Роман в Vitro модель взрыва черепно-мозговой травмы

Доменная черепно-мозговой травмы (ЧМТ) представляет сложный тип, черепно-мозговой травмы в результате взрыва взрывного устройства^1,2. Доменная TBI стала основной проблемой здравоохранения за последние 15 лет с недавних военных конфликтов в Ираке и Афганистане^2,3. В целом предполагается, что между 4,4% и 22,8% солдат, возвращающихся из Ирака и Афганистана страдают мягкой TBI, большая часть которых, связанные с взрыва, с более высокой ставкой сообщил взрыва TBI в силах США, по сравнению с силами Великобритании^{4 ,5}.

Использование самодельных взрывных устройств был ответственны за большую часть взрыва связанные травмы, включая взрыв TBI, переживаемые военнослужащими⁶. Детонация взрывного заряда приводит к очень быстрому — но переходных — увеличение давления, происходящих в миллисекундах. Результате избыточного давления волны от реальной жизни свободного поля взрыва моделируется функцией Фридлендер, с подъем на пик избыточное следуют экспоненциального распада^7,8. Спектр экстремальных сил и их быстрое время курс, видели в случае взрыва обычно не испытывали в не Доменная травм^1,9. Избыточное давление пик, который является максимальное давление волны и продолжительность положительная волна считаются важными факторами, способствующими взрыв мозга травмы и они зависят от взрывной заряд и расстояние от детонации^{10, 11}.

Травма, что результаты от энергетический взрыв классифицируется как четыре дискретных компонентов, отнесенных к первичной, вторичной, третичной и четвертичной взрыва травмы^10,12,,1314. Каждый из этих компонентов связан с конкретными механизмами получения травмы. Первичного взрыва ущерб является результатом прямого действия волны избыточного давления на органы и ткани^2,13. Результаты вторичного взрыва травмы от воздействия снаряда фрагментов, вызывая проникновения и непроникающего раны^2,15. Третичный взрыва травмы возникает, когда тело жертвы смещается от земли или окружающих предметов и связан с ускорение/замедление силы^1,10,13. Четвертичные взрыва травмы описывает группу гетерогенных травм, непосредственно связанных с взрыва, не охватываемых первых трех травмы механизмы описанных^12,13. Это включает в себя (но не ограничивается) термической травмы, вдыхания дыма, радиации, электромагнитных волн и негативные психологические последствия^13,15. Большинство TBI взрыв связанные результаты непосредственно из первых трех механизмов травмы, в то время как четвертичные механизмы взрыва травмы обычно связаны с системными травмы¹³. Эффекты ускорения/замедления сил (например, шейного отдела позвоночника), тупые и проникающего черепно-мозговой травмы широко изучены связи с другими видами TBI (например, дорожно-транспортных происшествий, водопад, Баллистический травмы). Однако основной ударной волны избыточного давления является уникальным для взрыва травмы, и его влияние на ткани головного мозга являются гораздо менее хорошо понимали¹⁶. Первичного взрыва травмы механизмы, связанные с избыточным давлением волны, являются первыми механических сил взаимодействовать с мозгом.

Многочисленных доклинических TBI модели были разработаны в течение последних десятилетий, которые неоценимое значение для понимания механизмов TBI взрыва травмы и патофизиологии и исследовать потенциал новых методов лечения, которые в противном случае было бы невозможно сделать исключительно в клинической установка^17,18,19. Хотя ни одна доклинических модель можно воспроизвести сложности клинической взрыв мозга травмы, обычно различных доклинических моделей TBI реплицировать различные аспекты человеческого TBI. Повреждающего действия сил, связанных с взрывом взрыва могут изучаться изолированно или в сочетании в моделях TBI взрыв как in vitro и in vivo . В vitro модели имеют преимущество, позволяя жесткий контроль над экспериментальной среды (физиологические условия ткани и биомеханики травмы), который уменьшает биологической вариативности и улучшает воспроизводимости, позволяя изучение конкретные молекулярные каскады без усложняющих в животных моделей²⁰. Нашей целью было разработать модель в пробирке , чтобы исследовать эффекты первичного взрыва на ткани головного мозга. Мы стремились разработать модель с сверхзвуковой ударной волны с представителем Фридлендер сигнала взрыва свободном поле, например, производимый самодельного взрывного устройства (СВУ).

Эксперименты, описанные в этой рукописи были сделаны в соответствии с Законом Соединенного Королевства животных (научные процедуры) 1986 года и были одобрены животных и этические обзор тело из Имперского колледжа Лондона. Уход за животными был нормам институциональная Имперского колледжа Лондона.

1. гиппокампа срез Organotypic подготовка и культура

Примечание: Этот протокол позволяет производство organotypic гиппокампа кусочки согласно метода интерфейса описан Stoppini и коллеги с незначительными изменениями^21,22,23. В идеале не более трех животных следует умерщвлены и расчлененный в одной сессии, чтобы убедиться, что каждый шаг делается быстро и во избежание ущерба для качества ломтики. Используйте асептические технику во всем.

1. Убедитесь, что следующие шаги перед началом протокол вскрытия.
   1. Подготовить и фильтрации стерилизации всех решений, заранее с помощью 0,22 мкм фильтром.
   2. Держите решения на 4 ° C во время хранения и во всем мозг вскрытие и подготовка гиппокампа срез, сохраняя контейнеры для хранения и Петри на металл радиатора, сидя на мокрый лед во все времена.
   3. Автоклав все металлические инструменты, кольца и салфеток.
   4. Обеспечение всех документов и материалов, используемых для каждого шага протокола готовы к использованию, изложены заранее и распыляется с 70% этиловом спирте. Убедитесь, что они разрешены охладить вниз и высушить.
2. Усыпить 5 – 7 день-старый C57BL/6Н мыши щенка от шейки матки вывихов и кратко протрите поверхность всей кожи стерильной салфеткой, пропитанной 70% этиловом спирте. Погладить кожу сухой и обезглавить щенка, ножницами Mayo.
3. Вырезать кожи головы с диафрагмой ножницы вдоль средней линии головы начиная в затылочной области и заканчивается возле морду и отозвать его сбоку.
4. Вставить кончик беззаботными ножницы в затылочного и сделать два небольших боковых порезов на кости вдоль поперечной придаточных пазух носа, а затем вырезать череп вдоль средней линии до обонятельные луковицы и делают два небольших разреза перпендикулярно к срединной линии в этом регионе.
5. С помощью тонкой точки Изогнутый пинцет убрать закрылки кости сбоку от средней линии, тщательно удалить мозга с небольшой лопаткой и перенести его на 90 мм силиконовые эластомера покрытием Петри блюдо «рассечение среда».
   Примечание: Рассечение среднего-гей сбалансированного солевого раствора (5 мг/мл D-глюкоза, 1% раствор антибиотика противогрибковое, с 10000 единиц/мл пенициллин, стрептомицин 10 мг/мл и 25 мкг/мл амфотерицин B).
6. Удалять мозжечок и отдельных полушарий вдоль средней линии, с помощью лезвия бритвы. Лопаточкой передать новой 90 мм силиконового эластомера покрытием Петри наполнен свежими ледяной рассечение среднего полушарий. Если более чем одно животное будет использоваться в одной сессии, повторите шаги 1.2-1.6.
7. Под стереомикроскопом вырезать обонятельные луковицы и кончик лобной коры с лезвием бритвы и отдельные коры головного мозга от остальной части мозговой ткани, используя пинцет штрафа отзыв. Этот шаг оставляет гиппокампа, выставленные на медиальной поверхности кортикального слоя ткани. От этого шага используйте Ламинарный шкаф культуры тканей (ультрафиолетовой стерилизации и очищены раствором на 70% спирте).
8. Применить ледяной рассечение среднего в квартиру пластиковые разделочные диск и с помощью шпателя, позиция ткани мозга на диске, что медиальной поверхности коры вверх и оси гиппокампа перпендикулярно оси нож.
9. Удалите как можно больше рассечение среды от измельчения диска с помощью тонкой кончика пипетки Пастера.
10. Вырезать мозг ломтиками 400 мкм с помощью измельчителя ткани со скоростью 50% разделочные и силу.
    Примечание: Это очень важно, что этот шаг сделан как можно скорее как ткани мозга не погружен в среде рассечение.
11. Замените рассечение среднего в силиконовые эластомера покрытием Петри свежие ледяной среде.
12. После завершения измельчитель ткани, тщательно погружать ткани мозга в среде свежие рассечение и передавать 90 мм силиконовые эластомера покрытием Петри блюдо с помощью скальпеля прямым лезвием резки ткани.
13. Под стереомикроскопом тщательно отдельных корковых ломтиками, используя пинцет штрафа отзыв. Для каждого фрагмента осмотрите гиппокампа для морфологии и потенциал повреждения тканей результате рассечения или нарезки.
14. Отдельные гиппокампах из коры entorhinal и бахромок, используя пинцет штрафа отзыв и маленькие ножницы беззаботными. Как правило около 6 до 8 гиппокампа фрагменты создаются за полушарие.
15. Передача до 6 гиппокампа фрагменты культуры ткани вставить, вырезать с помощью пипетки Пастера и место внутри 35 мм Петри блюдо. Убедитесь, что фрагменты распределены на несколько миллиметров врозь (это будет гарантировать, что каждый фрагмент может быть imaged индивидуально).
16. Сразу же добавить ледяной «средство роста» в нижней части каждой чашке Петри, под культуры ткани вставки, чуть ниже верхней части культуры ткани вставить ОПРАВЫ.
    Примечание: Рост среднего содержит 50% минимум основных средних орла, 25% Hanks сбалансированный раствор соли, 25% сыворотки крови лошади, 5 мг/мл D-глюкоза, 2 ммоль/Л L-глютамина, 1% раствор антибиотика противогрибковое и 10 ммоль/Л HEPES, титруемая для рН 7,2 с гидроксидом натрия.
17. Изменение среднего роста на следующий день после рассечения и затем каждые 2-3 дней после этого (средний рост использования при 37 ° C). Убедитесь, что рост среднего добавлен в достаточном количестве, но не так много что он вызывает переполнение над мембраной Вставка культуры ткани, которая может поставить под угрозу жизнеспособность тканей срезы.
18. Держите фрагменты тканей в увлажненные инкубатора при 37 ° C с 5% двуокиси углерода в воздухе 12 до 14 дней до, используемых в экспериментах.

2. Подготовка гиппокампа Organotypic ломтики для протокола TBI экспериментальный взрыв

Примечание: Все шаги в этом разделе, за исключением изображений, занять место в Ламинарный шкаф культуры ткани.

1. Вставьте на заказ из нержавеющей стали кольца в 6 хорошо пластина, (по одному на хорошо).
   Примечания: Кольца имеют обода с насечкой (который должен находиться в положении 12 часов) и посадки плотно внутри скважины, в то время как культура ткани вставляет вписываются в эту ОПРАВОЙ. Убедитесь, что кольца промывают бактерицидный дезинфектант, тщательно ополоснуть очищенной воды, газобетона и позволил охладить заранее.
2. Заполните также 6-ну пластины с подогретым (37 ° C) сыворотки бесплатно «экспериментальный Медиум» с пропидий йодидом.
   Примечание: Это экспериментальная среда с пропидий йодидом: 75% минимум основных средних орла, 25% Hanks сбалансированный раствор соли, 5 мг/мл D-глюкоза, 2 ммоль/Л L-глютамином, 1% раствор антибиотика противогрибковое, 10 ммоль/Л HEPES и 4,5 мкмоль/Л пропидий йодидом, титруемая рН до 7.2 с гидроксида натрия.
3. Убедитесь, что уровень среды не достичь выше вырезка кольцо. Передачи 6-ну пластины с кольцами инкубатора для 1 h, что обеспечивает средство при 37 ° C непосредственно перед культуры ткани вставки передаются.
4. Передача культуры ткани вставок с ломтиками organotypic от 35 мм Петри в пластину 6-колодец с кольцами и экспериментальной среды с щипцами.
5. Сделайте точки на ободе Вставка в позиции 3 часа с постоянным маркером.
   Примечание: Вставки собирается вынуть пластину 6-Ну во время эксперимента и этот шаг облегчает возвращение Вставка в свое первоначальное положение после воздействия ударной волны и чтобы легко отслеживать каждый ломтик во всем протокол.
6. Пометьте каждый 6-ну пластины с уникальное имя и Дата и сделать карту скважин каждой пластинке, назвав каждой скважины (например.,, B, C, и т.д.) и каждый ломтик в каждой скважине (например., 1, 2, 3, и т.д.), так что каждый фрагмент имеет уникальный идентификатор ( например., А1, А2, А3 и т.д.).
7. Передать пластину 6-ну инкубатора для 1 h, чтобы убедиться, что срезы при 37 ° C непосредственно перед изображений.
   Примечание: Во избежание переполнения среднего или любые пузыри воздуха под культуры ткани вставки мембраны, которая может поставить под угрозу жизнеспособность ломтики.
8. 1 ч после передачи в экспериментальной среде, изображение каждый ломтик индивидуально под микроскопом флуоресцирования (2 X цель, NA 0,06) оснащены соответствующей возбуждения (BP 535/50 Нм) и фильтра выбросов (LP 610 Нм) для оценки здоровья среза до травмы протокол осуществляется.
   Примечания: Фрагменты, которые демонстрируют районы плотной красного окрашивания на данном этапе следует представить угрозу жизнеспособности и должны быть исключены из дальнейшего анализа (они обычно представляют собой менее 10% от общего числа фрагментов генерируется). Убедитесь, что визуализация выполняется в последовательном порядке и так же быстро, как можно свести к минимуму время, ломтики находятся за пределами инкубатора (обычно 6 скважин должно занять чуть менее 30 минут изображение).
9. Держите крышку плита 6-Ну на все время. Некоторые конденсации может накапливаться на внутренней стороне крышки. Если это произойдет, кратко используйте фен на низких настройках.
10. Убедитесь, что все изображения условия являются идентичными, в разные дни и между экспериментов.
    Примечание: Цель изображений для количественного определения флуоресценции ткани, поэтому этот шаг имеет важное значение для обеспечения воспроизводимости результатов и сравнения полученных данных.

3. погружение и транспорта культуры ткани пластины с ломтиками гиппокампа Organotypic

1. Сразу же после съемки, в Ламинарный шкаф, принять один культуры ткани вставка из 6-ну пластину, используя пинцет.
2. Тщательно передачи, вставка в стерильной полиэтиленовой мешок (3 "x 5") предварительно заполнены с 20 мл теплой (37 ° C) экспериментальной среды свежезаваренным кипела с 95% кислорода и 5% углекислого газа.
   Примечание: Убедитесь, что кислорода и углекислого газа обогащенного экспериментальной среды кипела по крайней мере 40 мин с 95% кислорода и 5% двуокиси углерода с использованием барботер scintered стекло внутри бутылки Dreschel и переведены в стерильных полиэтиленовые мешки внутри Ламинарный шкаф культуры ткани с помощью 20 мл шприц с бактериальный фильтр и стерильные наполняющей трубки (127 мм) прилагается. Печать мешки немедленно и их передачу инкубатора 37 ° C для по крайней мере 1 час перед культуры ткани вставить передачи.
3. Убедитесь, что каждый мешок стерильный правильно помечены (с плиты и хорошо идентификации). Повторите этот шаг для каждой культуры ткани вставки. Исключите пузырьки воздуха тщательно После запечатывания стерильных мешки (сделано безопасно путем скручивания в верхней части сумки и применения пластиковый зажим).
4. Возвращение стерильные пакеты с культуры ткани вставками и 6-ну пластины с экспериментальной среды в инкубаторе 37 ° C.
5. После 1 h тщательно упакуйте стерильные пакеты с вставками культуры ткани в пластиковых ящиках внутри термо регулируемые коробки заполнены деионизированной водой при 37 ° C для того чтобы держать organotypic ломтики на физиологическое температуру на протяжении всего воздействие ударной волны Протокол.

4. Подготовка шок трубки и гиппокампа Organotypic срез воздействие ударной волны

1. Носите защитные сапоги стали мыс, лабораторный халат и перчатки во время подготовки шок трубки и воздействие ударной волны.
2. Болт стерильных мешок держатель рамы шок трубки дистальной фланец, обеспечивая соответствие центральное отверстие ударной трубки розетки (с помощью гашения стержня).
3. Смонтировать два преобразователи давления радиально: датчик 1, в средней части управляемые секции и датчик 2 в дистальной фланец шок трубки (рис. 1A). Преобразователи давления соединиться осциллографа через текущий блок источника питания.
4. Убедитесь, что закрыты все ударной трубы выпускные клапаны и потока управления.
5. Открытие линии внешней сжатого воздуха и заряд электромагнитный клапан 2,5 бар.
6. Откройте предохранительный клапан баллона сжатым воздухом и медленно открыть регулятор давления для повышения давления до примерно 5 бар.
   Примечание: Для этого регулятора давления должна быть немного выше высокий диафрагма, давление разрыва.
7. Подготовьте мембраны резки 23 мкм толстая полиэфирная листов на квадраты² 10 x 10 см. Подготовьте ручки с помощью автоклава ленты и вставлять их в верхней и нижней части каждой диафрагмы.
8. Позиция одной диафрагмы (один слот двойной затвор - конфигурация одной диафрагмы) или две диафрагмы (оба разъема двойной затвор - двойной мембраной конфигурации) в затвор (рис. 1B).
9. Центр диафрагмы и закрепите их с помощью четырех M24 болтов и гаек, крепление их последовательно по диагонали симметричным образом и обеспечение диафрагмы являются морщин.
10. Зажим каждый мешок стерильный индивидуально в вертикальном положении на держатель рамы, обеспечение того, что на поверхности ткани культуры вставляет гиппокампа кусочками organotypic переживает шок трубки розетки и вставка культуры ткани центрируется внутри стерильной мешок (рис. 1 c). Убедитесь, что мешок стерильный надежно зажата все вокруг для обеспечения прочного и даже иммобилизации.
11. Носите слуха и безопасности очки, когда давление на шок трубки. Переключитесь на текущий источник энергоблока и осциллограф для приобретения данных ударной волны (приобретение скорость 50 мега образцы/сек, запись длиной 20 мс, 1 миллиона точек) и закрыть клапан.
12. С помощью регулятора потока на панели управления трубка шок, медленно давление водителя объем шок трубки для конфигурации одного Диафрагма или как раздел тома драйвер и двойной затвор секции трубки шок для двойной мембраной конфигурации.
    Примечание: Для конфигурации единого диафрагмы, давление будет зависеть только от мембранный материал и толщина и диафрагмы будет разрыв спонтанно по достижении материал, давление разрыва. Для конфигурации двойной мембраной разрывной давление будет зависеть также от давления газа, дифференциальной как водителя, так и двойной затвор камеры и, для диафрагм лопнуть в контролируемым образом, двойной затвор предохранительный клапан открыт один раз вручную достиг целевого давления.
13. Как только диафрагмы разрывов (производство громкий шум), быстро закрыть поток сжатого воздуха с помощью регулятора потока и откройте клапан.
    Примечание: Общий объем секции водитель может быть изменен путем вставки гашения сегментов, позволяя более широкий спектр пик избыточного давления ударной волны и длительности, которые могут быть получены. Идеальное сочетание ударной волны параметров должно быть достаточно, чтобы вызвать повреждение тканей, но не настолько высоко что он вызывает insert культуры ткани или стерильной мешок искажения или разрыв.
14. Подвергать каждого стерильные мешок с тканевой культуры вставкой для одной ударной волны трубки и вернуть его сразу поле термо регулируется до новых стерильных сумка из коробки и крепится на раму держателя. Убедитесь, что шаги 4.10-4.14 выполняются как плавно и как можно быстрее (в течение нескольких минут) для предотвращения экспериментальной средних охлаждения вниз, как температура ниже 37 ° C может помешать развитию травмы.
15. После того, как все вставки тканевой культуры подверглись воздействию ударной волны (или фиктивный протокол), возвращение культуры ткани вставок оригинальной пластины 6-Ну и их соответствующих хорошо (внутри Ламинарный шкаф культуры тканей) и вернуться в инкубатор.
16. Держите пластину 6-Ну в инкубаторе с 5% двуокиси углерода в воздухе при 37 ° C до дальнейшей обработки изображений.
17. Включать Шам элементы управления для каждого эксперимента, вместе с ломтик воздействие ударной волны.
    Примечание: Sham фрагменты обрабатываются одинаково ломтиками, воздействию ударной волны (в стерильные пакеты с экспериментальной среды герметичный, доставляют в лабораторию трубки шок в том же окне, термо регулируется и приостановлено на металлической раме на эквивалентный период время), но шок трубка не срабатывает.

5. гиппокампа Organotypic срез травмы количественная оценка

1. На 24 ч, 48 h и 72 ч изображение срезы, как описано в шагах 2.8 и 2.9.
2. После съемки на 72 h пост ударной волны облучения, отбросить ткани следующие местные биологические отходы протоколы и лечить и автоклав металл кольца.

Трубка шок, используемые в этом методе позволяет поколение избыточного давления переходных процессов, которые имитируют реальные открытое поле взрывы моделируется Фридлендер функция7,8. Сверхзвуковой ударной волны со скоростью 440 м/с (Mach 1.3) были получены (рис. 2A). Осциллограммы сообщили данные от датчика 2, радиально расположены в конце раздела ведомый шок трубки.

Используя протокол, описанных выше, organotypic культур гиппокампа фрагмент подвергается одной ударной волны (рисунок 2A) развивать значительные травмы, количественно с помощью пропидий йодидом, весьма полярные Люминесцентную краску, что только проникает клетки с под угрозой клеточных мембран24,25 (Рисунок 2Б, C).

Даже при оптимальных условиях и согласуется с другими страховой опубликованные модели21,22, существует низкий уровень фона пропидий йодидом флуоресценции, частично, обусловлено незначительный ущерб, вытекающие из присущего тканей манипуляции ( Например, средства массовой информации изменения за период культуры или удаления из инкубатора для изображений). Этот взрыв TBI протокол предполагает существенные манипуляции, которая включает погружения ломтики в среде внутри стерильные пакеты и значительная степень обработки во время протокол воздействия ударной волны (например., зажимные стерильные пакеты для держатель рамы). Однако, если тщательно выполняются все шаги, это дополнительные манипуляции не имеют влияние на основные здоровье страховой как были замечены никаких существенных различий между контрольной группе ломтиками, хранится в 6-ну плит во все времена (т.е., вставки не были погружены или обработанное) и Шам группа, которая включала фрагменты, которые были погружены внутри стерильные пакеты зажат в шок трубки (рис. 2B).

Два ударных волн, выбрали, на 50 кПа и 55 кПа пик избыточное давление, производятся значительные (p < 0,05 и p < 0,0001, соответственно) и воспроизводимые травмы, когда по сравнению с ранен Шам ломтики на все моменты времени после воздействия взрыва Протокол (рис. 2B), не причинив повреждения культуры ткани вставок или стерильные пакеты. Чтобы определить чувствительность модели к небольшие различия в пик-избыточное давление, мы решили выбрать значения, которые были разные ~ 10%. Эти результаты также показывают, что, как ожидается, травмы в результате 55 кПа выше, чем после ударной волны 50 кПа.

Данные выражаются как среднее ± Среднеквадратичная ошибка среднего значения. Значимость была оценена с помощью 2-полосная неоднократные меры дисперсионный анализ с помощью Holm-Sidak пост Специального теста. Фактор 1 была группа (элемент управления, Шам, взрыв) и фактор 2 было время после травмы (h-1, 24 h, 48 h и 72 ч), где фактор 1 неоднократные фактором. Корректировка стоимости p для нескольких сравнений было использовано. P значения менее чем 0,05 были доставлены в указывают на значительные различия между группами. Статистические тесты были выполнены с использованием графиков и статистики программного пакета.

Рисунок 1: схема шок трубки устройства с стерильных мешок держатель рамы. (A). шок трубка трубка длиной нержавеющей стали 3,8 м, из трех секций 1,22 м длиной, соединены прокладки и фланцы, с внутренним диаметром 59 мм. врезные (B) показывает двойной затвор Ассамблеи. Одна или две майларовые диафрагмы может быть зажат в Ассамблее с печатью, предоставляемый резиновые уплотнительные кольца. (C) стерильные мешок держатель рамы. Тело кадра состоит из двух металлических пластин с центру круглое отверстие (59 мм диаметром), который выравнивает с шок трубки розетки. Две тонкие (4 мм) листы силиконового эластомера установлены между двумя металлическими пластинами. Эти листы призвана обеспечить даже и не скользкая поверхность для зажима стерильные пакеты. Расстояние между мешок и выходе шок трубки составляет 7 cm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 2: типичный shockwave и результате травмы в organotypic гиппокампа ломтик культур. (A) представитель пример ударной волны, полученные с помощью 23 мкм толстая полиэфирная пленка, 2.16 бар давление разрыва 55 кПа пик избыточного давления, 0,4 мс положительная волна, продолжительность импульса 10.1 kPa·ms. Осциллограмм были получены от датчика 2 радиально монтируется на дистальном фланец трубки шок инициативе секции. Ударной волны скорость составила 440 м/с (Mach 1.3). (B) развитие травмы пропорциональна интенсивности ударной волны. 50 кПа и 55 кПа пик избыточного давления ударной волны вызвало значительные травмы, которые разработаны на протяжении 72 ч протокол по сравнению с группой Шам. Травмы в результате воздействия волны избыточное давление 55 кПа пик был значительно выше, чем после 50 кПа 48 ч и 72 ч. Шам ломтики одинаково относились к Доменная ломтиками, но шок трубки не был уволен. Управления ломтики были сохранены в 6 хорошо пластины в инкубаторе без каких-либо манипуляций. Бары представляют собой средние значения и погрешностей стандартные ошибки (n = 7, контроль; n = 48, Шам; n = 30, взрыв 50 кПа; n = 51, взрыв 55 кПа; n = количество фрагментов, из 6 отдельных экспериментов). * p <p 0,05, *< 0,0001 по сравнению с обманом. # p < 0,05, #p < 0,01 по сравнению с Доменная 55 кПа. (C) представитель пропидий йодида флуоресценции образы organotypic фрагменты из Шам (я), (ii) взрыв 50 кПа и (iii) взрыва 55 кПа групп на 72 ч после травмы. Шам фрагмент показывает низкий уровень флюоресценции, т.е., травмы и взрыв, подвергаются фрагменты показывают высокие уровни диффузных повреждений, более выраженный характер на дольке воздействию избыточного давления пик 55 кПа (шкала бар = 500 мкм). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Авторы имеют без финансовых интересов.