Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Изготовление подмостей Decellularized хряща производные матрица

10.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58656

⸱

7 января 2019 г.

 ,  ,  , 
1Department of Orthopedics, University Medical Center Utrecht, The Netherlands, 2Department of Veterinary Medicine, Equine Surgery, University of Utrecht, The Netherlands

В этой статье

Краткое содержание

Decellularized хряща производные леса может использоваться как леска для восстановления хряща руководство и средства для регенерации ткани остеохондральные. Этот документ описывает процесс decellularization в деталях и предоставляет предложения использовать эти леса в настройках в пробирке.

Аннотация

Остеохондральные дефекты отсутствие достаточного потенциала внутреннего ремонта для регенерации функционально звук костной и хрящевой ткани. В этой степени хряща исследования были направлены на развитие регенеративные подмостей. Эта статья описывает развитие лесов, которые полностью являются производными от природных хряща внеклеточного матрикса, приходя от лошадиного донора. Потенциальные приложения подмостей включают производство аллотрансплантация тканей для ремонта хряща, выступающей в качестве лески для ткани остеохондральные инженерии и предоставление в пробирке модели для изучения формирования тканей. Decellularizing ткани, клеток донора будут удалены, но многие из натуральных биоактивных подсказки, мысли будет сохранена. Главное преимущество использования такого природного леса по сравнению с синтетическим леску является для регенерации тканей остеохондральные диска без дальнейших функционализации полимеров. Подмости хряща производные матрица может использоваться для регенерации костной и хрящевой ткани в настройках и в естественных условиях, так и in vitro.

Введение

Дефектов суставного хряща в колене, вызванные травматического события может привести к дискомфорту и прежде всего, могут иметь большое влияние на жизнь молодых и активного населения1,2,3. Кроме того повреждение хряща в молодом возрасте может привести к более быстрым началом остеоартрита позднее в жизни4. В настоящее время только бабло терапия для обобщенных Артроз коленного сустава является эндопротезирование хирургия. Как гипоклеточные, aneural и аваскулярный ткани хряща, его регенеративные способности крайне ограничена. Таким образом регенеративной медицины подходы стремились после помощи и стимулировать регенеративные способности родной ткани. Для этой цели подмости разработаны и используются как либо клетки перевозчика или индуктивный материал, который подстрекает к дифференциации и регенерации тканей родной клетки тела5.

Decellularized леса были широко изучены в регенеративной медицине6. Она имела некоторый успех, например, в пособничестве регенерации кожи7, брюшной структуры8и9сухожилий. Преимущество использования decellularized лесов является их естественного происхождения и их способность сохранить биологически активные сигналы, которые привлекают и побудить клеточная дифференцировка в соответствующие линии, необходимые для ткани ремонт6,10. Кроме того поскольку внеклеточного матрикса (ECM) является естественным биоматериала и decellularization предотвращает потенциальных иммунный ответ, удаляя содержимое сотовой или генетические, вопросы, касающиеся биосовместимость и способность к биологическому разложению преодолеваются.

Подмости хряща производные матрица (МЧР) показали большую хондрогенном потенциал в пробирке эксперименты, когда семенами с Мезенхимальные стромальные клетки11. Кроме того эти леса показали потенциал для формы костной ткани через endochondral окостенение на внематочная мест в в естественных условиях настройки12. Как руководство МЧР подмостей формирования обеих костей и хрящевой ткани, эти леса могут иметь потенциал для ремонта дефектов остеохондральные помимо хрящевой ткани.

Эта статья описывает протокол адаптированный Ян 13 et al. (2010) для производства decellularized МЧР подмости от лошадей задушить хряща. Эти леса богаты, коллаген типа II и лишенный клетки и не содержат каких-либо гликозаминогликанов (GAGs) после decellularization. В vitro и in vivo эксперименты по ремонту дефектов хондральные (Остео) может проводиться с использованием этих лесов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Для этого протокола Коневодство задушить хряща был получен от лошадей, которые умерли от других причин, чем остеоартрита. Ткань была получена с разрешения владельцев, в соответствии с институциональной этических правил.

Примечание: Этот протокол описывает изготовление подмостей от decellularized лошадей хряща, который может использоваться для приложений, таких как платформы тканевой культуры в vitro или в естественных условиях имплантации в регенеративной медицине стратегии. Ферментативная обработка шаги должны выполняться в хронологическом порядке, описанные.

1. заготовка суставного хряща от доноров (трупных) суставов

  1. Впереди уборочной шага, подготовьте 1 Л хряща моющего раствора, состоящий из стерильных фосфат амортизированное saline (PBS), дополнены 100 ед/мл пенициллин 100 мкг/мл стрептомицина и 1% (v/v) амфотерицин B.
  2. Надевайте перчатки и пальто лаборатории в течение всей процедуры сбора урожая, так как донор может снести патогены.
  3. Получите нетронутыми (трупных) совместное для изоляции хряща.
    Примечание: На данный момент кожа вокруг сустава до сих пор нетронутыми. Лошадиный задушить хряща, полученные от лошади использовался в настоящем Протоколе, но могут также использоваться другие суставы от других видов.
  4. Удаление кожи, который расположен вокруг области совместных интересов с помощью скальпеля и хирургический пинцет. Кроме того удаление излишней жировой и мышечной ткани, при необходимости, без повреждения основной совместной. При необходимости передачи подготовленных труп биологической безопасности кабинета.
  5. Чтобы выполнить артротомии, т.е., разделение сустава, сначала определить местоположение, где совместное формулирует, выполняя расширение и сгибании сустава.
  6. Осторожно удалите более слои жира, мышц и сухожилий с скальпель и хирургический пинцет открыть совместный области.
  7. Сделайте надрез достичь полости сустава.
    Примечание: Совместная полость заполняется с синовиальной жидкости, которая может капать из полости при выполнении правильный разрез.
  8. Далее открыть совместное полностью, проходящем через сухожилий, которые держать совместных вместе.
  9. Осмотрите хряща для любой макроскопических ущерб.
    Примечание: Если суставного хряща не имеют глянцевый и гладкий внешний вид, или если видно вздутий, щели или дефекты присутствуют, отбросить хряща.
  10. Для удаления хряща из субхондральной кости используйте стерильным скальпель. Вырежьте все, вплоть до субхондральной кости также удалить глубокие зоны хряща (рис. 1). Чтобы предотвратить хряща от высыхания, регулярно капать хряща моющего раствора на хрящ.
    Примечание: В это время не имеет значения размер кусочков хрящей.
  11. Соберите фрагменты хряща в 50 мл пробирки, содержащие ранее подготовленных хряща моющего раствора (рис. 2A).
  12. После сбора хряща от всех представляющих интерес областях, оснастки заморозить фрагменты хряща в жидком азоте за 5 мин.
  13. Перенесите ломтики хряща в 50 мл трубки и сразу lyophilize фрагменты хряща для 24 h в заморозки сушка. Заход Замораживание сушки приблизительно 0.090 мбар а конденсатор льда-51 ° C (рис. 2B).
  14. Храните фрагменты хряща в сухом месте при комнатной температуре до дальнейшего использования.
    Примечание: Вплоть до формирования эшафот решения и хряща, не должен быть подготовлен и стерильные обращение.

2. Создание Decellularized хряща частиц

  1. Погружайте лиофилизированные хряща ломтики в жидком азоте.
  2. Прямо шлифуют образцы вручную или путем фрезерный станок. При шлифовании фрагменты хряща вручную, используйте ступку и пестик и шлифуют ломтиками примерно 45 минут до тех пор, пока они являются вдувания (рис. 2 c и 2D). При шлифовании автоматически, используйте фрезерный станок с заданной скоростью в течение нескольких секунд до минуты, до тех пор, пока пылевидного хряща оснастки замороженные срезы.
    Примечание: Предварительно охлаждения раствора или отсеке шлифовальных фрезерного станка, добавив жидкого азота. При использовании фрезы, убедитесь, что все частицы являются земли, и что без частицы остаются в нижней части секции измельчения.
  3. Сито хряща частицы избавиться от больших частей, используя сито с размером ячейки 0,71 мм.
  4. Храните в сухом месте при комнатной температуре частицы.

3. ферментативный Decellularization с трипсином 0.25%-EDTA

  1. Подготовить раствор пищеварение, состоящий из трипсин 0.25% с ЭДТА, дополняется 100 ед/мл пенициллин 100 мкг/мл стрептомицина и 1% (v/v) амфотерицин B. магазина решение при 4 ° C.
    Примечание: Trypin является протеазы, что ухудшает белки, проживающих в хрящевой ткани. Это ферментативный шаг откроет плотной хрящевой структуры.
  2. Заполните трубы 50 мл с частицами вдувания хряща до объема приблизительно 7,5 мл трубки.
  3. Инкубируйте хряща частиц с подготовленной пищеварение решения при 37 ° C для 24 часа в общей сложности, при обновлении пищеварение решение каждые 4 ч.
    1. Во-первых добавьте 30 мл раствора пищеварения каждый Тюбик 50 мл, содержащего частицы хряща.
    2. Затем Ресуспензируйте частицы с помощью вихревого или пипетки так, что все частицы подвергаются ферментативной решения.
    3. Проинкубируйте образцы для 4 ч при 37 ° C на ролике.
    4. Чтобы обновить решение пищеварение, центрифуга трубы для 20 минут 3113 x g вызывать оседания частиц хряща. Выбросите супернатант.
      Примечание: Супернатант станет яснее с каждый трипсина инкубационный период.
    5. Повторите шаг 3.3.1–3.3.4 до тех пор, пока частицы были инкубировали с пищеварением решения для 6 циклов 4 ч.
  4. После окончательной цикла удалить супернатант после центрифугирования и мыть частицы в 30 мл моющего раствора дважды хряща. Центрифуга частиц для 20 минут 3113 x g между каждым из стирок.

4. ферментативный Decellularization с лечением Нуклеаза

  1. Подготовка 10 мм трис-HCl решение при pH 7.5 в деионизированной воде.
  2. Добавьте 50 дезоксирибонуклеаза ед/мл и 1 ед/мл рибонуклеазы А в буфер Tris-HCl, чтобы получить решение нуклеиназы.
    Примечание: Этот шаг выполняется специально деградировать deoxyribonucleases и рибонуклеаз.
  3. Чтобы удалить хряща, моющего раствора из хряща частиц (шаг 3.4), центрифуги для 20 минут, 3 113 x gи удалить супернатант.
  4. Добавить 30 мл раствора нуклеиназы частиц хряща и размешать частицы через решение, убедившись, что все частицы подвергаются к решению нуклеиназы.
  5. Проинкубируйте образцы на ролике за 4 ч при 37 ° C.
  6. Удаление решения нуклеиназы центрифугированием хряща частиц для 20 минут, 3 113 x g и удалить супернатант.
  7. Стирать образцы, добавив 30 мл 10 мм трис-HCl решение без дезоксирибонуклеаза и рибонуклеазы А частицы хряща. Ресуспензируйте частицы и оставить образцы на рольганг для 20 ч при комнатной температуре.

5. стиральный порошок Decellularization

  1. Сделать стиральный раствор, растворяя 1% (v/v) octoxynol-1 в PBS.
  2. Удаление решения трис-HCl из хряща частиц, центрифугирование для 20 минут, 3 113 x g и отменяя супернатант.
  3. Добавьте 30 мл приготовленного раствора моющего средства 1% частиц хряща. Ресуспензируйте хряща частицы осторожно, чтобы избежать пенообразования решения.
    Примечание: Этот шаг разрушает клеточные мембраны.
  4. Проинкубируйте образцы на ролике за 24 ч при комнатной температуре на ролике.
  5. Удалить моющим центрифугированием для 20 минут, 3 113 x g и удалить супернатант.
  6. Чтобы удалить все остатки decellularization решений, мыть хряща частиц в 6 циклов 8 h 30 мл моющего раствора хряща. Выполните Стиральная ролика при комнатной температуре.
    1. Чтобы изменить следующий мыть, центрифуга подвеска для 20 минут, 3 113 x g, удалить супернатант и добавить свежие хряща моющего раствора.
  7. Оставьте последний мыть в трубах и хранить decellularized хряща частицы-80 ° c.

6. Создание леса из Decellularized частиц

  1. Если частицы были сохранены при температуре-80 ° C, оттепель закрытые трубы, которые содержат частицы хряща в теплой воде перед созданием подмостей.
  2. Передать хряща частиц с ковшик цилиндрической формы, например, пластиковый флакон с диаметром 8 мм и высотой 2 см.
  3. При размещении хряща частиц в пластиковые плесень, нажмите все-пузырьки воздуха, чтобы избежать пустот в леса и заполнить форму до края.
    Примечание: Это будет более трудно принять леса из металлической формы после формирования эшафот, что может привести к трещинам в эшафот.
  4. Замораживание формы с частицами хряща для 10 мин при-20 ° C.
  5. Lyophilize хряща леса в пределах их формы для 24 h в заморозки сушка.
  6. После лиофилизации, возьмите леска из формы (рис. 3) и перекрестные ссылки их с ультрафиолетового (УФ) света на расстоянии 30 см и 365 Нм на ночь.
  7. Чтобы использовать подмости для культуры в пробирке клеток или в естественных условиях имплантации, стерилизуйте подмости с, например, этилен оксид (ВЭТО).
    Примечание: EtO стерилизации производится с внешней стороны.

7. характеристика Decellularized леса с гистологическим Stainings

Примечание: Для обеспечения полной decellularization и визуализировать оставшиеся естественный характер хряща, выполните несколько гистологические stainings перед использованием подмости в любом эксперименте, включая гематоксилином и эозином (H & E) пятная для обеспечения decellularization, Safranin-O пятнать визуализировать остаточного присутствия кляп, коллаген типа I иммуногистохимия различать содержание коллагена и коллаген типа II иммуногистохимия различать содержание коллагена.

  1. Вырежьте подмости в тонкими ломтиками примерно в 3 мм с помощью скальпеля.
    Примечание: Если подмости вырезаны в больших или меньших размеров, длительности циклов обезвоживания должны быть адаптированы.
  2. Внедрить подмости в капле 4% (w/v) Альгинатные и побудить cross-linking путем добавления аналогичный объем 3,7% без буферизации формалин, содержащий 20 мм CaCl2.
    Примечание: Альгинат Встраивание делает эшафот ломтики более жесткие по сравнению с стиральная шаги до внедрения парафина. В случае подмости были клетки семенами или в vivo имплантируются альгинат встраивание не является необходимым, как состав подмостей будет достаточно устойчивы, за счет включения ECM клетками.
  3. Обезвоживает образцы, поместив их в серии градуированных этанола, начиная с циклами один час, 70%, 96%, 96%, 100% и 100% этанола, следуют два цикла 1 h ксилол и заканчивая двух циклов 1 h парафина на 60 ° C.
  4. После обезвоживания парафин внедрить образцы в плесень и охлаждения образцов.
  5. Вырежьте образцы с микротом ломтиками толщиной 5 мкм.
  6. До окрашивания, увлажняет образцы, помещая их в серии возвращенные градуированных этанола. Начните с двумя моет ксилоле на 5 мин, следуют 2 моет 100%, 95% и 70% этанола 3 мин в мыть. Наконец стирайте образцы 3 раза в воде в течение 2 мин.
    Примечание: В случае использования альгината для обработки образцов для встраивания парафин, убедитесь, что смывать альгината с лимонной кислотой 10 мм до регидратации парафиновых срезах.
  7. Пятно образцы с гематоксилином и эозином, Safranin-O, коллаген I и коллаген II как предыдущий описано11.

8. характеристика Decellularized леса с количественного анализа

  1. Получите папаин дайджесты подмостей, как описано выше11.
  2. Выполните assay с комплектом количественного определения ДНК на основе флуоресценции, измерить содержание ДНК двухручьевой лесов для обеспечения полной decellularization. Следуйте протокола, предусмотренного заводом-изготовителем. Экспресс количество ДНК в сухой вес эшафот.
  3. Выполните dimethylmethylene синий пробирного для количественного определения оставшуюся часть приколов в пределах леса, как описано выше11. Экспресс сумма в кляп в ДНК.

9. посев Decellularized подмостей

  1. Вырежьте стерилизованные подмости от шага 6.7 в 3 мм толщиной ломтиками.
  2. Передача лесов в отдельных скважинах 6-ну плиты.
  3. Увлажняет подмости с клетки культуры среднего дозирования 1 мл среды на вершине эшафот и дайте ему впитаться в течение 30 мин использовать хондроцитов или расширение среды мезенхимальных стволовых клеток (МСК).
    Примечание: Используйте той же среде для регидратации леску для клеточной культуры клеток, которые будет заполнена. Расширение среднего хондроцитов состоит из Дульбекко изменение средств массовой информации (DMEM) с 10% тепло инактивированная плода бычьим сывороточным (ФБС), 100 ед/мл пенициллин, стрептомицин 100 мкг/мл и 10 нг/мл фибробластический фактор роста-2 (FGF-2). MSC расширения среды состоит из минимум основных средних альфа (MEM) с 10% тепло инактивированная FBS, 0,2 мм L-Аскорбиновая кислота 2-фосфат, пенициллин 100 ед/мл, 100 мкг/мл стрептомицина и 10 нг/мл ФБП-2.
  4. Подготовка 3 х 106 клеток в 100 мкл среды, которая является требуемый объем для каждого леса с диаметром 8 мм и высотой 3 мм.
    Примечание: Несколько типов клеток из разных видов могут использоваться для заполнения. При использовании хондроцитов или Мезенхимальные стромальные клетки, изолируйте клетки как описано11. При использовании хондроцитов, убедитесь, что они не были расширены мимо P1 проход для того, чтобы свести к минимуму количество Дедифференцированная хондроцитов. При использовании мезенхимальных стромальных клеток, они должны испытываться на их способности для дифференциации мульти линии, как описано выше14.
  5. Накапайте 50 мкл готовую суспензию клеток на вершине предварительно замоченные эшафот и инкубировать леска для 1 ч при 37 ° C.
  6. Осторожно поверните леску вверх вниз, накапайте оставшиеся 50 мкл суспензии клеток на этой стороне леса и инкубировать 1 час при температуре 37 ° C.
  7. После инкубации добавить 3 мл среды скважин и культура клетки посеян подмости на 37 ° C. Обработайте пластину культуры осторожно, чтобы избежать отряд клеток.
  8. Культура подмости для периода времени, необходимого для выполнения эксперимента и изменить среднего 2 – 3 раза в неделю. Накапайте медленно и насколько далеко от леса как можно скорее.
  9. После культивирования клеток посеян эшафот, разрезать пополам подмостей и обрабатывать их для гистологии и биохимические анализы.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Decellularization МЧР подмостей всегда должна быть подтверждена с помощью гистологические stainings, а также с помощью ДНК количественной оценки для измерения количества ДНК останков. Недостаточная decellularization может привести к нежелательным иммунологических ответов, которые влияют на результаты в в естественных условиях параметры15,16,17. Для этого конкретного decellularization метода ДНК б...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

ECM суставного хряща, очень плотные и очень устойчивы к различных ферментных методов лечения. Многоступенчатые decellularization протокол, описанные в этой статье рассматривается такое сопротивление и успешно создает decellularized матрицы. Для достижения этого, этот процесс охватывает в течение нескольких дней. Для различных типов тканей18были предложены многие процессы decellularization, и в этой статье описывается протокол для decellularization хряща. В этом протоколе это, однако, необходимо сл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.

Благодарности

Авторы хотели бы признать W. загрузки для помощи в производстве подмостей. K.E.M. Трубогибы поддерживается Alexandre Suerman обладательница от Медицинский центр университета. Р. Левато и J. Malda поддерживаются Голландский фонд артрит (грантовые соглашения CO-14-1-001 и ТОО-12, соответственно).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Трупный суставЭто может быть получено в качестве материала для отдыха у местного мясника или ветеринарного центра.
Стерильный фосфатно-солевой буфер (PBS)
Пенициллин-стрептомицинGibco15140
Амфотерицин BThermo Fischer Scientific15290026
жидкий азот
Трипсин-ЭДТА (0,25%), фенол красныйThermo Fischer Scientific25200072
Tris-HCl pH 7,5
Дезоксирибонуклеаза I из поджелудочной железы крупного рогатого скотаSigma-AldrichDN25
Рибонуклеаза A из поджелудочной железы крупного рогатого скотаSigma-AldrichR6513
Triton X-100 (октоксинол-1)Sigma-AldrichX100
ПапаинSigma-AldrichP3125
Дигидрат цитрата тринатрия дигидратSigma-AldrichS4641
АльгинатСигма-Олдрич180947
формалин
CaCl2
этанол
Ксилолпарафин
ЭтиленоксидSynergy Health, Венло, Нидерланды
Мультипотентные стромальные клетки/хондроциты из донорскихМСК и хондроцитов могут быть выделены из донорских суставов, которые являются материалом покоя, поступающими из местного мясника или ветеринарного центра.
MEM alphaThermo Fischer Scientific22561
L-аскорбиновая кислота 2-фосфатSigma-AldrichA8960
DMEMThermo Fischer Scientific41965
Термоинактивированный бычий сывороточный альбуминSigma-Aldrich10735086001
фактор роста фибробластов-2 (FGF-2)R & D Systems233-FB
набор для количественного определения ДНК (Quant-iT PicoGreen dsDNA Reagent)Thermo Fischer ScientificP7581
1,9-диметил-метилен синий хлорид цинка двойная сольSigma-Aldrich341088
Сублимационная сушилкаSALMENKIPPALPHA 1-2 LD plus
Аналитическая мельницаIKAA 11 основная
ступка/пестикHaldenwanger 55/0A Роликовая
пластинаCATRM5
Центрифуга (для пробирок 50 мл)Eppendorf5810R
Капсула (цилиндрическая форма)TAAB8 мм плоская
Superlite S UVLumatec2001AV
Инкубатор
Микротом
Сито (размер ячеек 0,71 мм)VWR34111229
Скальпель
Держатель
Маленький ковш
лошадей, скальпеля

Ссылки

  1. Dunlop, D. D., et al. Risk factors for functional decline in older adults with arthritis. Arthritis and rheumatism. 52 (4), 1274-1282 (2005).
  2. Fitzpatrick, K., Tokish, J. M. A military perspective to articular cartilage defects. The journal of knee surgery. 24 (3), 159-166 (2011).
  3. Flanigan, D. C., Harris, J. D., Trinh, T. Q., Siston, R. A., Brophy, R. H. Prevalence of chondral defects in athletes' knees: a systematic review. Medicine and science in sports and exercise. 42 (10), 1795-1801 (2010).
  4. Martel-Pelletier, J., Boileau, C., Pelletier, J. P., Roughley, P. J. Cartilage in normal and osteoarthritis conditions. Best practice & research. Clinical rheumatology. 22 (2), 351-384 (2008).
  5. Vinatier, C., et al. Cartilage tissue engineering: towards a biomaterial-assisted mesenchymal stem cell therapy. Current stem cell research & therapy. 4 (4), 318-329 (2009).
  6. Taylor, D. A., Sampaio, L. C., Ferdous, Z., Gobin, A. S., Taite, L. J. Decellularized matrices in regenerative medicine. Acta biomaterialia. 74, 74-89 (2018).
  7. Vashi, C. Clinical Outcomes for Breast Cancer Patients Undergoing Mastectomy and Reconstruction with Use of DermACELL, a Sterile, Room Temperature Acellular Dermal Matrix. Plastic Surgery International. 2014 (704323), 1-7 (2014).
  8. Satterwhite, T. S., et al. Abdominal wall reconstruction with dual layer cross-linked porcine dermal xenograft: the "Pork Sandwich" herniorraphy. Journal of plastic, reconstructive & aesthetic surgery : JPRAS. 65 (3), 333-341 (2012).
  9. Martinello, T., et al. Successful recellularization of human tendon scaffolds using adipose-derived mesenchymal stem cells and collagen gel. Journal of tissue engineering and regenerative medicine. 8 (8), 612-619 (2014).
  10. Benders, K. E., et al. Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration. Trends in biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).
  11. Benders, K. E., et al. Multipotent Stromal Cells Outperform Chondrocytes on Cartilage-Derived Matrix Scaffolds. Cartilage. 5 (4), 221-230 (2014).
  12. Gawlitta, D., et al. Decellularized cartilage-derived matrix as substrate for endochondral bone regeneration. Tissue engineering. Part A. 21 (3-4), 694-703 (2015).
  13. Yang, Z., et al. Fabrication and repair of cartilage defects with a novel acellular cartilage matrix scaffold. Tissue engineering. Part C, Methods. 16 (5), 865-876 (2010).
  14. Pittenger, M. F., et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 284 (5411), 143-147 (1999).
  15. Meyer, S. R., et al. Decellularization reduces the immune response to aortic valve allografts in the rat. The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 130 (2), 469-476 (2005).
  16. Brown, B. N., Valentin, J. E., Stewart-Akers, A. M., McCabe, G. P., Badylak, S. F. Macrophage phenotype and remodeling outcomes in response to biologic scaffolds with and without a cellular component. Biomaterials. 30 (8), 1482-1491 (2009).
  17. Keane, T. J., Londono, R., Turner, N. J., Badylak, S. F. Consequences of ineffective decellularization of biologic scaffolds on the host response. Biomaterials. 33 (6), 1771-1781 (2012).
  18. Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. An overview of tissue and whole organ decellularization. Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).
  19. Malda, J., et al. Of mice, men and elephants: the relation between articular cartilage thickness and body mass. PloS One. 8 (2), e57683(2013).
  20. Malda, J., et al. Comparative study of depth-dependent characteristics of equine and human osteochondral tissue from the medial and lateral femoral condyles. Osteoarthritis and Cartilage. 20 (10), 1147-1151 (2012).
  21. Londono, R., Badylak, S. F. Biologic scaffolds for regenerative medicine: mechanisms of in vivo remodeling. Annals of biomedical engineering. 43 (3), 577-592 (2015).
  22. Gilbert, T. W. Strategies for tissue and organ decellularization. Journal of cellular biochemistry. 113 (7), 2217-2222 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Изготовление подмостей Decellularized хряща производные матрица
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.