированных компонентов. Здесь мы приводим представительных результатов идентификации феромонов Морская минога которые иллюстрируют утилита биопроб руководствуясь фракционирование подход. Идентификация Морская минога феромоны особенно важна, потому что модуляции своей коммуникационной системы феромонов среди вариантов считается для контроля инвазивных Морская минога в районе Великих озер в Лаврентийские горы. Этот метод может быть легко адаптирована для характеристики химической связи в широком массиве таксонов и пролить свет на водной основе химической экологии.
Феромоны конкретные химические сигналы, выпущенный лицами, которые помогают им в поиске источников питания, обнаружение хищников и посредничество социальных взаимодействий сородичами1. Связь феромоны насекомых была хорошо изучены2; Однако химической идентификации и биологические функции водных позвоночных феромоны не были изучены как широко. Знания о личности и функции феромоны выпустила может применяться для облегчения восстановления угрожаемых видов3,4 или управления вредителей видов5,6. Применение этих....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитета Мичиганского государственного университета (AUF # 03/14-054-00 и 02/17-031-00).
1. сбор и добыча морской миноги кондиционерами воды
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Диаграмма, резюмируя шаги, описанные в протоколе биопроб руководствуясь Фракционирование это показано на рисунке 1. Протокол включает в себя шаги, чтобы изолировать и охарактеризовать структуру, обонятельные потенции и поведенческой активности 5 предполагаемый Морская минога феромоны (рис. 2). С помощью масс-спектрометрических и данные ЯМР (рис. 3 и рис. 4), были выяснен.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Рыбы живут в химической мире, полном соединений еще должны быть определены. Фракционирование биопроб руководствуясь доказал необходимо определить и охарактеризовать биоактивных молекул, которые посредником многих химических взаимодействий, например теми, которые наблюдались в масу лосося31и32азиатских слонов, морской миноги33, 34,35. Биопроб руководствуясь фракционирование являетс.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Авторы не имеют ничего сообщать.
Мы благодарим США геологического обследования Хаммонд залив биологической станции для использования их научно-исследовательских учреждений и персонала США рыбы и дикой природы и рыболовства и океанов Канады для предоставления морской миноги. Это исследование было поддержано грантов от Комиссии по рыболовству в районе Великих озер Веймин Li и Ke Li.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Стандартные настенные боросиликатные капилляры премиум-класса с филаментом | Warner Instruments | G150F-4 | записывающий электрод и электрод сравнения (наружный диаметр 1,5 мм, внутренний диаметр 0,86 мм) |
| Прибор для вытягивания пипеток | Narishige | PC-10 | тянет электроды для ЭОГ |
| Стеклорез с алмазным наконечником | Универсальный | режущий наконечник электродов для ЭОГ | |
| Капилляры из боросиликатного стекла | World Precision Instruments | 1B150-4 | трубка подачи одоранта для ЭОГ |
| Держатель записывающего электрода серии E прямой с гранулой Ag/AgCl для стекла капилляр OD 1,5 мм | Warner Instruments | ESP-M15N | держатель записывающего |
| электрода серии E с ручкой с... Пеллеты Ag/AgCl для стеклянного капилляра наружным диаметром 1,5 мм | Warner Instruments | E45P-F15NH | держатель электродов сравнения |
| 1 мм штифт | Warner | Instruments WC1-10 | для моста держателей референтных и записывающих электродов |
| 2 мм штифт | Warner Instruments | WC2-5 | для моста держателей эталонных и записывающих электродов |
| Sigma | A1296 | расплавленный агар для заполнения электродов | |
| Хлорид калия (KCl) | Sigma | P9333 | 3M KCl для наполнения электродов и держателей электродов |
| Micropipette microfil | World Precision Instruments | MF28G-5 | для наполнения электродов и держателей электродов |
| L-Arginine | Sigma | A5006 | положительный контроль одоранта для EOG |
| Метанол | Sigma | 34860 | |
| Водяная баня | на заказ | Н/Д | удерживает одоранты для ЭОГ |
| 3-аминобензойная кислота этиловый эфир (MS222) | Syndel США | трикаин1G | EOG анестетик |
| триэтиодид галламина | Sigma | G8134-5G | EOG паралитический |
| 1 мл шприц | BD Biosciences | 301025 | для введения паралитической |
| подкожной иглы 26G 5/8 | BD Biosciences | 305115 | для введения паралитического |
| роликового зажима | World Precision Приборы | 14043-20 | регулируют скорость потока анестетика в рот миноги |
| Хлорид натрия (NaCl) | J.T. Baker | 3624-05 | для приготовления 0,9% физиологического раствора |
| V-образная пластиковая подставка в качестве образца | Изготовленный на заказ | Н/Д | удерживает миногу во время пластикового |
| желоба | Изготовленный на заказ | N/A | удерживает V-образную пластиковую подставку во время лезвий скальпеля EOG |
| - #11 | Fine Science Tools | 10011-00 | для рассечения EOG |
| Ручка скальпеля - #3 | Fine Science Tools | 10003-12 | для EOG dissection |
| Прямые ультратонкие щипцы | Fine Science Tools | 11252-00 | для EOG диссекции, Dumont #5SF щипцы |
| Изогнутые ультратонкие щипцы | Fine Science Tools | 11370-42 | для EOG диссекции, Moria MC40B |
| Прямые ножницы | Fine Science Tools | 15003-08 | для препарирования ЭОГ |
| Стереомикроскоп | Zeiss | Discovery V8 | для препарирования ЭОГ |
| Осветительный прибор | Zeiss | CL 1500 ECO | для препарирования ЭОГ |
| Пластиковая трубка | Дженерик | для подключения рециркуляционной установки ЭОГ и водяной бани | |
| Трубка для подачи одоранта Изготовленный | на заказ | Н/Д | |
| Вход Линейный фильтр и комплект прокладок | Lee | Company TCFA1201035A | |
| Микроманипуляторы | Narishige | MM-3 | для позиционирования электродов и подачи одоранта капиллярная трубка |
| Магнитные удерживающие устройства | Kanetec | MB-K | |
| Драйвер клапана | Arduino | изготовлен на заказ | для управления открытием клапана для стимуляции запаха |
| Электромагнитный клапан | Lee Компания | LFAA1201618H | клапан для стимуляции запаха |
| NeuroLog AC/DC усилитель | Digitimer Ltd. | NL106 | для увеличения амплитуды электромагнитного сигнала |
| предусилитель постоянного тока NeuroLog с головной сценой | Digitimer Ltd. | NL102G | для увеличения амплитуды электромагнитного сигнала |
| Фильтр нижних частот 60 Гц | Digitimer Ltd. | NL125 | |
| Дигитайзер | Molecular Devices LLC | Axon Digidata 1440A | |
| водонепроницаемая морская фанера, покрытая пластиковым вкладышем | |||
| Насос для мусора | Honda | WT30XK4A | заполняет лабиринт водой из близлежащей реки |
| Перистальтический насос с трубкой | Cole Parmer | Masterflex 07557-00 | для администрирования одорантов в лабиринте |
| Инверторный генератор | Honda | EU1000i | питает перстальтический насос |
| Освобождающий каркас | Изготовленный на заказ | Н/Д | используется для акклиматизации миноги в лабиринте |
| Сетка | Дженерик | используется для ограничения размеров лабиринта и минимизации турбулентности воды с помощью сетчатых | |
| роликов Ведра (5 галлонов) | Дженерик | для смешивания одорантов | |
| Расходомер | Marsh-McBirney | Flo-Mate 2000 | для измерения расхода |
| XAD 7 HP смола | Dow химикат | 37380-43-1 | для добычи кондиционированной воды |
| Метанол | Sigma | 34860 | для экстракции кондиционированной воды |
| Водяная баня | Yamato | BM 200 | для экстракции кондиционированной воды |
| Сублимационная сушилка | Labconco | CentriVap Концентратор | для экстракции кондиционированной воды |
| Хлороформ | Sigma | CX1050 | для изоляции фракционных бассейнов |
| Силикагель 70-230 меш | Sigma | 112926-00-8 | для изоляции фракционных бассейнов |
| Силикагель 230-400 меш | Sigma | 112926-00-8 | для изоляции фракционных бассейнов |
| Предварительно покрытый диоксид кремния гелевые пластины ТСХ | Sigma | 99571 | для выделения фракционных бассейнов |
| анизальдегид | Sigma | A88107 | для выделения фракционных бассейнов |
| Sephadex LH-20 | GE Healthcare | 17-0090-01 | для выделения фракционных бассейнов |
| Amberlite XAD 7 HP смола | Sigma | XAD7HP | для экстракции кондиционированной воды |
| 4, стеклянные колонны емкостью 2,5 л | Ace Glass Inc. | 5820 | для извлечения кондиционированной воды |
| Ацетон | Сигма | 650501 | для экстракции кондиционированной воды |
| Масс-спектрометр TQ-S TOF LC (или аналог) | Waters Co. | Н/Д | для прояснения структуры |
| Бинарный насос ВЭЖХ | Waters Co. | 1525 | для выделения пулов/соединений фракций |
| Agilent NMR спектрометр, 900 МГц (или аналог) | Agilent | N/A | для выяснения структуры |
| Rotovap сушильная система | Buchi | RII | для экстракции кондиционированной воды |
| УФ-лампа (254 нм) | Spectronics Co. | ENF-240C | для тонкослойной хроматографии |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение