Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Синтез и характеристика плаценты хондроитин сульфат (plCSA) - ориентация липидов - полимер наночастиц

7.8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58209

⸱

18 сентября 2018 г.

 ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 2Guangdong Key Laboratory of Nanomedicine, CAS Key Lab for Health Informatics, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences (CAS), 3Department of Chemistry, Guangdong Medical University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы представляем собой протокол для синтеза плацентарной хондроитин сульфат A привязки пептида (plCSA-BP)-конъюгированных липидов полимер наночастиц через единый этапа sonication и биоконъюгатов методов. Эти частицы являются роман инструмент для доставки целевых терапевтических средств большинство человеческих опухолей и плацентарной трофобласты для лечения рака и плацентарной расстройств.

Аннотация

Лечебный метод эффективного рака уменьшает и устраняет опухоли с минимальными системной токсичности. Активно таргетинга наночастиц предлагают перспективный подход к терапии рака. Глюкозаминогликан плацентарной хондроитин сульфат (plCSA) выражается на широкий спектр раковых клеток и плаценты трофобласты и малярийные белка, который VAR2CSA конкретно можно привязать к plCSA. Также специально сообщил плацентарной хондроитин сульфат A привязки пептида (plCSA-BP), производные от малярии белка VAR2CSA, можно привязать к plCSA на раковые клетки и плацентарной трофобласты. Таким образом plCSA ВР конъюгированных наночастиц могут использоваться как инструмент для доставки целевых наркотиков человека раковые заболевания и плацентарной трофобласты. В этом протоколе мы описываем метод синтеза наночастиц plCSA BP-конъюгированных липидов полимер, загружен с доксорубицином (plCSA-DNPs); Этот метод состоит из одного sonication шаг и биоконъюгатов методов. Кроме того несколько методов для квалификации plCSA-DNPs, включая определение их физико-химических свойств и клеточного поглощения клетками плаценты хориокарцинома (JEG3), описаны.

Введение

Лечебный метод эффективного рака уменьшает и устраняет опухоли с минимальными системной токсичности. Следовательно ориентация избирательного опухоли является ключом к изучению успешных терапевтические методы. Наночастицы предлагает многообещающие возможности для лечения рака, и повысит эффективность препарата и снизить связанные побочные эффекты1,2молекулярной сборки с различными функциональными группами. Кроме того наночастиц системы главным образом используют, пассивной и активной ориентации для достижения цели опухоли3.

Пассивной ориентации эксплуатирует врожденные характеристики наночастиц и повышение проницаемости и удержания (EPR) эффекты для достижения опухолевых клеток. Катионный липосомы успешно использовался для доставки различные противораковые препараты опухоли в клинических приложений4,5,6. Несмотря на потенциал эффективного рака терапевтический эффект концентрация низкая наркотиков в регионе опухоли и неспособность отличить опухолевых клеток от нормальных тканей являются два основных ограничения ориентации пассивного наночастиц7.

Активной ориентации стратегий воспользоваться антиген антитела, лиганд рецептор и другие взаимодействия молекулярного распознавания специально доставить опухоли8препаратов. Глюкозаминогликан плацентарной хондроитин сульфат (plCSA) широко выражается на большинство раковых клеток и плаценты трофобласты. Кроме того малярийные белка VAR2CSA можно конкретно связать plCSA9,10. Таким образом VAR2CSA может быть инструментом для ориентации человеческих раковых клеток. Однако когда VAR2CSA конъюгированных с наночастицами, полнометражные белка может ограничить проникновение наночастиц в опухолевые клетки. Недавно мы обнаружили plCSA пептид привязки (plCSA-BP), производные от малярии белка VAR2CSA. plCSA ВР конъюгированных липидов полимер наночастиц быстро тычковой хориокарцинома клетки и значительно увеличили доксорубицин (DOX) противоопухолевую активность в vivo11; Эти частицы также конкретно связан с плацентарной трофобласты и может служить инструментом для целенаправленной доставки препаратов плаценты12.

Липидов полимер наночастицы состоят из липидной оболочки монослоя и гидрофобных полимерных ядро и представляют новый носитель для доставки лекарств. Эти наночастицы сочетают в себе преимущества липосомы и полимерных nanocarriers, таких как размер управляемой наночастиц, высокой биосовместимостью, устойчивый наркотиков релиз, эффективность загрузки высокий препарата (LE) и отличную стабильность13. В этой работе мы использовали sonication одношаговый метод для синтеза липидов полимер наночастиц. Этот метод быстро, удобно и подходит для масштабирования и широко использовался подготовить липидов полимер наночастиц нашей группы11,14 и другие15,16,17,18 .

1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) Карбодиимиды гидрохлорид (EDC) является популярным Карбодиимиды, используется в качестве агента сшивки для спрягать биомолекул, содержащие амины и карбоксилатов19. В дополнение к EDC N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) является наиболее распространенным спряжение реагента в поверхность и наночастиц спряжение реакции20,21. NHS может уменьшить количество побочных реакций и укреплению стабильности и доходности эфира промежуточные22,23.

Здесь мы описываем протокол для синтеза наночастиц plCSA ориентированные липидов полимер. Во-первых описан пошагово sonication синтеза наночастиц DOX-загружен липидов полимера (DNPs). Затем вводится методом биоконъюгатов EDC/NHS для генерации plCSA BP-конъюгированных липидов полимер наночастиц. Эта техника биоконъюгатов может также использоваться для конъюгата других антител и пептиды наночастиц. Наконец мы описываем физико-химических свойств и в пробирке assay, используемые для характеристики plCSA ориентированные липидов полимер наночастиц. Мы считаем, что эти наночастицы целевых plCSA липидов полимер может стать эффективной системы для целенаправленной доставки лекарств для большинства человеческих раков и целенаправленной доставки полезной нагрузки плаценты для лечения плацентарной расстройств.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. подготовка запасов решений

  1. Подготовьте путем разбавления 4 мл 100 мл ультрачистая вода абсолютного этанола водный раствор 4% этанола. Хранят раствор при 4 ° C.
    Примечание: Ультрачистая вода определяется как вода без загрязнения, такие как бактерии, твердых частиц, ионы или nucleases. Ультрачистая вода была получена из системы очистки воды с целевой сопротивление до 18,2 mΩ·cm, что означает низкий анионные загрязнения.
  2. Подготовьте раствор лецитина сои 1 мг/мл, растворяя 20 мг, лецитина сои в 20 мл водный раствор 4% этанола. Магазине соевого лецитина Стоковый раствор при 4 ° C.
  3. Подготовьте DSPE-ПЭГ (2000)-COOH Стоковый раствор 25 мг/мл, растворяя 100 мг DSPE-PEG-COOH в 4 мл водный раствор 4% этанола. Хранят раствор при температуре-20 ° C.
  4. Подготовка 10 мг/мл DOX Стоковый раствор путем растворения DOX 50 мг в 5 мл ультрачистая вода. Храните DOX Стоковый раствор при температуре 4 ° C в темноте.
  5. Готовить 2 мг/мл PLGA Стоковый раствор путем растворения 20 мг в 10 мл Ацетонитрил PLGA. Магазин PLGA Стоковый раствор при 4 ° C.
    Предупреждение: Ацетонитрил горючих и токсичных. Действовать с осторожностью в вытяжного шкафа и носить соответствующие индивидуальной, например лаборатории пальто, защитные очки и перчатки.
  6. Подготовьте 0,1 М 2-(morpholino) ethanesulfonic кислоты (MES, pH 6.0) раствор, растворяя 2,17 g в 100 мл воды сверхчистого МЧС. Хранят раствор при 4 ° C.

2. синтез DNPs

Примечание: Чтобы избежать DOX фотохимического полураспада, все операции проводились в темноте.
Наночастицы синтезированы sonication сообщалось ранее одношаговый метод11,13,14.

  1. Добавьте 3 мл водного раствора 4% этанола в стерильные 10 мл пластиковых пробирок. Затем добавьте 90 мкг Стоковый раствор лецитина сои, 210 µg DSPE-PEG-COOH Стоковый раствор и 750 мкг DOX Стоковый раствор 3 мл водного раствора 4% этанола.
  2. Место пластиковых пробирок в ванной на льду и поместите ледяной ванне на процессоре ультразвуковой.
  3. С 1 мл шприц Пипетка 2 мг PLGA каплям раствор (1 капля/4-6 s) в пластиковых пробирок. Тем временем sonicate трубки, с использованием ультразвуковой процессор на частоте 20 кГц и амплитуда выходного 30% на 5 мин синтезировать DNPs.
    Примечание: Синтезировать форма частиц с небольшими размерами, скорость, на которой решение PLGA капала в трубку должен быть медленным, и пузырь поколения следует избегать.
  4. Очищать DNPs путем мытья выше решение в 0,1 М MES буфере (рН 6,0) 3 раза с помощью центрифуги фильтра (MWCO, 10 кДа). Центрифуга на 4 ° C и g 1000 × 3 мин каждый раз. Наконец должен оставаться примерно в 1 мл наночастиц MES-решена.
    Примечание: Это приемлемым остановочный пункт в процедуре. Если не используется для конъюгата пептиды, наночастицы могут быть очищены, PBS буфере (рН 7,4) и очищенного DNPs могут храниться при температуре 4° C в темноте.

3. спряжение пептидов DNPs

  1. Эстер активации
    1. Добавить 0,4 мг EDC (конечная концентрация 2 мм) по 1 мл DNPs.
    2. Добавить 0.24 мг ГСЗ в реакции (конечная концентрация 2 мм).
      Примечание: Для легко добавлять необходимое количество EDC и NHS, Стоковый раствор может быть готовы если реагентов растворяются и использованы немедленно.
    3. Хорошо перемешайте компоненты реакции и место реакции на шейкер; разрешить реакции на 30 мин - 1 ч при комнатной температуре в темноте.
  2. Реакция аминов
    1. Увеличение pH буфера до 7,2-7,5 с помощью PBS (20 ×, рН 7,4).
    2. Решение реакции, добавьте 0,5 мг plCSA таргетинг пептида (plCSA-BP, EDVKDINFDTKEKFLAGCLIVSFHEGKC).
      Примечание: Перед добавлением, Растворите пептидов в ацетонитриле 20%. Если не растворимые пептидов, sonication в sonicator ванна может полезно.
    3. Хорошо перемешать раствор, а затем поместить на шейкер; разрешить реакции перейти на 4 ° C на ночь в темноте.
    4. Поместите раствор конъюгата в мешки диализа (MWCO, 3500 да), чтобы dialyze и очистить plCSA-DNPs с использованием буфера PBS (рН 7,4) при комнатной температуре на 24 часа в темноте.
      Примечание: в качестве альтернативы, очистка может быть выполнена как шаг 2.4 для получения plCSA-DNPs.
    5. Для приложений, культуры клеток фильтр восстановленный решение через фильтр 0,22 мкм стерильный шприц для удаления потенциальных осадков.

4. характеристика целевых plCSA липидов-полимер наночастиц

  1. Измерение размера гидродинамических наночастиц с помощью динамического рассеяния света (DLS)
    1. Разбавьте наночастиц с ультрачистая вода (производится разведение). Загрузите 500 мкл пример в кювет согласно инструкциям DLS или Зета потенциального инструмента.
      Примечание: Зета потенциал и DLS кюветы можно различаются в зависимости от спецификации инструмента.
    2. После завершения измерения, записи диаметр частиц, полиизопрена индекс (ДПИ) и Зета потенциал. Средние результаты, полученные от 4 повторил чтений и вычислить стандартное отклонение.
  2. Просвечивающей электронной микроскопии (ТЕА)
    Примечание: Морфология наночастиц наблюдалось ТЕА с методом негативные пятно. 24
    1. Разбавьте наночастиц с ультрачистая вода (400-fold разрежения). 20 мкл пример на сетку ТЕА и позволить сидеть в течение 5 мин.
    2. 100 мкл фосфорвольфрамовой кислоты 2% (w/v) и позволить сидеть в течение 2 мин фитиль от капли.
    3. Сухие сетке ТЕА при комнатной температуре.
    4. Установите напряжение ускорение ТЕА на 80 кв и увеличить изображение до 100 000 × визуализировать наночастиц.
  3. Определение эффективности инкапсуляции (EE) и LE
    1. Поколение калибровочной кривой. Распустить DOX в ультрачистая вода для приготовления растворов DOX пяти различных концентраций: 1 мкг/мл, 5 мкг/мл, 10 мкг/мл, 50 мкг/мл и 100 мкг/мл. Измерение поглощения DOX решений на 480 Нм с UV-VIS спектрометр. Создание стандартной кривой, основанный на концентрации DOX.
    2. Разбавьте 25 мкл наночастиц с 500 мкл ультрачистая вода. Измерение поглощения на 480 Нм с UV-VIS спектрометр. Рассчитайте концентрации наркотиков по калибровочной кривой.
    3. Вычислите LE, используя следующее уравнение:
      LE = ((количество наркотиков в наночастиц) / (общий вес материалов)) × 100%.
    4. Вычислите EE, используя следующее уравнение:
      EE = ((количество наркотиков в наночастиц) / (сумма добавляется наркотиков)) × 100%.
  4. Измерение эффективности спряжение, используя assay кислоты (BCA) bicinchoninic 25 , 26 , 27
    1. Пипетка 25 мкл решения стандартных пептида (Таблица 1) или plCSA-DNPs в Гонав скважины в двух экземплярах. Добавить 200 мкл рабочего реагента для каждой скважины и смешивать пластины на пластину шейкер для 30 s.
    2. Крышка и инкубировать при 37 ° C за 30 мин.
    3. Измерение оптической плотности в 562 Нм на тарелку читателя. Используйте созданный калибровочной кривой для расчета концентрации plCSA plCSA-DNPs.
    4. Расчет эффективности спряжение, используя следующее уравнение:
      Спряжение эффективность = ((количество пептида в наночастиц) / (сумма добавляется пептида)) × 100%.
Во флаконеОбъем разбавителя (мкл)Объем и источник пептида (мкл)Концентрация окончательный пептида (мкг/мл)
A0300 акций1000
B250250 флакон разрежения500
C250250 флакон B разрежения250
D250250 флакон C разбавления125
E300200 из флакона D разбавление50
F250250 флакон E разбавления25
G400100 из флакона F разрежения5
H50000

Таблица 1. Подготовка стандартных пептиды

5. Люминесцентная микроскопия оценки plCSA ориентированных наночастиц поглощения в клетках хориокарцинома (JEG3)

  1. Заполнение ячеек на стерильных пластин 12-ну 1.0 × 104 клетки/колодец с полным DMEM/F12 (cDMEM/F12, содержащей 1% пенициллина/стрептомицина и 10% плода бычьим сывороточным (ФБС)). Позволяют клеткам расти до 60% слияния при 37 ° C и 5% CO2 влажных условиях.
  2. Удалите средства массовой информации и добавить 1 мл холодного свежего СМИ с низким сыворотка содержимое (5% FBS) и DNPs или plCSA-DNPs (5 мкг DOX эквивалента).
  3. Инкубируйте смесь клеток и наночастиц на 4 ° C на 1 час.
  4. После инкубации удалите средства массовой информации и вымыть клетки три раза с PBS. Затем добавьте 1 mL свежих cDMEM/F12 и инкубации клеток при 37 ° C за 30 мин.
  5. Удалите cDMEM/F12 и вымыть клетки три раза с PBS.
  6. Добавить 2 мл холодного параформальдегида 4% (PFA) и инкубации при комнатной температуре 15 мин исправить клетки.
  7. Удаление PFA. Один раз мыть ячейки с 2 мл ФСБ. Добавьте 1 mL PBS, содержащих DAPI (1 мкг/мл) для окрашивания, ядер и инкубации при комнатной температуре в течение 10 мин.
  8. Аспирационная PBS и вымыть клетки три раза с PBS.
  9. Добавление монтажа средних и изображение флуоресценции с флуоресцентной микроскопии, используя зеленого и синего каналов для визуализации DOX и ядер, соответственно.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

В настоящем Протоколе PLGA, DSPE-PEG-СООН и соевого лецитина являются представитель полимер, липидов PEG-COOH конъюгата и липидов, соответственно. Синтез наночастиц plCSA ориентированные липидов полимер через единый этапа sonication метода и EDC/NHS техника иллюстрируется на рисунке 1. Во-первых в условиях sonication, соевый лецитин, PLGA и DSPE-PEG-COOH самостоятельно собрать формы ядро оболочка структурированных DNPs. Ядро состоит из PLGA и инкапсу...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Этот протокол обеспечивает эффективное и воспроизводимый метод синтеза наночастиц plCSA BP-конъюгированных липидов полимер. Метод single-step sonication подготовить липидов полимер наночастиц быстро, воспроизводимые и отличается от типичных nanoprecipitation методов, которые включают Отопление, vortexing или испарения. Следовательно разработанный метод значительно сокращает время синтеза. Кроме того биоконъюгатов EDC/Трансплантология, используемые в настоящем Протоколе — это часто используемые и удобный метод для конъюга...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Изобретателей на патент PCT/CN2017/108646 и 201710906587.6, представленных СИАТ, который охватывает метод синтеза наночастиц, ориентированные на plCSA и приложения являются X.F. и Б.З. Другими авторами были раскрыты не потенциальные конфликты интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана субсидии от национального исследования ключ и Программа развития Китая (2016YFC1000402), Национальный фонд естественных наук (81571445 и 81771617) и Фонд провинции Гуандун естественных наук (2016A030313178) для X.F. и Шэньчжэнь Basic исследовательский фонд (JCYJ20170413165233512) X.F.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пептид plCSAShanghai GL Biochem573518для синтеза пептидов
Абсолют этанолаSinopharm Chemical 10009218для синтеза наночастиц
Соевый лецитинAvanti Polar Lipids441601для синтеза наночастиц
DSPE-PEG-COOHAvanti Polar Lipids880125для синтеза
наночастицДоксорубицинJKКемический113424для синтеза наночастиц
АцетонитрилShanghai Lingfeng1008621для синтеза наночастиц
PLGASigma-Aldrich719897 для синтеза наночастиц
Ультразвуковой процессорSonicsVCX130для синтеза наночастиц
Центрифужный фильтр (MWCO 10 кДа)MilliporeUFC801024для очистки наночастиц
центрифугаSigma3-18KSдля очистки наночастиц
2-[морфолин]этансульфоновая кислота (MES)Sigma-AldrichM3671для конъюгации пептидов
1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимида гидрохлорид (EDC)Sigma-Aldrich3450для конъюгации пептидов
N-гидроксисукцинимид (NHS)Sigma-Aldrich56480для конъюгации пептидов
Диализные мешкиSpectrum132592Tдля очистки наночастиц
PBS HycloneSH30028.01для клеточных культур
центрифужные пробирки 10 мл, полипропиленAladdinS-025для синтеза наночастиц
15 мл центрифужные пробирки, полипропиленCorning430791для различных применений
0,22 μ м стерильный шприц фильтрMilliporeSLGV033RBдля очистки наночастиц
шприц 1 мл, полипропиленBD328421для синтеза наночастиц
Malvern ZetasizerMalvernNano ZSдля анализатора размера частиц
Фосфовольфрамовая кислотадля
ТЭМ сетка ТЭМEMCNBZ10024aдля ТЭМ
УФ-ВИД спектрометрLeageneDZ0035для TEM
Transmission
электронный микроскоп		JEOLJEM-100CXIIдля анализа размера частиц
реактива BCA AThermo Fisher Scientific23228для анализа BCA
реактив BThermo Fisher Scientific23224для анализа BCA
96-луночных планшетовCorning3599для BCA Считыватель пробирных
пластинThermo Fisher ScientificMultiskan™ GOдля анализа BCA
12-луночные планшетыCorning3513для клеточной культуры
JEG3 cellBank of Chinese Academy of SciencesTCHu195Человеческая плацента
DMEM/F12HycloneSH30272,01фенол без красного Фетальная
бычья сыворотка (FBS)GIBCO10100для клеточной культуры
Пенициллин/стрептомицинGIBCO15070063для клеточной культуры
Флуоресцентный микроскопOLYMPUSCKK53для поглощения клетки
ПараформальдегидShanghai Lingfeng1372021для поглощения клетки
DAPISangon BiotechA606584для поглощения клетки
Монтажная средаLifeP36961для поглощения клетки

Ссылки

  1. Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
  2. Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
  3. Jabir, N. R., et al. An overview on the current status of cancer nanomedicines. Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).
  4. Pillai, G. Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development. SOJ Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).
  5. Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future. Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458(2016).
  6. Dasari, S., Tchounwou, P. B. Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action. European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).
  7. Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis. Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).
  8. Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).
  9. Salanti, A., et al. Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein. Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).
  10. Seiler, R., et al. An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer. European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).
  11. Zhang, B., et al. Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment. Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).
  12. Zhang, B., et al. Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice. Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).
  13. Zhang, L., et al. Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform. ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).
  14. Zheng, M., et al. Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy. ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).
  15. Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -M. J., Zhang, L. Quick synthesis of lipid− polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method. Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).
  16. Gu, L., et al. Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin. Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).
  17. Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).
  18. Shi, T., et al. Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma. European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).
  19. Grabarek, Z., Gergely, J. Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters. Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).
  20. Hadjipanayis, C. G., et al. EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma. Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).
  21. Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy. Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).
  22. Jennings, M., Nicknish, J. Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein. Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).
  23. Staros, J. V. N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers. Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).
  24. Valencia, P. M., et al. Single-step assembly of homogenous lipid− polymeric and lipid− quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing. ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).
  25. Altintas, I., et al. Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells. Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).
  26. Maya, S., et al. Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells. Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).
  27. Deepagan, V. G., et al. In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles. Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).
  28. Totaro, K. A., et al. Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates. Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).
  29. Sinz, A. Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions. Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).
  30. Zhang, B., et al. LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma. Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).
  31. Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements. Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).
  32. Chu, Y., et al. Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

PLGA
Синтез и характеристика плаценты хондроитин сульфат (plCSA) - ориентация липидов - полимер наночастиц
Свяжитесь с нами
Рекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

Авторские права © 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.