Разделение шпинат тилакоидов белковых комплексов родной электрофорез геля Грин и группа характеристик с помощью подсчета Time-Correlated один фотон

Краткое содержание

Здесь мы представляем протокол для разделения тилакоидов растворимых комплексов электрофорезом геля родной зеленый. Основные шаги для анализа данных предоставляются и впоследствии зеленый гель полосы характеризуются по время коррелирует одного фотонов подсчета (TCSPC).

Аннотация

Свет реакции фотосинтеза осуществляется серия пигментированной белковых комплексов в тилакоидной мембраны. Стехиометрии и организации этих комплексов высокодинамичные как длинные, так и шкал короткое время благодаря процессам, которые адаптируют фотосинтез к изменяющимся условиям окружающей среды (то есть, не фотохимического тушения, переходы между состояниями и Долгосрочный ответ). Исторически эти процессы были описаны спектроскопически с точки зрения изменений в хлорофилловое свечение, и спектроскопии остается жизненно важным методом для мониторинга фотосинтетической параметров. Существует ограниченное количество способов, в котором основной белок сложной динамики могут быть визуализированы. Здесь мы описываем быстрый и простой метод для разделения с высоким разрешением и визуализации тилакоидов комплексов, родной зеленый гель-электрофорез. Этот метод в сочетании с коррелированных по времени одиночных фотонов, считая подробных характеристик свойств флуоресценции хлорофилла полос, разделенных на зеленый гель.

Введение

Фотосинтетические организмы должны постоянно корректировать их физиологии изменения экологических условий, чтобы максимизировать их производительность и успешно конкурировать с соседями¹. Это особенно верно в отношении механизма, ответственного за свет реакции фотосинтеза, как освещенности условия может колебаться на трех порядков между тенями и полного солнечного света. Кроме того экологические факторы, такие, как засухи, холода или тепла стресс может уменьшить наличие углекислого газа для фиксации углерода, который является естественным электрона раковина для продуктов реакций света. Растения должны, таким образом, урожай и максимально эффективно использовать солнечной радиации при сохранении способности рассеивать избыток энергии света при необходимости. В то время как фотоокислительного ущерб по-прежнему происходит регулярно в всех условиях освещения^2,3, неспособность управлять энергии поглощается возбуждения успешно может привести к катастрофическим клеток от повреждения и смерти. Существует несколько адаптивной механизмов, которые позволяют фотосинтетического аппарата быть настроены как изменения в существующих экологических условий, так и временные колебания (т.е., более длинные и короткие сроки)⁴. К ним относятся долгосрочный ответ (LTR) и не фотохимического тушения (ЕНОЛ). ЕНОЛ само по себе считается охватывать по крайней мере три других компонента явлений, включая переходы состояний (qT), быстро индуцибельной энергии закалочные (qE) и фотоингибированию (Ци)⁵.

Эти процессы были первоначально наблюдается и во многом определяется спектроскопических явления [например, ЕНОЛ относится к падению в наблюдаемых хлорофилловое свечение (тушения флуоресценции хлорофилла), это не за счет увеличения темпов Фотохимия]⁶. Термин «переходы состояния» аналогичным образом относится к наблюдаемые изменения в относительное количество флуоресцирования из PSI и PSII⁷. В то время как спектральные методы, которые сделали возможным перечисление этих явлений [в частности, амплитуда импульса модулируется отдела Флуоресценция (PAM)] и продолжают оставаться жизненно важным средством для наблюдения и рассекает фотосинтетических процессов в VIVO, немало биохимии необходима для выяснения механизмов, лежащих в основе этих спектроскопических наблюдений. Состояниями, например, включает в себя цикл фосфорилирования/дефосфорилирования белков LHCII STN7 киназы и фосфатазы TAP38/PPH1, соответственно^8,9,10. Этот цикл регулирует физическое распределение LHCII антенны между двух фотосистем, перемещая часть тримеры LHCII от PSII к PSI, изменив таким образом поглощение сечения фотосистемы^11,12. QE компонент ЕНОЛ быстро преобразует энергию избыток возбуждения в тепла через действия виолаксантина/зеаксантин эпоксидирования/деэпоксидации цикла и ОВО белка. Точная роль ОВО в этом процессе является еще не полностью понимает¹³. Обычно компонент Ци ЕНОЛ, фотоингибированию, приписывается повреждения D1 белок PSII. Восстановление полной фотосинтетической компетенции требует сложный ремонт процесс исправить поврежденные PSII photocenters. PSII ремонт цикл включает миграцию PSII комплексов из granal стеки, демонтаж комплексов, замена поврежденных D1 белков, сборка PSII комплексов и движение PSII комплексов обратно в granal стеки¹⁴. Точный характер фотоингибированию и PSII фотоповреждения остается предметом пристального внимания¹⁵.

Трудность в изучении явлений как государство переходы или PSII ремонт частично обусловлена тем фактом, что существует не один простой способ визуализации механики сложных биохимических систем. Классический биохимических подход к пониманию процесса является сначала отделить его компонентов, так что они могут быть охарактеризованы в изоляции. Родной гель-электрофорез возникло от успешных усилий в 1980-х для разделения и характеризуют комплексы фотосистем от тилакоидной мембраны с более препаративные методы (а именно сахароза градиентного центрифугирования и хроматография)¹⁶. Моющих систем, разработанных для нежно солюбилизировать последнего родной комплексы из тилакоидных мембранах вскоре были адаптированы для электрофоретического разделения методы, прежде всего, Аллен и Штелин¹⁷ и и Петра и Thornber¹⁸, рождая электрофорез геля для родной зеленый. В то время как представляющих только один из различных методов экспериментальной арсенала, родной страница имеет ряд привлекательных характеристик, которые сделали его метод широко занятых в исследованиях фотосинтеза. Собственные страницы относительно быстро и просто, требующих мало специализированное оборудование, обеспечивая высокое разрешение разделение большого числа тилакоидов комплексов одновременно. Это делает родной страница удобным инструментом для изучения динамики тилакоидов и, в сочетании со стандартной страницы второго измерения, а также разнообразные системы моющего средства и буфера, универсальная система для поиска и характеристике новых комплексов тилакоидов.

Это, как говорится, родной зеленый гели имели репутацию ненадежного техники, особенно в неопытных руках, как это легко производить плохие результаты, состоящий из нечеткой, замазанных текстов гели с несколько полос. Эта проблема была решена, в частности, с введением сине родной страница¹⁹. Использование красителя coommassie в системе буфер BN делает разделение белков более надежным. Таким образом BN-страница часто проще и надежнее техника для относительного новичка настроить и может обеспечить высоким разрешением цветоделение тилакоидов комплексов. По этим причинам BN-страница стал методом выбора для большинства работы этого поля. В то время как BN-страница обычно медленнее, для запуска, чем зеленый гель-электрофорез, его основным недостатком является то, что coommassie краски для окрашивания вмешивается идентификации слабый хлорофилл содержащих полос, а также ниже по течению спектральные характеристика проблематичным.

Биохимические информация, предоставленная родной гели и 2D SDS-PAGE может быть значительно укреплен, в сочетании с данными от спектроскопических методов. Независимо от системы работают, Центральная проблема с использованием родного гели для выявления комплексов является, что идентификация всегда может быть оспорено (т.е., белки найти в группе может всегда представляют comigrating комплексов или компоненты, скорее чем одно физиологически аутентичные комплекс). Спектральные характеристики обеспечивает биофизической информации о пигментах в полосы зеленого геля и может использоваться для определения, какие типы комплексов они могут содержать. Хлорофилловое свечение является особенно полезным в этом отношении из-за часто резко различных спектров и флуоресценции продолжительностей жизни, которые характерны для различных фотосинтетический пигмент белковых комплексов. В то время как простой установившемся 77K спектры флуоресценции исторически были полезны в подтверждение личности родной гель комплексов, современных коррелированных по времени одиночных фотонов подсчета (TCSPC) может обеспечить гораздо больше информации. TCSPC позволяет не только характеристика комплексов на основе флуоресценции продолжительностей жизни, но также делает возможным подробное описание передачи энергии между спектральных составляющих в рамках комплекса. Такого рода характеристика становится все более необходимой, как использование различных систем спреды родной гель и обнаруживаются новые предполагаемые комплексы, позволяя выявление белковых комплексов лучше пройти проверку подлинности и предоставление новых биофизической информации о том, как работают эти комплексы.

В этой статье мы предоставляем метод, который позволяет тех, кто имеет мало или нет опыта с родной гель-электрофорез для достижения высокого качества резолюции родной тилакоидов комплексов для целей расследования механики легких реакций фотосинтез. Эта базовая техника затем могут быть расширены на усмотрение экспериментатора улучшить результаты или расширить применимость других видов. Мы затем описать процесс для подвергая родной гель зеленые полосы TCSPC, а также некоторые шаги для базового анализа и представления данных, предоставляемых методом. Муфта родной гель-электрофорез с TCSPC анализом расширяет полезность этих систем гель, предоставляя аутентификации и биофизические характеристики белковых комплексов в пределах полосы. Зеленый гель системы, описанные здесь основана на разработанной Аллен и Штелин¹⁷ с некоторыми изменениями и является таким же, как используется в Шварц и др. ²⁰. Эта система является одним из многих, но имеет специфические особенности, которые являются полезными для этой методологии. Это достаточно быстро, так что тилакоидов изоляции, электрофорез геля и TCSPC анализ удобным может выполняться в один день, позволит устранить потенциальные проблемы хранения проб и деградации. Мы также считаем, что этот метод является надежной в руках неопытных пользователей, обеспечивая результаты этого диапазона от хорошего до начальника, в зависимости от степени оптимизации.

Важно иметь в виду, что зависит от комплексов, визуализируется на родной гель моющего средства и буферной системы, используемые, а также на биологию организма под следствием. Различных моющих средств и буферной системы преференциально отдельных видов различных комплексов, и данный фотосинтетических организмов будет иметь различные комплексы от других живых организмов, не все из которых будут присутствовать при любых обстоятельствах. Системы, описываемой здесь особенно подходит для изучения мегакомплексов PSI, как описано в Шварц и др. ²⁰, но он падает на более дестабилизирующее конце спектра для тех, кто обучается PSII мегакомплексов. Для всестороннего изучения различных моющих средств и буфера систем, используемых в родной гель-электрофорез тилакоидных белков рекомендуется пересмотреть ярви и др. ²¹ и Рантала и др. ²².

Протокол

1. штока решения подготовка для наливания родной зеленый гели

1. Подготовьте 4 x концентрированной буферный раствор для разрешения гели, состоящий из 40% глицерина, глицин 200 мм и 100 мм трис-буфер с рН 8.3.
2. Подготовьте 4 x концентрированной буферный раствор для укладки гели, состоящий из 40% глицерина, глицин 200 мм и 100 мм трис, буферизуются до pH 6,3.
3. Храните эти буферы на 4 ° C, чтобы предотвратить рост плесени.
   Примечание: Буферы стабильны для месяцев при температуре 4 ° C, поэтому рекомендуется подготовка 100-200 мл каждого буфера для дальнейшего использования.
4. Подготовка 1 Л 10 x работает буфер, содержащий 250 мм Tris-HCl рН 8.3, 1,92 М глицин и 1% SDS. Магазин 10 x работает буфер на benchtop.

2. Стоковый раствор подготовка для изоляции и солюбилизация тилакоидов

1. Подготовка 100 мл ТМК гомогенизации буфер, содержащий буфер Tris 50 мм (рН 7), 10 мм MgCl₂и 10 мм KCl и хранить при 4 ° C.
   Примечание: Это основной буфер для гомогенизации и манипулирования тилакоидов образцы. В качестве альтернативы концентрированные растворы акций могут быть подготовлены и разбавляют при необходимости (трис-буфер, MgCl₂и KCl могут легко храниться на benchtop концентратов 1 М).
2. Подготовка запасов решения тилакоидов солюбилизация моющих средств, maltoside B-децил (DM) и n октиловый B-d глюкозид (ОГ), путем растворения каждого моющего средства в ТМК буфера на 20% w / v. Замораживание при-20 ° C в 1 мл аликвоты.
3. Подготовьте тилакоидов солюбилизация буфера (SB), который также является пример загрузки буфера.
   1. Во-первых, сделать ТМК глицерин буфера путем объединения 7 mLs ТМК буфера и 3 мл глицерина.
   2. Для 800 мкл буфера ТМК глицерин добавьте 100 мкл DM Стоковый раствор и 100 мкл ОГ Стоковый раствор. Храните этот SB рабочий раствор, содержащий 2% DM и 2% ОГ, Замороженные при температуре-20 ° C в 1 мл аликвоты.
      Примечание: Каждый Алиготе можно разморозить и размораживают при необходимости.

3. лить зеленый мини-гели для последующего использования

1. Подготовьте отдельный укладки и решении решения гелем в 15 мл одноразовые пробирки.
   Примечание: Объемы предоставляемых достаточно для одного мини-гель, используя распорки плита 1,5 мм.
   1. Чтобы сделать укладки решения гелем, смешайте 1,25 мл 4 x укладка гель буфер, 0,5 мл 40% акриламида раствор (39: 1 C) и 3,25 мл воды дать 5 мл 4% акриламида в 1 x укладки буфера. Чтобы сделать разрешая гель решение объединить 1,875 мл 4 x буфер, 0.94 мл 40% акриламида раствор (39: 1 C) и 4,7 мл воды дать 7,5 мл 5% акриламида в 1 x разрешение буфера.
2. Залейте разрешая гель.
   1. Добавьте 50 мкл 10% Персульфат аммония (APS) решение разрешая гель, а затем добавить 10 мкл TEMED, крышка трубки и осторожно перевернуть несколько раз перемешать. Сразу же перелейте геля раствор между пластинами гель, оставив примерно 1 см между верхней части разрешая гель и нижней части гребня зубов для штабелируя гель.
   2. Аккуратно Пипетка 100% этанола на вершину разрешая гель до уровня геля.
      Примечание: Если гель не задано в течение 15 мин, свежие APS решения следует принять и/или новых TEMED должны использоваться.
   3. После того, как Гель полимеризуется (интерфейс между гель и этанола будет легко виден и не будет двигаться, когда отклоняется гель), залить этанола и пятно с фильтровальной бумаги.
3. Залейте штабелируя гель.
   1. Добавить 25 мкл 10% APS для укладки решения гелем, 5 мкл TEMED, затем добавить шапку и инвертировать смешивать в том же порядке, разрешая гель. Залейте раствор гель на вершине разрешая гель, до тех пор, пока полностью заполняется пространство между пластинами и вставить гребень 10-хорошо.
      Примечание: Когда готов к использованию, снимите гребень из геля и Промыть лунки с водой, убедившись, что колодцы являются прямой и беспрепятственный гелем. Гель может храниться с гребнем на месте при температуре 4 ° C для по крайней мере несколько дней.

4. изоляция сырой тилакоидной мембраны из шпината листья

Примечание: Все шаги должны осуществляться на льду, с использованием предварительно охлажденные оборудования и буферов. Рекомендуется также тусклое освещение. В зависимости от экспериментатора усмотрению и биологических процессов в рамках исследования Ингибиторы протеаз и/или фосфатазы следует добавить свежие буферы ТМК до гомогенизации.

1. Полностью гомогенизировать листья шпината в буфере ТМК с гомогенизатор Dounce стекла.
   Примечание: Примерно 1-2 мл буфера обычно достаточна для листьев шпината маленький ребенок. Листья шпината один ребенок обычно может обеспечить достаточно материала, чтобы загрузить несколько скважин на мини-гель 1.5 мм.
2. Фильтрация сырой листьев огневки для удаления нерастворимых мусора.
   1. Чтобы сделать простой фильтрации устройство, вырезать деликатную задачу уничтожить в половине и сложите его в четверти. Упаковать деликатную задачу очистки в нижней части одноразовые шприц 5 мл и предварительно смочить салфетку с ТМК буфера.
   2. Используйте поршень шприца избыток буфер из деликатную задачу очистки и убедитесь, что фильтр очистки твердо прижимается к нижней части шприц после удаления поршень.
   3. Пипетка листьев огневки на центр очистки фильтра и использовать поршень пройти огневки через фильтр. Соберите отфильтрованных огневки в пластиковых пробирок 1.5 мл.
3. Центрифуга огневки на 5000 x g 10 мин при 4° C для пеллет нерастворимый материал, включая тилакоидной мембраны. Отменить супернатант и Ресуспензируйте гранулы в 1 мл ТМК буфера.
4. Нормализует количество хлорофилла в каждой пробе, регулируя объем каждого образца ресуспензированы тилакоидов, так что каждый образец содержит же общее количество хлорофилла, как описано ниже.
   Примечание: Это позволит каждый образец, чтобы быть солюбилизирован в том же объеме моющего средства и минимизирует вариабельность в солюбилизация из-за различий в объеме Пелле.
   1. Чтобы извлечь хлорофилл от каждого образца ресуспензированы тилакоидной мембраны, взять 50 мкл аликвота в пробки microcentrifuge 1,5 мл и добавить 950 мкл метанола на него. Крышка трубки и смешайте переворачивать несколько раз.
   2. Центрифуга экстракт метанол/хлорофилла в 10000 x g за 10 мин до Пелле осажденный белки.
   3. Определите концентрацию хлорофилла пигмента, содержащие супернатант согласно Порра и др. ²³. принять поглощения чтений 652 и 665 нм, используя спектрофотометр и 1 см кювета. Определение концентрации всего хлорофилла, используя уравнения ниже:
      CHLS + b (мкг/мл) = 22.12 (Abs 652 Нм) + 2,71 (Abs 665 нм)
   4. Используя измерения концентрации хлорофилла в качестве руководства, снимите и выбросьте некоторый объем от каждого образца, при необходимости, так что каждая трубка содержит же общее количество хлорофилла.
5. Повторно Пелле тилакоидной мембраны центрифугированием в 5000 g x 10 мин удалить и удалить супернатант. Будьте осторожны, чтобы удалить все супернатант без аспирационных любой из гранул.

5. солюбилизация тилакоидной мембраны для загрузки на родной гели

1. Оттепель Алиготе ТМК 30% глицерина моющим раствором (SB) и перевернуть несколько раз перемешать. Держите его на льду.
2. Растворяют гранулы тилакоидов, добавив соответствующий объем SB дать хлорофилл концентрации 1 мг/мл.
   Примечание: Эта концентрация является отправной точкой для нахождения оптимального солюбилизация условия, которые должны быть определены эмпирически. То же самое между образцы позволяют проводить допустимые сопоставления должны храниться концентрации хлорофилла.
3. Пипетка вверх и вниз несколько раз будучи осторожны, чтобы избежать вспенивания образца. Держите на льду, чтобы позволить тилакоидов образцов, чтобы солюбилизировать последнего.
   Примечание: Солюбилизировать последнего по крайней мере 10 минут. Солюбилизация время должно быть достаточно долго, что разница во времени солюбилизация между выборками сводится к минимуму.
   Пример: Если для солюбилизировать последнего все образцы требуются 3 минуты, то примерно 30 минут должны быть разрешены для солюбилизация.
4. Центрифуга растворимых тилакоидов на 10000 x g при 4 ° C до Пелле нерастворимый материал.
   Примечание: Солюбилизирован тилакоидов образцы являются стабильными на льду для часов, но следует избегать хранения-70 ° c, так как циклов замораживания оттаивания может привести к потере Мегакомплекс полос.

6. разделение растворимых тилакоидных белков, родной гель-электрофорез

1. Загрузите растворимых тилакоидов супернатанта подготовлен на шаге 5.4 непосредственно на родной гель подготовленных ранее. Для геля 1,5 мм нагрузка 15 мкл растворимых тилакоидов за хорошо.
2. Запуск собственного зеленого геля по существу таким же образом как Гели SDS-PAGE с помощью 1 x работает буфер. Побегите гель на 100 V и место весь гель танк на мокрый лед для продолжительности выполнения для смягчения резистивный нагрев геля.
   Примечание: Гель потребуется около 2 часов для свободного пигмента в начале миграции достичь нижней части геля (рис. 1).

7. иссечение тилакоидов комплекс полос от родной зеленый гели

Примечание: Вырезание конкретные группы интереса от геля необходимо разрешить группы помещается в пути луча и для предотвращения сбора бродячих флуоресценции из близлежащих комплексов.

1. Удалите гель из клеток электрофореза и промыть работает буфер офф гель пластины с дистиллированной водой. Снимите верхнюю крышку от геля и промойте гель с дистиллированной водой.
2. Держите гель на нижней стеклянной пластиной и поместите гель и пластины на льду. Когда не в пользе, держите геля в темноте и накрыть полиэтиленовой пленкой, чтобы предотвратить его от высыхания.
3. С гелем, оставшиеся на стеклянной пластине акцизных каждой полосе интерес, когда вы будете готовы для TCSPC анализа. Акцизный полос чисто с острым скальпелем или лезвием бритвы и заботиться, что подакцизным полоса содержит не загрязняющих материал ремешка.

8. сбор спектров флуоресценции установившегося комнатной температуры

1. Для каждого комплекса, который будет проанализирован программой TCSPC спектр флуоресценции комнатной температуре принимается между 600 и 800 Нм, используя спектрометр флюоресценции.
   Примечание: Длина волны возбуждения, используемые для сбора этого спектра должны соответствовать волны, используемые для TCSPC.

9. TCSPC полос зеленого геля

Примечание: Обратитесь к рис для изображением TCSPC установки.

1. Сэндвич-гель срез между двумя слайдами микроскопии стекла. Используйте липкую ленту, размещены на каждом конце одной из слайдов микроскопии и сложить несколько раз, для создания прокладки, чтобы слайды могут проводиться вместе твердо без сжатия среза геля.
   Примечание: Это создаст путь для лазерный луч пройти между Микроскоп слайды и через гель срез.
2. Добавьте небольшое количество воды в гель срез на краю стекла слайды для создания гладкий интерфейс, который позволит уменьшить сигнал рассеяния.
3. Зажим, гель/слайд бутерброд на пути луча, так, чтобы луч ударяет гель срез открытого края плит, позволяя выбросов флуоресценции быть через сторону стекла слайды, в которых зажата гель, перпендикулярной траектории луча.
   Примечание: Длина волны возбуждения используется будет зависеть от эксперимента. Волны 435 Нм будет волновать хлорофилла a и b хлорофилла, а 465 Нм преференциально будет волновать b хлорофилла. В данном случае, 435 Нм был использован в качестве волны возбуждения.
4. 10000 точек данных на регулярной основе Соберите спектра флуоресценции выбросов для каждого комплекса. Например, сбор данных каждые 10 Нм, начиная на 680 нм и заканчивая на 750 Нм.
   Примечание: Подготовьте несколько полос гель для каждого комплекса быть изучены, так что свежий пример доступен в том случае, если Фотообесцвечивание предотвращает надлежащего сигнала коллекции.

10. TCSPC (анализ данных)

1. Для данного комплекса сначала нормализуют пик высоту каждой кривой распада для всех длин волн собраны.
   Примечание: Этот шаг не является необходимым для строительства Дас, но позволяет для распада кривых накладными и визуально сравнить друг с другом как первый осмотр данных.
2. Хвост матч каждой распада кривой спектра флуоресценции устойчивого состояния комплекса, как описано ниже.
   1. Выберите timepoint, после чего распада сигнал плоские, обычно после несколько наносекунд.
   2. Для каждой длины волны, нормализовать распада кривой, так что интенсивности сигнала на выбранном timepoint равным значению спектра флуоресценции стабильного состояния на том длина волны (то есть, значения всех длин волн вместе в выбранных timepoint будет повторно создать спектр флуоресценции устойчивого состояния).
3. Постройте распада младший спектры (ДАС) от хвост согласованной распада кривых, как описано ниже.
   1. С помощью данных точек из кривых хвост согласованной распада построить ряд участков, изображая диаграммой интенсивности флуоресценции против волны через регулярные интервалы времени (например, каждые 10 л.с.). К примеру DAS на 50 л.с. построен путем построения значение каждой кривой распада на 50 л.с. против волны.
   2. Наложение все связанные распада спектров для создания сюжета стиль водопад, который показывает распад спектра флуоресценции со временем.

Результаты

Представитель результаты для зеленой электрофорез представлены на рисунке 1. Переулок 1 приведен пример идеальных результатов для электрофореза геля зеленым шпинатом тилакоидов, в котором видны максимальное количество четкие, резкие зеленые полосы. Эти результаты несколько нетипичных, отчасти потому, что не все группы видели в полосе 1 обычно присутствуют в данной выборке. Дополнительные примеры очистки, в виде хлоропласта изоляции до тилакоидов солюбилизация...

Обсуждение

Успешный тилакоидов солюбилизация и родной гель запустить приведет к резолюции несколько отдельных видны зеленые полос на гель без существенных искажений или мазать полос. Перегрузка гель, высокой концентрации моющего средства, неправильный пример рН, сжимающих материал, управлением гель слишком быстро или при слишком высокой температуре, и неправильно налил гель являются все факторы, которые могут способствовать плохо решен тилакоидов комплексов. Во время оптимизации условий геля самой (например., градиент конц...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Глицин	Sigma	G8898
Трис основание	Sigma	#648310
SDS	Sigma	L3771
Децил мальтозид	Sigma	D7658	n-децил бета d мальтопиранозид, не додецил мальтозид или альфа децил мальтозид
Октилглюкозид	Sigma	O8001
Акриламид	BioRad	161-0148	37,5/1 C 40% раствор
TEMED	BioRad	161-0800
Персульфат аммония	BioRad	161-0700
Хлорид магния	Sigma	M2670
Хлорид калия	Sigma	P9333