Визуализация 3D белой жировой ткани структуры, с помощью окрашивания целом гора

Summary

В центре внимания настоящего исследования заключается в демонстрации целом гора иммуноокрашивания и визуализации метод как метод идеально подходит для 3D визуализация архитектуры и сотовых составляющей жировой ткани.

Abstract

Жировой ткани является важным органом метаболизма с высокой пластичностью и реагировать на экологические стимулы и питательный статус. Таким образом были разработаны различные методы для изучения морфологии и биологии жировой ткани. Однако обычные визуализации методы ограничены к изучению ткани в 2D разрезах, сумев захватить 3D архитектура весь орган. Здесь мы представляем в целом гора окрашивание, иммуногистохимия метод, который сохраняет нетронутыми жировой ткани морфология с минимальной обработки шагов. Следовательно без искажений, достижение наиболее представительных 3D визуализации тканей поддерживаются структуры адипоциты и других клеточных компонентов. Кроме того всего гора пятнать может сочетаться с линии методы трассировки для определения решения судьбы клетки. Однако этот метод имеет некоторые ограничения для предоставления точной информации в отношении более глубоких частях жировой ткани. Чтобы преодолеть это ограничение, окрашивание всей гора далее комбинируется с ткани, очистка методов для удаления непрозрачность ткани и полная визуализация анатомии всей жировой ткани с помощью флуоресцентной микроскопии свет лист. Таким образом более высокое разрешение и более точное представление о жировой ткани структуры могут быть захвачены с сочетанием этих методов.

Introduction

Жировой ткани является важным органом для хранения энергии и характеризуется динамической перепланировка и практически неограниченного расширения¹. Помимо энергетического гомеостаза жировой ткани также играет важную роль в секреции гормона из более чем 50 адипокинов чтобы модулировать всего тела метаболические функции². Жировая ткань имеет различные архитектуры, состоящий из различных типов клеток, включая пожилые адипоциты, фибробласты, эндотелиальные клетки, иммунные клетки и Адипоцит прогениторных клеток³. Недавние исследования показали, что ожирение и другие метаболические дисфункции может зна....

Protocol

Все экспериментальных животных протоколы были утверждены Комитетом животное уход центр для Phenogenomics (TCP), соответствует стандартам Канадского совета по лечению животных. Мыши были на 12-h свет/темно циклов и обеспечен свободный доступ к воде и пище. 7 месяцев старых самцов мышей C57BL/6J были использованы в целом гора окрашивание эксперимент.

Примечание: Разделы 1-2 находятся в хронологическом порядке, с разделом 3 является необязательный шаг сразу после раздела 1. Раздел 4 может выполняться для анализа плотности Адипоцит размер и кровеносных сосудов после завершения раздела 2.

1. Подготовка материалов и ткан....

Results

Из-за хрупкости жировой ткани методы с участием нескольких шагов обработки и секционирование может привести к disfigurement жировой ткани морфология³ (рис. 1A). Однако всего гора пятнать может сохранить морфология адипоциты, обеспечение точной интерпретации результатов (рис. 1B).

Чрезмерной фиксации жировой ткани приводит к фиксатором индуцированной аутофлюоресценция. Как показано на рисунк.......

Discussion

Хотя обычные методы, такие как cryosection и гистологии предлагают преимущества для наблюдения за внутриклеточные структуры, окрашивание всей гора предоставляет различные перспективы в исследованиях жировой ткани, что позволяет 3D визуализация сотовой связи Архитектура минимально обработанные ткани.

Для того, чтобы успешно выполнить всего гора окрашивание, следует учитывать следующие рекомендации. Различные жировой ткани складов может принести различные иммуноокрашивания результаты; Таким обра.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
LipidTox	Life Technologies	H34477
PECAM-1 первичное антитело	Millipore	MAB1398Z(CH)
TH (тирозингидроксилаза) первичное антитело	Millipore	AB152, AB1542
DAPI окрашивание	BD Pharmingen	564907
конфокальный микроскоп Nikon A1R	Конфокальный микроскоп	Nikon
Ультрамикроскоп I	LaVision BioTec		Light sheet image флуоресцентный микроскоп
Alexa Fluor вторичные антитела	Jackson ImmunoResearch		Длины волн 488, 594 и 647 используемые
очищенные крысы Anti-Mouse CD16/CD32	BioSciences	553141
дихлорметаном	Sigma-Aldrich	270997
дибензил-эфиром	Sigma-Aldrich	33630
Метанол	Fisher Chemical	A452-1
30% Перекись водорода	BIO BASIC CANADA INC	HC4060
Диметилсульфоксид (ДМСО)	Sigma-Aldrich	D2650
Глицин	Sigma-Aldrich	J7126
Гепарин	Sigma-Aldrich	H3393
Лектин набор I, флуоресцеин с маркировкой	VECTOR LABORATORIES	FLK-2100
F4/80	Bio-Rad	MCA497GA
VECTASHIELD Hard Set Монтажная среда с DAPI	VECTOR LABORATORIES	H-1500
Параформальдегид (PFA)
Фосфатный буферный раствор (PBS)
Тритон-X
Твин
Сыворотка для животных (козлят, осел)