Синтез и характеристика 1,2-Dithiolane изменение самостоятельной сборки пептиды

Summary

Протокол для синтеза 1,2-dithiolane изменение пептида и характеристика супрамолекулярные структуры пептида в результате самостоятельной сборки.

Abstract

Этот доклад фокусируется на синтез N-конечная 1,2-dithiolane изменение самостоятельной сборки пептида и характеристика в результате самостоятельного собрал супрамолекулярные структуры. Синтетические маршрут использует твердофазный пептидного синтеза с муфтой на смолы dithiolane прекурсоров молекулы, 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) Пропионовая кислота и при содействии микроволновой thioacetate deprotection пептида N-конечная остановка перед окончательной расщепления из смолы приносить 1,2-dithiolane изменение пептид. После очистки высокой производительности жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) 1,2-dithiolane пептид, производные от затравок ядро пептид значения, связанные с болезнью Альцгеймера пептид показано самостоятельно собрать кросс β волокон амилоида. Представлены протоколы характеризовать волокон амилоида Фурье ИК-спектроскопии (FT-IR), циркуляр дихроизма спектроскопии (CD) и просвечивающей электронной микроскопии (ТЕА). Методы изменения N-терминала с 1,2-dithiolane группу хорошо изученных самостоятельной сборки пептиды теперь могут быть изучены как модель системы для разработки стратегий пост Ассамблеи модификации и изучения динамических ковалентных химии на супрамолекулярная пептид нановолокно поверхности.

Introduction

Надежные пептид Бонд, образуя химии участвует в пептидной Твердофазный синтез и способность контролировать длину последовательности и сделать пептидов, которые самостоятельно собрать в супрамолекулярные структуры сильно исследуемой области. Факторы, которые контролируют и стабилизировать пептид собственн-собранные структур, включая боковой цепи их пространственной и электростатических взаимодействий, спекание водородом и гидрофобных эффекты¹, служить набор правил проектирования. Исследования в этих фундаментальных Дизайн правила продолжает прогрессировать, следующий логический шаг в пептидной самостоятельной сборки включает расширение разнообра....

Protocol

1. Синтез и очистки 1,2-Dithiolane изменение пептида

1. Синтез dithiolane прекурсоров, 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) Пропионовая кислота¹⁹.
   1. Добавить 1 g 3-бром - 2-(bromomethyl) пропионовой кислоты (1 экв.) растворяют в минимальное количество 1 M NaOH (примерно 4 мл) до 25 мл круглым дном реакции колбу с перемешиванием на 55 ° C. Уплотнение реакции колбу с перегородками и место в атмосфере азота.
   2. Подготовить раствор, содержащий 1,49 г калия thioacetate (3.2 экв.) в 4 мл деионизированной воды и 3 мл серной кислоты, 2 M (H₂так₄) для создания thioacetic кислоты, в situ

Results

Помимо первоначальные одношаговым синтез dithiolane прекурсоров молекулы остальная часть 1,2-dithiolane изменение пептидного синтеза происходит на твердой поддержки (рис. 1A). Преобразование 3-бром - 2-(bromomethyl) пропионовой кислоты 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) Пропионовая кислота, предшественник dithiolane, подтверждается ¹H и ¹³C ЯМР (рис. 1B и C) перед она совмещена с бесплатно.......

Discussion

Эта статья обсуждает детали как синтеза и очистки 1,2-dithiolane изменение N-терминальный самостоятельной сборки пептида и характеристики полученных супрамолекулярных структур. Синтез пептида 1,2-dithiolane, сообщили здесь имеет преимущества, включая одношаговый синтеза для производства прекурсоров dithiolane, 3-(acetylthio) -2-(acetylthiomethyl) Пропионовая кислота и на смолы СВЧ deprotection реакция предшественник thioacetate защиты группы приносить окисленных 1,2-dithiolane группу, используя Гидроксид аммония, как без.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Каток амид MBHA смола, высокая нагрузка	Gyros Protein Technologies	RAM-5-HL	Избегать попадания на кожу и в глаза; не вдыхать
N,N-диметилформамид	Fisher Scientific	D119-4	Легковоспламеняющаяся жидкость и пар; раздражает глаза и кожу; Использовать средства индивидуальной защиты; держать подальше от открытого огня
Fmoc-L-Val-OH	Gyros Protein Technologies	FLA-25-V	Носить средства индивидуальной защиты; не вдыхать
Fmoc-L-Leu-OH	Gyros Protein Technologies	FLA-25-L	Носить средства индивидуальной защиты; не вдыхать
Fmoc-L-Lys(Boc)-OH	Gyros Protein Technologies	FLA-25-KBC	Носить средства индивидуальной защиты; не вдыхать
Fmoc-L-Phe-OH	Gyros Protein Technologies	FLA-25-F	Носите средства индивидуальной защиты; не вдыхайте
Fmoc-L-Ala-OH	Gyros Protein Technologies	FLA-25-A	Носите средства индивидуальной защиты; не вдыхайте
Fmoc-L-Gln(Trt)-OH	Gyros Protein Technologies	FLA-25-QT	Носите средства индивидуальной защиты; не вдыхайте
N,N,N′,N′-тетраметил-O-(1H-бензотриазол-1-ил)гексафторфосфат урония	Gyros Protein Technologies	26432	Вызывает раздражение кожи, глаз и дыхательных путей; не вдыхать; использовать под капотом или в хорошо проветриваемом помещении
0,4 М N-метилморфолин в DMF	Gyros Protein Technologies	PS3-MM-L	легковоспламеняющиеся; носить средства индивидуальной защиты; хранить вдали от источников тепла и держать емкость плотно закрытой; не вдыхать и не глотать; тщательно промыть кожу после работы с
20% пиперидином в DMF	Gyros Protein Technologies	PS3-PPR-L	Вызывает сильные ожоги глаз и кожи; легковоспламеняющиеся жидкости и пары; Нельзя вдыхать
дихлорметан	Fisher Scientific	D37-4	Может вызвать рак; Не вдыхайте; Носить средства индивидуальной защиты; использовать только под капотом; при контакте поднимитесь с водой не менее чем на 15 минут и обратитесь за медицинской помощью
ацетонитрил	Fisher Scientific	A998-4	Легковоспламеняющийся; раздражающий для глаз; Использовать средства индивидуальной защиты; Использовать только под вытяжным шкафом; хранить вдали от открытого огня или горячей поверхности; при контакте промыть водой в течение не менее 15 минут и получить медицинскую помощь
трифторуксусная кислота	Fisher Scientific	A116-50	Вызывает сильные ожоги; не вдыхать; вредно для водных обитателей; использовать средства индивидуальной защиты; использовать только под вытяжным шкафом; при контакте промыть водой не менее 15 минут и немедленно обратиться за медицинской помощью
4% уранилацетата	Электронная микроскопия	Sciences 22400-4	Не вдыхайте; вреден для водной флоры и фауны
4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфоновая кислота	Acros Organics	AC172571000	Не вдыхать; использовать на открытом воздухе или в хорошо проветриваемом помещении
Газообразный азот	TechAir		Содержание под давлением, может взорваться при нагревании
3-бром-2-(бромметил)пропионовая кислота	Альфа Аэсар	AAA1963014	Не вдыхать; вызывает раздражение кожи и глаз; вызывает коррозию
Гидроксид натрия	Fisher Scientific	S318-100	Использовать средства индивидуальной защиты; использовать только под вытяжным шкафом; при попадании промыть участок не менее 15 минут и получить медицинскую помощь
Тиоацетат калия	Acros Organics	AC221300250	вызывает раздражение кожи и глаз; не вдыхать; использовать средства индивидуальной защиты
серной кислотой	Fisher Scientific	SA213	Вызывает ожоги; держать подальше от воды; хранить вдали от горючих материалов; не вдыхать; использовать средства индивидуальной защиты; при контакте промыть участок не менее 15 минут и получить медицинскую помощь
хлороформ-d	Acros Organics	AC320690075	возможной опасности рака; раздражает кожу и глаза; не вдыхать; Использовать средства индивидуальной защиты; использовать только под вытяжным шкафом; При контакте промыть участок не менее 15 минут и получить медицинскую помощь
хлороформ	Fisher Scientific	C298-4	Возможная опасность рака; раздражает кожу и глаза; не вдыхать; Использовать средства индивидуальной защиты; использовать только под вытяжным шкафом; При контакте промыть участок не менее 15 минут и получить медицинскую помощь
N,N-диизопропилэтиламин	Acros Organics	AC367841000	Легковоспламеняющийся; вредный для водных организмов; носить средства индивидуальной защиты; не глотать
гидроксид аммония	Fisher Scientific	A669S-500	Коррозионный; не вдыхать
метанол	Fisher Scientific	A452-4	Легковоспламеняющиеся жидкости и пары; использовать средства индивидуальной защиты; не вдыхать; При попадании промыть участок не менее чем на 15 минут и получить медицинскую помощь
триизопропилсилан	Сигма Олдрич	233781	легковоспламеняемый; использовать средства индивидуальной протективной безопасности; держать контейнер плотно закрытым
диэтиловым эфиром	Fisher Scientific	E138-1	Чрезвычайно легковоспламеняющимся; Раздражает кожу и глаза; Использовать средства индивидуальной защиты
2,5-дигидроксибензойная кислота	Sigma Aldrich	39319-10x10MG-F	не вдыхать; раздражающая кожу и глаза
альфа-циано-4-гидроксикоричная кислота	Alfa Aesar	AAJ67635EXK
c18 zip-tip	Millipore	ZTC18S096
трис(2-карбоксиэтил) фоспина гидрохлорид	Thermo Scientific	PI20490
силикагель 60 F254 покрытие алюминиевая основа листы TLC	EMD Millipore	1.05549.0001
Тонкостенные прецизионные ЯМР-трубки	Bel-Art	663000585	5мм O.D.
Цельнопластиковые шприцы Norm-Ject	Air Tite	AL10
	BD PrecisionGlide	BD 305185	использованные иглы утилизируются в контейнере для отходов
одноразовый фриттированный шприц	Torviq	SF1000LL	10 мл фриттированные шприцы были использованы в отчете, но при необходимости для более масштабного синтеза доступны шприцы большего размера.
углеродная решетка	Ted Pella, Inc.	CF200-CU	Убедитесь, что образцы подготовлены и окрашивание на стороне углеродной сетки, а не на блестящей медной стороне сетки
самозакрывающийся пинцет	Electron Microscopy Sciences	78318-3X	очень острые наконечники, длина: 120 мм
0,1 мм длина короткого пути ячейки	Starna Cells, Inc.	20/C-Q-0.1	Хрупкие
крышки для сосудов 10 мл	CEM	909210
Сосуды под давлением 10 мл	CEM	908035
Aeris Semi-Prep Колонка для ВЭЖХ	Phenomenex	00F-4632-N0	150 x 10 мм
Держатель элементов	Starna Cells, Inc.	CH-2049	Необходим при использовании ячеек с короткой длиной пути
пептидный синтезатор PS3	Gyros Protein Technologies
DiscoverSP, микроволновый реактор	CEM
	, HERMLE	Z 206 A	используется фиксированный ротор 6x50 мл
ВЭЖХ, УФ-детектор	Shimadzu
ядерный магнитно-резонансный спектрометр	Avance, Bruker
Масс-спектрометр MALDI-TOF	Axima Confidence,
	Millrock Technology	BT85A
Инфракрасный спектрометр с преобразованием Фурье	Alpha Tensor, просвечивающий
	Tecnai Spirit, FEI		Используется с цифровой камерой Gatan Orius Fiberoptic CCD. Доступно в Центре нанотехнологий CSCU
Спектрополяриметр кругового дихроизма	J-810, JASCO		Используется с шестиэлементным регулятором температуры Пельтье. Доступно в Уэслианском университете.