Мы описываем Ассамблея, операции, и очистки потока аппарата предназначена для грибковых биопленки изображения в режиме реального времени под потока. Мы также представить и обсудить количественных алгоритмы для использования на приобретенные изображения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
В реальном времени обработки изображений и количественная оценка развития грибковых биопленки, с использованием двухфазной системы рециркуляции потока
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В Ротоглоточный кандидоз члены рода Candida должны придерживаться и растут на устные слизистой поверхности находясь под воздействием слюны. Хотя были разработаны модели для роста под потока, многие из этих систем являются дорогими, или не позволяют изображений в то время как клетки находятся под потока. Мы разработали новый аппарат, который позволяет нам изображения рост и развитие клеток Candida albicans под потока и в режиме реального времени. Здесь мы подробно протокол для Ассамблеи и использование этого аппарата потока, а также количественная оценка данных, которые создаются. Мы в состоянии дать количественную оценку ставок, которые клетки придают и отсоединить от слайдов, а также определить меру биомассы на слайде с течением времени. Эта система является экономичным и универсальный, работают со многими типами света Микроскопы, включая недорогие benchtop Микроскопы, и способный распространяется изображений раза по сравнению с другими системами потока. В целом это низкая пропускная система, которая может обеспечить весьма подробную информацию в реальном времени о росте биопленки плесневые под потока.
Введение
Кандидоз (C. albicans) это оппортунистическая грибкового патогена людей, которые могут заразить многих типов тканей, включая устные слизистой поверхности, вызывая Ротоглоточный кандидоз и приводит к нижней качества жизни для пострадавших лиц1. Биопленки является важной характеристикой для патогенеза C. albicans, и многочисленные исследования проводились на формирование и функции C. albicans биопленки,2,3,,4, 5, многие из которых были проведены с использованием статических (отсутств....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. сборка аппарата потока
- Настройка частей, которые перечислены в Таблице материалов согласно схеме на рисунке 1 с учетом соображений, обсуждаются ниже.
Примечание: Для удобства, поток, аппарат делится на две стороны, зеленой стороне (все вверх по течению слайда для фляги СМИ) и оранжевый сторону (все по течению слайда для фляги СМИ).- Убедитесь, что все аппарата потока воздуха, плотно затянуты для предотвращения утечки, с единственным исключением СМИ колбы (рис. 1, 1). Для этого применяются ленты сантехников для любого мужчины потоков перед монтажом Кроме Гаситель (PD) и ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Представитель изображения обычного ночь промежуток времени эксперимент с использованием одичал тип C. albicans клеток при 37 ° C можно увидеть в Рисунок 2A и 1 дополнительного видео. Изображения были контраст, расширение для улучшения видимости. Была выполнена количественная оценка исходных данных, и представитель графики можно увидеть в рисунке 2B. Для создания этих гра.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Использование системы потока изложенные выше позволяет поколения количественных покадровой видео биопленки грибковые роста и развития. Для проведения сравнений между эксперименты это исключительно важное значение для обеспечения визуализации параметры то же самое. Это включает в себя обеспечение микроскоп для Кёлер освещения для каждого эксперимента (многие руководства доступны в Интернете для этого процесса). Помимо изображений параметров, есть некоторые важные шаги, чтобы иметь в виду при работе с аппаратом потока. Во-.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Авторы хотели бы признать доктор Wade Sigurdson для предоставления ценный вклад в дизайн аппарата потока.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Насос | Cole Parmer | 07522-20 | 6 |
| Головка насоса | Cole Parmer | 77200-60 | |
| 6 Трубка | Cole Parmer | 96410-14 | N/A |
| Адаптер для ловушки для пузырьков | Cole Parmer | 30704-84 | 3 |
| Адаптер для ловушки для 1/4" ID вакуумная линия | Cole Parmer | 31500-55 | 3 |
| Встроенный фильтрующий адаптер (4 необходимы) | Cole Parmer | 31209-40 | 8,9 |
| Оранжевая сторона Y | Cole Parmer | 31209-55 | 7 |
| Зеленая сторона Y | там же | 10827 | 2 |
| * Слайды | ibidi | 80196 | 4 |
| * Слайд luers | ibidi | 10802 | 4 |
| Вакуум вспомогательная ловушка для мыльных пузырей | Elveflow/Darwin microfluidics | KBTLarge - Микрофлюидная ловушка для пузырей Комплект | 3 |
| колб для носителей | Corning | 4980-500 | 1 |
| 0.2 &; m воздушный фильтр | Corning | 431229 | 1 |
| Стеклянная бутылка с резьбой для PD и фильтрующей колбы (2 необходимы) | Corning | 1395-100 | 5,10 |
| Порт Винтовая крышка для PD и фильтрующей колбы (2 необходимо) | Wheaton | 1129750 | 5,10 |
| Соединитель трубки с винтовой крышкой | Wheaton | 1129814 | 5,10 |
| Соединитель трубки скошенная шайба | Danco | 88579 | 5,10 |
| Трубочный соединитель плоская шайба | Danco | 88569 | 5,10 |
| Зажимы для встроенных фильтров и последующих фильтров Y (7 необходимы) | Oetiker/MSC Industrial Supply Company | 15100002-100 | 7,8,9 |
| Зажимной инструмент | Oetiker/MSC Industrial Supply Company | 14100386 | н/д |
| 20 μ m встроенный фильтр | Аналитические Научные Приборы | 850-1331 | 8 |
| 10 μ m встроенный фильтр | Аналитические научные приборы | 850-1333 | 9 |
| 2 μ m входной фильтр | фильтра Supelco/Sigma-Aldrich | 58267 | 10 |
| * 0.22 &; m фильтр | фильтра Millipore | SVGV010RS | 11 |
| * 0,22 &; М медиафильтр " адаптер» | BD Biosciences | 329654 | 11 |
| Резиновая пробка | Fisher Scientific | 14-131E | 1 |
| Мешалка с подогревом и внешним отверстием для зонда | ThermoFisher Scientific | 88880006 | Н/Д |
| Датчик температуры | ThermoFisher Scientific | 88880147 | Н/Д |
Ссылки
- Pankhurst, C. L. Candidiasis (oropharyngeal). BMJ clinical evidence. 2012, 1304(2012).
- Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., López-Ribot, J. L. Characteristics of biofilm formation by Candida albicans. Revista iberoamericana de micología. 18 (4), 163-170 (2001).
- Nobile, C. J., Mitchell, A. P.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
