Методическая статья

Сочетая гистохимические окрашивание и анализа изображений для количественного определения крахмала в яичнике Примордия черешни во время зимней спячки

DOI:

10.3791/58524

⸱

20 марта 2019 г.

 , 
1Instituto Agroalimentario de Aragón - IA2 (CITA-Universidad de Zaragoza), Centro de Investigación y Tecnología Agroalimentaria de Aragón

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы представляем методологии для количественного определения содержания крахмала в яичнике Примордия в черешня (Prunus avium L.) во время зимней спячки с помощью системы анализа изображений в сочетании с гистохимические методы.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изменения в крахмал в небольших структур связаны с ключевыми событиями во время нескольких процессов развития растений, включая репродуктивной фазы от опыления для оплодотворения и наступлением плодоношения. Однако вариации в крахмала во время дифференциация цветок не известны полностью, главным образом ввиду трудности количественного содержания крахмала в особенно малые структуры Примордия цветок. Здесь мы описываем метод количественного определения крахмала в яичнике Примордия черешни (Prunus avium L.) с помощью системы анализа изображений прилагается к Микроскоп, который позволяет, касающиеся изменений в содержание крахмала с различными фазами покоя с осени до весны. Для этой цели состояние покоя бутоны определяется путем оценки почка роста побегов, переведен в контролируемых условиях в различные моменты в зимнее время. Для количественной оценки крахмала в яичнике Примордия, бутоны последовательно собираются, фиксированной, встроенные в парафин, секционного и витражи с я2КЛ (калия йодида йод). Подготовка наблюдается под микроскопом и анализируются анализатором изображения, что отличает крахмала от фона. Содержание крахмала значения получаются путем измерения оптической плотности изображения, которое соответствует окрашенных крахмала, учитывая сумму оптической плотности каждого пикселя как оценки содержание крахмала изучал кадра.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Умеренный древесных многолетних растений адаптироваться к сезоны, модулируя их роста и развития. В то время как они развиваются весной и летом, они перестают расти в течение осени пойти спящие в зимний1. Хотя состояние покоя позволяет им выжить в низких зимних температур, охлаждения является необходимым условием для надлежащего budburst в весной2. Важные последствия покоя в умеренных фруктов производства и лесного хозяйства привели к разнообразные усилия для определения и прогнозирования периода покоя3. В фруктовых деревьев, эмпирических экспериментов, передачи побеги заставляя условий и статистич....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. покоя решимость и растительных материалов коллекции

  1. Образец бутоны на местах. Покоя исследования долгосрочных экспериментов и требуют взрослых деревьев достаточно большой для сбора бутоны и стреляет всю зиму без ущерба для развития деревьев во время следующей весной. Специальные Орчард управления может потребоваться в зависимости от системы подготовки; Таким образом Обрезка может быть менее серьезными, чем для целей производства фруктов.
    1. Каждую неделю, с начала осени до начала распускания, собирать и весят 10 бутонов.
    2. Исправьте бутоны, помещая их в 10-мл стеклянной трубки с крышкой и Замочите образцы в фиксирующие растворе этанола/уксус....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Покоя исследования требуют определения момента, когда охлаждение требования выполнены. Несмотря на отсутствие фенологическими изменениями в зимний период в полевых условиях (рис. 1а) вишневые деревья не восстановить потенциал роста в подходящих условиях, до тех пор, пока они пройти определенный период при низких температурах. Регулярные передачи побегов в контролируемых условиях камеру (рис. 1B) в зимнее время позволило оценки со.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Покоя в древесных многолетних растений представляет четкие последствия в производство фруктов и лесного хозяйства в условиях изменения климата, хотя остается неясным, биологический процесс позади покоя. Покоя исследования можно подойти с различных точек зрения, но исследования, ищет биологического маркера для зимней спячки усилилась за последние годы. Однако большинство попыток найти недвусмысленное индикатор, отображающий, когда бутон нарушил покоя были безуспешными3. По методике, описанной здесь.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы благодарят с благодарностью Мария Эрреро и Eliseo Ривас за их полезные обсуждения и консультации. Эта работа была поддержана Ministerio де Economía y развитию — Европейский фонд регионального развития, Европейский союз [Грант число BES-2010-037992 е. ф.]; Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria [номера грантов RFP2015-00015-00, RTA2014-00085-00, RTA2017-00003-00]; и городского управления-де-Арагон — Европейский Социальный фонд, Европейский союз [Grupo Консолидадо A12-17R].

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Прецизионные весыSartoriusCP225D
Стереоскопический микроскопLeica MicrosystemsMZ-16
Сушильная печьMemmertU15
Станция для встраивания парафинаLeica MicrosystemsEG1140H
Вращающийся микротомReichert-Jung1130/Biocut
Лезвие микротомаFeatherS35Микроскоп из нержавеющей стали
Leica MicrosystemsDM2500
Цифровая камераLeica MicrosystemsDC-300
Система анализа изображенийLeica MicrosystemsQuantiment Q550

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kurokura, T., Mimida, N., Battey, N. H., Hytönen, T. The regulation of seasonal flowering in the Rosaceae. Journal of Experimental Botany. 64 (14), 4131-4141 (2013).
  2. Rohde, A., Bhalerao, R. P. Plant dormancy in the perennial context. Trends in Plant Science. 12 (5), ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Starch QuantificationHistochemical StainingImage AnalysisOvary PrimordiaSweet CherryWinter DormancyFlower BudsLugol s IodineParaffin WaxBrightfield Microscopy

Похожие статьи