Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Hyperandrogenic мыши модель для изучения синдром поликистозных яичников

11.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58379

⸱

2 октября 2018 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  , 

В этой статье

Краткое содержание

Мы описываем разработке худой модели мыши СПКЯ как с дигидротестостерон гранулы для изучения патофизиологии СПКЯ и потомство от этих плотин СПКЯ как.

Аннотация

Hyperandrogenemia играет решающую роль в репродуктивной и метаболические функции женщин и является отличительной чертой polycystic синдром завязи. Разработка худой СПКЯ как мыши модели, которая имитирует женщин с СПКЯ клинически значимым. В этом протоколе мы описываем такой модели. Вставив длиной 4 мм гранулы порошка DHT (дигидротестостерон) кристалл (Общая длина гранул составляет 8 мм), и заменив его ежемесячно, мы в состоянии производить СПКЯ как модель мыши с сыворотка DHT уровней 2 раза выше, чем мышей, не имплантируются с DHT (без Дигидротестостерон). Мы наблюдали репродуктивного и метаболической дисфункцией без изменения веса тела и состава тела. В то время как выставке высокую степень бесплодия, небольшое подмножество этих самок мышей СПКЯ как можно получить супоросыми и их потомство Показать задержка полового созревания и увеличение тестостерона как взрослые. Эта модель СПКЯ как худой мыши является полезным инструментом для изучения патофизиологии СПКЯ и потомство от этих плотин СПКЯ как.

Введение

Гиперандрогении является отличительной чертой синдром поликистозных яичников (СПКЯ) критериев NIH и избыток андрогенов и СПКЯ (AE-СПКЯ) общества. Женщин с СПКЯ иметь затруднение получить супоросы и имеют повышенный риск осложнений беременности1. Даже если они забеременеть, потомства женщины имеют неблагоприятные последствия для здоровья по результатам2,3. Животные модели были разработаны с использованием различных стратегий4,5,6,,7....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Здесь мы представляем подробные протоколы для подготовки Пелле DHT и вставки и репродуктивного и метаболических тестирования. Мышей, используемые в данном исследовании были смешанного происхождения (C57/B6, CD1, 129Sv) и поддерживались с пищей и водой ad libitum в цикле свет/темно 14/10 h при 24 ° C в объекте животных Broadway здание исследований в школе университета Джонса Хопкинса Медицины. Все процедуры были утверждены Комитетом использование и уход животных университета Джонса Хопкинса.

1. Создайте модель СПКЯ как мыши

  1. DHT Пелле подготовка
    1. Трубы силастиковых автоклав для стерилизации. Вырез....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Сывороточные уровни DHT и тест на переносимость глюкозы

Уровни DHT были измерены от собранных сыворотки обоих ELISA и LC-MS согласно протоколу 1,24 – 1,25 и 2,9, 3.0. DHT абсолютные значения отличаются между масс-спектрометрии и ELISA, однако относительная лоно (около 2 раза) vs DHT без Дигидротестостерон вставки схож с обеих анализов и через эксперименты15,23,

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Гиперандрогении является ключевой особенностью СПКЯ. Уровни DHT сыворотки (два раза выше в DHT мышей чем без Дигидротестостерон мышей), используемые в настоящем Протоколе ниже, чем те, которые сообщили другие следователи в предыдущих исследованиях и калибруются пропорционально имитировать женщин с СПКЯ5,19, 20,21. В отличие от других моделей эта модель 2 раза DHT не изменяет вес тела и тело со.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Ничего не разглашать.

Благодарности

Эта работа была поддержана национальных институтов здравоохранения (гранты R00-HD068130 по с.в.) и исследовательский центр в Балтимор диабет: пилотов и осуществимость Грант (чтобы с.в.).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Кристаллический порошок 5α-DHTSigma-AldrichA8380-1G
Dow Corning Силастическая трубкаFisherScientific 11-189-15D0,04 дюйма/1 мм внутренний диаметр x0,085 дюйма / 2,15 мм внешний диаметр
медицинский клей силиконовыйфактор II, InC.А-100
Очки, лабораторные халаты, перчатки и маски.
10 & микро; L наконечники для пипеток без фильтраСША Scientific11113700
Предметное стекло для микроскопаFisher Scientific12-550-003
Diff Quik для окрашивания клетокFisher ScientificNC9979740
LancetFisher ScientificNC9416572
3 мл ШприцBecton, Dickinson and Company (BD),30985
прилагаемая игла: 20 GBD305176
Линейка: любая длина более 10 см с миллиметровой шкалой.
XylazineVet one AnnSeA LA, MWI, BoiseNDC13985-704-10100 мг/мл
Кетамина гидрохлоридHospira, IncNDC 0409-2051-05100 мг/мл
Хирургическая скобаAutoClip® Система, Fine Science Tool12020-00
Инсулиновый шприцBD3294611/2 CC, низкая доза U-100 инсулиновый шприц
TrocarInnovative Research of AmericaMP-182
МикроскопCarl Zeiss Primo Star415500-0010-001
Германия УхопробFisher Scientific13-812-201
Тестостерон крыса/мыши ИФА наборIBLB79174
DHT ELISA kit AlphaDiagnostic International1940
Ультраглюкометр в одно касание LifeScan, Inc.
Тест-полоски One touch ultra LifeScan, Inc.
Eppendorf tubeFisher Scientific05-402-18
Лезвие бритвыFisher Scientific12-640
ClidoxFisher ScientificNC0089321
хирургическая пеленкаFisher Scientific50587953Производитель: Andwin Scientific 56616018
Бетадиновый антисептический растворWalgreens
3М Ветбонд (н-бутилцианоакрилат)3М Наука. Применение в жизни

Ссылки

  1. Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
  2. Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Приготовление пеллетов ДГТмодель синдрома поликистозных яичниковуровни ДГТ в сыворотке кровианализ цикличности эструсатест на толерантность к глюкозезабор крови из поднижнечелюстной веныоценка открытия влагалищаизмерение аногенитального расстоянияоценка полового созревания потомства