Здесь представлен протокол для быстрого неразрушающего скрининга хлопковых генотипов на рениформную устойчивость нематод. Протокол включает в себя визуальное изучение корней нематод-инфицированных саженцев хлопка для определения реакции инфекции. Вегетативная съемка с каждого растения затем распространяется для восстановления растений для производства семян.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Скрининг Хлопковых Генотипов для Сопротивления Нематод Рениформ
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Быстрый неразрушающий reniform nematode (Rotylenchulus reniformis) протокол скрининга необходим для развития резистентного хлопка (Gossypium hirsutum) сортов для улучшения управления нематод. Большинство протоколов включают извлечение нематод вермиформа или яиц из корневой системы хлопка или почвы для заливки для определения плотности населения или скорости воспроизводства. Эти подходы, как правило, отнимают много времени с небольшим количеством оцениваемых генотипов. Здесь описан альтернативный подход, в котором корневая система визуально исследуется на нематодную инфекцию. Протокол включает в себя прививку саженцев хлопка через 7 дней после посадки с вермиформными нематодами и определение количества самок, прикрепленных к корневой системе через 28 дней после прививки. Данные выражаются как количество самок на грамм свежего корневого веса, чтобы приспособиться к изменению роста корней. Протокол предоставляет отличный метод оценки устойчивости хозяина-растения, связанного со способностью нематод установить место заражения; однако, сопротивление, которое препятствует репроизводству нематод не оценивается. Как и в других протоколах скрининга, вариации обычно наблюдаются при нематодной инфекции среди отдельных генотипов внутри и между экспериментами. Данные представлены для иллюстрации диапазона вариаций, наблюдаемых с помощью протокола. Чтобы приспособиться к этому изменению, в эксперименты включены контрольные генотипы. Тем не менее, протокол обеспечивает простой и быстрый метод оценки устойчивости хоста и растений. Протокол успешно используется для выявления устойчивых присоединений от G. сбор зародышевой плазмы и оценка сегрегации популяций более чем 300 особей для определения генетики резистентности. Был также разработан метод вегетативного распространения для восстановления растений для размножения резистентности. После удаления корневой системы для оценки нематод, вегетативная съемка пересаживается, чтобы позволить развитие новой корневой системы. Более 95% побегов обычно развивают новую корневую систему, растения достигают зрелости.
Введение
Ротиленчулус рениформис (Линфорд и Оливейра), обычно называют reniform нематод, является одним из основных паразитических видов нематод, присутствующих в почвах юго-восточной части Соединенных Штатов1,2,3. Нематод является облик, сидячий полуэндопаразит, требующий принимающей завод для завершения своего жизненного цикла2,4. Vermiform preadult женские нематоды проникают в корневую систему хозяина, чтобы установить место кормления в стеле2,3. Как немато....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Поддержание источника R. reniformis Инокулум
- Заполните терракотовые глиняные горшки (15 см в диаметре, 13,5 см в высоту) паровой пастеризованной смесью из 1-часть песчаного суглинка и 2-частей песка. Завод восприимчивых помидоров (Solanum lycopersicon) разнообразие в каждом горшке и место горшки в стеклянной лавке.
ПРИМЕЧАНИЕ: Другие восприимчивые сорта растений, такие как хлопок могут быть использованы вместо помидоров. - Прививать томатные растения с vermiform reniform нематод (см. шаг 3.3). Поддерживайте растения в стекольном доме при температуре около 28 градусов по Цельсию.
2. Поса....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Rotylenchulus reniformis инфекции корневой системы для двух сортов представлена на рисунке 1. Относительно меньше женских нематод рениформспособных способны установить место кормления для устойчивого генотипа хлопка по сравнению с восприимчивым генотипом. Вариации в росте корней распространены между присоединениями, как показано на рисунке 2. Это изменение, измеряемое свежим корневым весом, также можно наблюдать между ра.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Эффективный протокол скрининга необходим для 1) идентификации R. reniformis устойчивых хлопковых генотипов для того, чтобы оценить генетику сопротивления и 2) размножения устойчивых сортов. Большинство протоколов оценивают R. reniformis плотность населения или скорость воспроизводства путем извлечения нематод вермиформа или яйца из системы корней хлопка или заливки почвы8,11,12,
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Это исследование финансировалось Министерством сельского хозяйства Соединенных Штатов, Службой сельскохозяйственных исследований. Упоминание торговых наименований и коммерческих продуктов в данной статье предназначено исключительно для предоставления конкретной информации и не подразумевает рекомендаций или одобрений Со стороны Министерства сельского хозяйства США. Министерство сельского хозяйства США является поставщиком равных возможностей и работодателем. Авторы не имеют конфликта интересов, чтобы объявить. Техническую помощь оказала Кристи Джордан.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Рэй Лич Кону-тайнер | Stuewe and Sons Inc. | SC10U | |
| Конус-тайнер поднос | Stuewe and Sons Inc. | RL98 | |
| Песок | различные | ||
| ватные шарики | |||
| пилоны 4 дюйма растительные этикетки (4 in L x 5/8 in W) | Pylon Platics | L-4-W | Принимается любая марка или поставщик. |
| Контейнеры для образцов на 4 унции | Fisher Scientific | 16-320-731 | Принимается любая марка или поставщик. |
| Красный пищевой краситель | McCormick & Co., Inc. | ||
| наконечники для пипеток объемом 1 мл | различные | ||
| контейнеры по 10 л | различные | недорогие ведра. | |
| Горшки 6 л | Nursery Supplies Inc. | Poly-Tainer-Can No2A | Допустима любая марка или поставщик. Можно использовать горшки разных размеров |
| : Почвенная среда | Sun Gro Horticulture | Metro-Mix 360 | Любая марка или поставщик приемлемы. |
| Удобрение | Everris NA Inc. | Osmocote Plus | Любой бренд или поставщик приемлемы. |
| Пластиковый контейнер (73,6 см Д x 45,7 см Ш x 15,2 см Г) | Rubbermaid | 3O29 | Допустим любой бренд или поставщик. |
Ссылки
- Heald, C. M., Robinson, A. F. Survey of current distribution of Rotylenchulus reniformis. in the United States. Journal of Nematology. 22 (4), 695-699 (1990).
- Koenning, S. R., Wrather, J. A., Kirkpatrick, T. L., Walker, N. R., Starr, J. L., Mueller, J. D. Plant-parasitic nematodes attacking cotton in the United States: old and emerging ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
