Изоляция, характеристика и дифференцировка сердца стволовых клеток от сердца взрослого мыши

Santosh K. Yadav; Paras K. Mishra

doi:10.3791/58448

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изоляция, характеристика и дифференцировка сердца стволовых клеток от сердца взрослого мыши

6.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58448

⸱

7 января 2019 г.

Santosh K. Yadav¹ , Paras K. Mishra¹^,²

¹Department of Cellular and Integrative Physiology, University of Nebraska Medical Center, ²Department of Anesthesiology, University of Nebraska Medical Center

В этой статье

Краткое содержание

Общая цель этой статьи заключается в стандартизации протокол для изоляции, характеристика и дифференциации сердечной стволовых клеток (ПОК) от сердца взрослого мыши. Здесь мы описываем метод градиентного центрифугирования плотность изоляции мышиных пок и разработаны методы для культуры CSC, пролиферации и дифференцировки в кардиомиоцитов.

Аннотация

Инфаркт миокарда (MI) является основной причиной заболеваемости и смертности во всем мире. Основная цель регенеративной медицины является пополнить мертвых миокарда после MI. Хотя несколько стратегий были использованы для регенерации миокарда, терапия стволовой клетки остается основной подход к пополнить мертвых миокард ми сердца. Накапливая доказательства предполагает наличие резидентов сердца стволовых клеток (CSCs) в сердце взрослого человека и их эндокринной системы и/или паракринными воздействие на сердца регенерации. Однако CSC изоляции и их характеристика и дифференциации сторону клетки миокарда, особенно кардиомиоцитов, остается технической проблемой. В настоящем исследовании мы предоставили простой метод для изоляции, характеристика и дифференциации CSCs от сердца взрослого мыши. Здесь мы описываем плотность градиентного метода для изоляции пок, где сердце переваривается 0,2% раствором коллагеназы II. Чтобы охарактеризовать изолированных пок, мы оценивали выражение CSCs/сердечная маркеров Sca-1, NKX2-5 и GATA4, и плюрипотентности/stemness маркеры OCT4, SOX2 и Nanog. Мы также определяется потенциал распространения изолированных CSCs выращивание их в чашку Петри и оценки выражения маркер распространения Ki-67. Для оценки возможности дифференциации пок, мы выбрали семь - десять дней культивированный пок. Мы передали их новая табличка с средством дифференциации cardiomyocyte. Они инкубируют в инкубатор культуры клеток на 12 дней, в то время как средний дифференциация меняется каждые три дня. Дифференцированные CSCs Экспресс cardiomyocyte специфических маркеров: актинина и тропонина I. Таким образом CSCs изолированных с настоящего Протокола имеют stemness и сердечной маркеры, и они имеют потенциал для пролиферации и дифференцировки сторону cardiomyocyte линии.

Введение

Ишемическая болезнь сердца, включая инфаркт миокарда (MI), является одной из основных причин смерти во всем мире¹. Клеточная терапия для регенерации мертвых миокарда остается основной подход к улучшению функции сердца ми сердца²^,³^,⁴^,⁵. Различные типы стволовых клеток были использованы для пополнения мертвых миокарда и для улучшения сердечной функции сердца ми. Они могут быть широко распределены эмбриональные стволовые клетки⁶ и взрослых стволовых клеток. В взрослых стволовых клеток были использ....