Здесь мы описываем 3 взрослых рыбок данио травмы модели и их совместное использование с лечение иммуносупрессивным препаратом. Мы предоставляем руководство по визуализации регенерации тканей и на нем обнаружения минерализации костей.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Взрослый данио рерио травмы модели для изучения последствий преднизолона в регенерации костной ткани
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Данио рерио способны регенерировать различных органов, включая придатков (плавники) после ампутации. Это включает в себя регенерации кости, которая отрастает в течение примерно двух недель после травмы. Кроме того возможность исцелить костей быстро после трепанации черепа и ремонта трещин, которые могут быть легко введены в костлявые плавник лучи данио рерио данио рерио. Эти анализы травмы представляют собой возможные экспериментальные парадигмы для проверки влияния управляемых наркотиков на быстро формирования кости. Здесь мы описываем, использование этих моделей 3 травмы и их совместное использование с лечения системных глюкокортикоидов, который оказывает тормозящее и иммуносупрессивные эффекты кости. Мы предоставляем рабочего процесса о том, как подготовиться к иммуносупрессивным лечения взрослых рыбок данио, показывают, как выполнять плавник ампутации, трепанация черепа костей и переломы плавник и описывают, как применение глюкокортикоидов влияет на обе кости формирования остеобласты и клетки линии моноцитов/макрофагов частью врожденного иммунитета в костной ткани.
Введение
Данио рерио представляют собой мощный животных модель для изучения развития позвоночных и болезни. Это связано с тем, что они являются мелких животных, которые размножаются очень хорошо и что их геном полностью виртуализированного и поддаются манипуляции1. Другие преимущества включают возможность выполнения продолжение живых изображений на разных этапах, в том числе в vivo изображений взрослых рыбок данио2, и способности выполнять высокую пропускную способность препарата экраны в zebrafish личинки3. Кроме того данио рерио обладают высокой регенеративной способностью в различных органах и ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все методы, описанные здесь были утверждены Landesdirektion Дрезден (разрешить чисел: AZ 24D-9168.11-1/2008-1, AZ 24-9168.11-1/2011-52, AZ 24-9168.11-1/2013-5, AZ 24-9168.11-1/2013-14, AZ DD24.1-5131/354/87).
1. Подготовка материалов и решений
Примечание: Преднизолон, как другие глюкокортикоидов, приводит к иммуносупрессии. Таким образом необходимо принимать меры предосторожности для предотвращения инфекции у животных, обработанных в ходе эксперимента. Этот конец, автоклав стеклянные изделия и «рыбные воды» (т.е., вода, которая используется для заднего взрослых данио рерио) перед началом эксперимента.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Протокол, представленные здесь неоднократно использовались для формирования быстрого костей в ходе регенерации данио рерио ребра и череп10,11,16. В сочетании с представленным методом преднизолона администрации может осуществляться исследования влияния преднизолона в ходе костной регенерации. Например можно выполнить исследования формирования костей и минерализации в регенерации. Преднизолон, как .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Данио рерио оказались полезными в скелетных исследований во многих отношениях. Выбранный мутантов имитировать аспекты заболеваний человека, таких как несовершенный Остеогенез или остеоартрита23,24,25,26,27, и личинки, а также весы используются для идентифицировать анаболические соединений костей в малые молекулы экраны7,.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Это исследование было поддержано Грант центр восстановительной терапии Дрезден («данио рерио как модель разгадать механизмов глюкокортикоидных индуцированной костной потери») и дополнительно грант Deutsche Forschungsgemeinschaft (Transregio 67, проект 387653785) к ФК. Мы очень благодарны Ян Kaslin и Авинаш Chekuru за их руководство и помощь на проведение трепанации calvariae и переломов в костлявые плавник лучи. Эксперименты были разработаны, выполняются и проанализированы кг и FK. FK написал рукопись. Мы также хотели бы поблагодарить Katrin Ламберт, Николь Cudak и другие члены Кнопф и бренд лабораторий для оказания технической помощи и обсуждения. Мы благодарим также....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Преднизолон | Сигма-Олдрич | P6004 | |
| Диметилсульфоксид (ДМСО) | Сигма-Олдрич | D8418 | |
| Этил-3-аминобензоат метансульфонат (MS-222) | Сигма-Олдрич | A5040 | |
| Тупые щипцы | Aesculap | BD027R | |
| Тонкие щипцы | Dumont | 91150-20 | |
| Скальпель | Игла для | 5518059 | |
| Agarose | Biozym | 840004 | |
| (0,3 мм x 13 мм) | BD Beckton Dickinson | 30400 | |
| Micro drill | Cell Point Scientific | 67-1000 | распространяется e.g. компанией Harvard Apparatus |
| Steel жернова (0,5 &; m диаметр) | Fine Science tools | 19007-05 | |
| Artemia ssp. | Sanders | 425GR | |
| Pasteur pipette (пластик, Pastette) | Alpha Labs | LW4111 | |
| Параформальдегид | Sigma-Aldrich | 158127 | |
| Ализарин красный S порошок | Sigma-Aldrich | A5533 | |
| Альцианский синий 8 GX | Sigma-Aldrich | A5268 | |
| Кальцеин | Sigma-Aldrich | C0875 | |
| Трипсин | Sigma-Aldrich | T7409 | |
| Стереомикроскоп | Leica | MZ16 FA | с камерой QIMAGING RETIGA-SRV |
| Стереомикроскоп | Olympus | MVX10 | с камерой Olympus DP71 или DP80 |
Ссылки
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).
- Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish. Nature Protocols.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
