Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Создание линий клеток, экспрессирующих DR3 оценить ответ Apoptotic анти митотическая терапии

6.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58705

⸱

11 января 2019 г.

 ,  ,  , 
1School of Pharmaceutical Sciences, Tsinghua University, 2Department of Radiology, University of California, San Francisco, 3Beijing Advanced Innovation Center for Structural Biology

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Создание стабильной клеточная линия, экспрессирующих ген интереса для изучения функции гена могут быть сделаны стабильной трансфекции рудоразборка одного клонов после transfecting их через ретровирусной инфекции. Здесь мы покажем, что HT29-DR3 клеточных линий, созданных таким образом выяснить какой смертью рецептор 3 (DR3) способствует antimitotics индуцированного апоптоза механизмов.

Аннотация

Изучая функции гена интереса может быть достиган манипулирования ее уровень выражения, например сокращения его выражение с нокдаун клеточных линий или увеличения его выражение с гиперэкспрессия клеточных линий. Переходных и стабильной трансфекции являются два метода, которые часто используются для выражения экзогенных генов. Переходных трансфекции полезен только для краткосрочных выражение, тогда как стабильная трансфекции позволяет экзогенных генов быть интегрированы в геном клетки принимающей где он будет выражаться непрерывно. В результате стабильной transfection обычно используется для исследования в долгосрочной генетического регулирования. Здесь мы опишем простой протокол для создания строки стабильной клеток, экспрессирующих Помеченный смертью рецептор 3 (DR3) для изучения DR3 функции. Мы выбрали один клонов после ретровирусной инфекции для поддержания однородности и чистоты стабильных клеточных линий. Стабильных клеточных линий, созданных с помощью этого протокола оказывают DR3-недостаточным HT29 клеток чувствительных к antimitotic препаратам, таким образом воссоздания апоптотической реакции в HT29 клетках. Кроме того тег флаг на DR3 компенсирует отсутствие хороших DR3 антитела и облегчает биохимические исследования молекулярный механизм, по которому antimitotic агентов индуцировать апоптоз.

Введение

Экспрессии гетерологичных генов часто используется для изучения функции генов интерес. Два метода, переходных и стабильной трансфекции, преимущественно используются в клетки и молекулярной биологии для вставки сегмент ДНК или РНК в принимающей ячейки1,2. Временно transfected ДНК или РНК не может быть передана дочь клетки, поэтому генетические изменения могут храниться только на короткий период времени. С другой стороны в стабильно transfected клеток, экзогенных генов интегрированы в геном клетки хост, поддержания ее выражение в ячейку строки. Таким образом стабильной трансфекции является метод, который обычно резервируется для исследования долгосрочных генетического регулирования. Стабильные клеток линии также могут быть трансплантированы, как ксенотрасплантатов в модели мыши в vivo исследования3. Трансфекция стабильная можно разделить на две категории: вирусные и синцитиального. По сравнению с синцитиального трансфекции, вирусные инфекции могут передавать гены в более широкий спектр человеческих клеток с более высокой эффективности4,5,6,7. Кроме того стабильные клеточная линия от одного клона предлагает преимущество клоновых чистоты и однородности.

Неконтролируемое клеточный рост и деление являются наиболее отличительные черты рака. В клинических условиях antimitotic агенты являются первичного лечения для многих типов опухолей8. Однако нельзя игнорировать некоторые существенные ограничения antimitotic агентов. Во-первых эти химиотерапии может убить нормальные клетки вместе с нежелательным раковых клеток и, таким образом, может привести к серьезным побочным эффектам8. Во-вторых, антитубулиновые наркотики не являются эффективными против всех типов опухолей, несмотря на повсеместно тубулина в выражение в широкий спектр различных тканей как белок цитоскелета9,10. Неясно, почему антитубулиновые агентов показали многообещающие эффективность против яичников, лёгких и гематологические опухоли в клинического лечения, но не в почки, толстой кишки или рак поджелудочной11. Наконец даже пациенты с тем же типом опухоли может реагировать на antimitotics по-разному непредсказуемым образом. Там может быть ключевым эффекторные молекулы, которая влияет на чувствительность разных пациентов antimitotic агентов, что приводит к различных результатов, видели в клинического лечения12. Таким образом потенциальные дифференциального чувствительности больных к antimitotic лечению должны учитываться для того чтобы оптимизировать терапевтических вмешательств13.

Экран Библиотека высок объём всего генома siRNA продемонстрировал, что DR3 нокдаун может сделать чувствительные клетки устойчивы к antimitotic препаратам, подразумевающие роль для DR3 в химиотерапии индуцированного апоптоза14. Будучи членом надсемейства фактор некроза опухоли рецепторов (TNFR) сообщалось DR3 посредником апоптоз клеток в различных системах15,16,17,18. Таким образом мы отправились для установления стабильных клеточных линий, экспрессирующих DR3 изучение молекулярных механизмов, которые antimitotic наркотиков индуцировать апоптоз. Соответствующие ячейки модель для изучения DR3 гиперэкспрессия может обеспечиваться линии клетки рака толстой кишки человека HT29, который оказался DR3-недостаточным. Кроме того, в клинике рака толстой кишки не чувствительны к antimitotic препараты19.

В этой статье мы описываем метод, который позволяет генерировать стабильные клеточной линии HT29-DR3 через ретровирусной инфекции. Далее мы покажем, как проверить DR3 выражение в этих клетках, используя Западный blotting и как оценить чувствительность к antimitotic агентов, используя assay жизнеспособности клетки и морфологических наблюдения. Клетки усиливаются от одного клонов и, таким образом, имеют преимущество однородной генетический фон. Кроме того флаг метки на DR3 допускается для визуализации клеточных DR3 микроскопии и анализа взаимодействия выражения и белка гена путем биохимических подходов. Кроме того клетки может быть xenografted в мышах для дальнейшего анализа опухолевой прогрессии в ответ на antimitotics в vivo14.

Система HT29-DR3 клеток, представленные здесь предложили эффективным инструментом для изучения молекулярных механизмов как antimitotics убить клетки рака14. Поскольку общие инструменты для изучения функции гена гиперэкспрессия и бросовым клеточных линий, этот протокол можно легко адаптировать для других генов интерес или другие клеточные линии и, таким образом, превратилась в широко используется подход.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Пожалуйста, обратите внимание, что все мыши эксперименты, описанные здесь были утверждены и осуществляются в соответствии с институциональной животное уход и использование Комитет (IACUC) в Университете Цинхуа.

1. поколение DR3 гиперэкспрессия клеточных линий

  1. Построить плазмида DR3 выражение (pMXs-IRES-DR3-флаг), вставив полнометражного DR3 cDNA с 3 x флаг в C-terminus в антиретровирусной вектор pMXs-IRES-Blasticidin в места ограничения BamHI/XhoI.
  2. Рост клеток Plat-A блюдах 60 мм с 4 мл среды Дульбекко изменение орла (DMEM). На следующий день, когда клетки достигают 80% - 90% слияния, transfect клетки с 2 мкг плазмида pMXs-IRES-DR3-флага с помощью трансфекции реагента (см. Таблицу материалы) по данным производителя ручной20.
  3. После 72 ч собирать супернатанта, фильтрата СМИ, используя фильтр 0,45 мкм стерильным и держать вирусный подвеска в темноте при 4 ° C.
  4. Рост HT29 клеток в среде DMEM в блюдо 60 мм и инкубации клеток при 37 ° C с 5% CO2.
  5. На следующий день, когда клетки достигают 30% - 50% слияния, заразить клетки с 2 мл вирусных подвеска присутствии 8 мкг 1,5-диметил-1,5-diazaundecamethylene polymethobromide на миллилитр вирусных подвески. После 4-6 ч инкубации при 37 ° C аспирационная вирусный подвеска, добавить 4 мл свежего DMEM и возвращение блюдо в инкубаторе.
  6. Отменить СМИ от 24 h postinfection блюда и тщательно вымыть клетки с 2 мл подогретую PBS. Добавьте 1 mL трипсина-ЭДТА в клетки и инкубировать при 37 ° C на 3 мин.
  7. После наблюдения под микроскопом на 10 крат, что большинство клеток отдельный, остановите trypsinization с 2 мл полной DMEM, содержащие 10% плода бычьим сывороточным (ФБС). Собирать суспензию клеток в 15 мл трубку и центрифуги клетки на 200 x g 5 мин при комнатной температуре (RT).
  8. Удалить супернатант и Ресуспензируйте Пелле клеток в 10 мл DMEM. Смешайте хорошо аккуратно закупорить вверх и вниз. Разбавьте клетки факторами 30, 100 и 300. Заполнение ячеек в 150 мм блюда с 20 мл DMEM, содержащие 1 мкг/мл blasticidin. Инкубируйте на 37 ° C инкубатор с 5% CO2 ~ 1-2 недели.
  9. В этот период наблюдать колонии каждый день с инвертированным микроскопом при 10-кратном. Марк хорошо изолированные колонии в нижней части блюдо, когда колонии диаметр составляет около 1-2 мм.
  10. Аспирационная среднего и вымыть клетки с 3 мл подогретым PBS. Добавьте 2 миллилитров трипсина-ЭДТА в блюдо 60 мм. Используйте стерильный пинцет, чтобы забрать газобетона стерильные клонирования цилиндров и поместите их в блюдо 60 мм. Подобрать баллоны, содержащие трипсина ЭДТА и аккуратно разместить их над помеченной колоний. Убедитесь, что каждый клонирования цилиндра только содержит один из колонии и избежать загрязнения с близлежащих колоний.
  11. Возвращение блюдо в инкубатор на 3 минуты.
  12. После 3 минут Проверьте клетки под микроскопом при 10-кратном чтобы увидеть ли они отдельный. Когда клетки подняты, добавьте 70 мкл питательной среды для каждого цилиндра, чтобы инактивировать трипсина. Аккуратно перемешать суспензию клеток с 200 мкл пипетки. Убедитесь в том, не для перемещения баллона в ходе этого процесса.
  13. Передать суспензию клеток от каждой колонии двух 24-ну пластин, содержащие 1 мл DMEM на хорошо. Добавить 30 мкл суспензии клеток в колодец в пластине A и 70 мкл в соответствующем скважин в пластине B. Label пластины правильно и положить их обратно в инкубаторе.

2. Проверка DR3 гиперэкспрессия клеточной линии

  1. Когда клетки в плита B при впадении в 90%, удалите средства массовой информации и тщательно вымыть клетки с 1 мл раствора PBS. Полностью удалить PBS и лизировать клетки с 50 мкл 1 x SDS-PAGE загрузки буфера. Передача lysates клетки от 24-ну пластины для 1.5 мл пробирок и варить образцы для 10 минут при 100 ° C.
  2. Выполнение примеров на 10%, натрия Додециловый сульфат (SDS) гель при постоянном напряжении от 80 V для 15 мин и, затем, на 120 V на 1 ч.
  3. Передать винилидена фторида (PVDF) мембраны белка мокрых переводом в постоянный ток 400 мА 2 h.
  4. Тестовое выражение DR3 в различных клонов с антитела анти флаг, используя одичал тип HT29 клетки как отрицательный контроль (рис. 1). Разбавить Ослабленный первичный гуморальный фактор 5000 в 5% обезжиренное молоко, которое растворяется в TBST (трис буфер солевой раствор, содержащий 0.1% Tween-20). Проинкубируйте мембрану с флагом антитела на 4 ° C на ночь.
  5. Промойте мембрану с TBST, встряхивая его на decoloring шейкер на 200 об/мин на RT. Refresh TBST каждые 5 минут в общей сложности, мытье время 15 мин.
  6. Проинкубируйте мембрану с вторичного антитела анти мыши разбавленным с коэффициентом 10 000 в 5% обезжиренное молоко при температуре 4 ° C для 5-6 ч.
  7. Промойте мембрану снова, как описано в шаге 2.5.
  8. Обнаруживать флаг выражение с использованием западных увеличенная хемолюминесценция (ЭСЛ) субстрата и изображение мембраны с гель системы документации (см. Таблицу материалы). Идентифицировать клоны, выражая DR3 как положительные клонов.
  9. Передача клонов в плиты A, которые соответствуют позитивным клоны в плита B к пластине 6-Ну и продолжать усиливать клетки до их выращивания в 10 см блюд. Сделать замороженные запасы клеток, растущих из clones позитивные и хранить их в-80 ° C для использования в будущем.

3. Оценка ответа Apoptotic клеток Antimitotic агентов

Примечание: Diazonamide является новый класс морской натуральный продукт, который имеет замечательную деятельность в подавлении рост раковых клеток, которая отражает других дестабилизирующих тубулин агентов21. Однако его режим действий остается неясным. Для тестирования клеточный ответ клеток antimitotic агентам, паклитаксел и diazonamide были использованы для лечения одичал типа HT29 и HT29-DR3 ячейки. Наркотики были растворяют в диметилсульфоксида (ДМСО) чтобы сделать 10 мм запасов и, затем, далее разводят в различных концентрациях: 30 Нм, 100 Нм, 300 Нм, 1000 Нм, 3000 Нм и 10 000 Нм в ДМСО.

  1. Соберите HT29 и HT29-DR3 клетки trypsinization. Измерьте плотность клеток, используя счетчик автоматическое клеток. Затем семена клетки в 12-ну пластины в среде DMEM на плотности 3 х 104 клетки на хорошо. На следующий день добавьте 10 Нм diazonamide и использовать 1% ДМСО в качестве отрицательного контроля. После 48 часов лечения изображение клетки под микроскопом при 10-кратном (рис. 2).
  2. Семена HT29 и HT29-DR3 клетки в 96-луночных пластины в среде DMEM на плотности 3 x 103 клеток / Ну и дать им возможность расти на ночь при 37 ° C. Затем, добавьте эскалации дозы diazonamide концентрации 0,3 Нм, 1 Нм, 3 Нм, 10 Нм, 30 Нм и 100 Нм для каждой скважины, используя 1% ДМСО в качестве отрицательного контроля.
  3. После 48 часов лечения измерения жизнеспособности клеток с использованием комплекта пробирного жизнеспособность клеток на основе свечения согласно инструкции производителя.
    1. Вынуть пластину 96-луночных из инкубатора и пусть он стоять на RT приблизительно 30 мин. Затем добавьте 50 мкл пробирного реагентов для каждой скважины, встряхнуть пластину в РТ за 2 мин до Лизируйте клетки и инкубировать на табличке на RT еще 10 минут определить люминесценции каждой скважины с помощью читатель (рис. 3) микропланшетов.
      Примечание: Жизнеспособность клеток представляет относительный люминесценции интенсивности каждого хорошо хорошо элемента управления обрабатывают 1% ДМСО.
  4. Используйте шесть недель старая женщина BALB/c обнаженной мышей в vivo исследования14.
    Примечание: Мышей были сохранены при определенных условиях возбудителя бесплатно.
    1. Trypsinize HT29 и HT29-DR3 клеток и, затем, остановить trypsinization, с помощью DMEM подогретую при 37 ° C. Собирать суспензию клеток в 50 мл трубки и центрифуги клетки на 1000 об/мин за 10 мин на RT. удалить супернатант и Ресуспензируйте Пелле клеток в среде DMEM без FBS. Центрифуга клетки снова и Ресуспензируйте Пелле клеток в PBS.
    2. Подсчитать ячейки, используя счетчик автоматическое клеток и разбавленных клетки к концентрации 2,5 x 107 кл/мл с помощью PBS. Генерировать опухоли через подкожные инъекции 200 мкл суспензии клеток HT29 или HT29-DR3 на правом фланге каждой мыши (5 х 106 клеток/мышь)22.
    3. Измерьте объем опухоли (ТВ), при помощи штангенциркуля каждые 2 d после трансплантации. Рассчитать телевизора с помощью следующей формулы: TV = 1 / 2L x W x W (здесь, W: ширина опухоли, L: длина опухоли). Когда объем средняя опухоль достигает около 100 мм3, рандомизировать мышей в элементе управления или обрабатываемой группы (n = 6 для каждой группы) и начать лечение.
    4. Готовят раствор паклитаксел следующим образом. Во-первых, распустить паклитаксел полностью в этанол на 5% от общего объема, а затем, добавить 5% от окончательного объема polyoxyl 35 гидрогенизированное касторовое масло. Наконец, составляют оставшиеся 90% от объема с D5W (5% декстрозы в воде, рН 7,4).
    5. Придать паклитаксел внутривенно в дозе 20 мг/кг 3 раза в неделю в течение двух недель. Измерьте опухоли объем и вес тела 3 x неделю14. Прекратить эксперимент и усыпить животных, если вес тела уменьшается на 20% или объем опухоли достигает около 2000 мм3.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Характеристика HT29 клеток, стабильно выражая DR3 показан на рисунке 1. Клоны выражают различные уровни DR3, в то время как одичал тип клеток, которые служат в качестве отрицательного контроля, не показывать экспрессии экзогенных генов. Здесь мы показываем только пять клоны, среди которых клонировать 1 и 5 выражают высокий уровень DR3. Мы выбрали клон 1 и 5 для следующих экспериментов.

Морфология HT...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этой рукописи мы описываем метод для создания HT29-DR3 стабильных клеточных линий. HT29-DR3 клетки обеспечивают модель для изучения молекулярных механизмов, которыми DR3 способствует апоптоз, antimitotic агентов. Этот подход является универсальным и повторяемости. Для обеспечения успеха процедуры, четыре ключевые шаги протокола должны рассматриваться. Во-первых для того чтобы произвести высокий достаточно титр вируса, рекомендуется выполнять трансфекции ДНК, когда клетки Plat-A при впадении в 80-90%. Во-вторых вирусный...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего объявить.

Благодарности

Эта работа была поддержана от грантов 53110000117 (чтобы G.W.) и 043222019 (для X.W.) из университета Цинхуа.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
DMEMInvitrogenC11965500BTс добавлением 10% FBS и 1% пеницилина/стрептомицина
Анализ жизнеспособности люминесцентных клетокPromegaG7571
PaclitaxelSelleckS1150
pMXs-IRES-BlasicidinCell BiolabsRTV-016
ДиметилсульфоксидSigmaD2650
PBSInvitrogenC14190500BT
Trypsin-EDTA (0.25%)Invitrogen25200056
1,5-диметил-1,5-диазаундекметиленполиметобромидSanta Cruzsc-134220
  Реагент для трансфекцииPromegaE2311
Антитело против мыши вторичное антителоJackson ImmumoResearch115-035-166
антитело против флагаSigmaF-3165
HT29 клеточная линияATCCHTB-38
plat-A клеточная линияCell BiolabsRV-102
PVDF Immobilon-PMilliporeIPVH00010
Цилиндр для клонированияSigmaC1059
Многорежимный считыватель для визуализации клетокBiotekBTCYT3MV
CKX53 Инвертированный микроскопOlympusCKX53
12-луночные планшеты для клеточных культурГнездо712001
60 мм Планшеты для клеточных культурГнездо705001
15 мл центрифужные пробиркиNest
0,22 m стерильный фильтрMilliporeSLGP033RB
Centrifuge 5810 REppendorf5810000327
96 Well White Polystyrene Microplate Подложка Corning3903
Western ECLBIO-RAD1705060
ImageQuant LAS 4000GE HealthcareImageQuant LAS 4000 
Обесцвечивающий шейкерHINOTECHTS-2000A
BlasticidinInvivoGenant-bl-1
Автоматический счетчик клетокBIO-RADTC 20
Opti-MEM I Уменьшенная сыворотка MediumThermo Fisher31985070
601052

Ссылки

  1. Kim, T. K., Eberwine, J. H. Mammalian cell transfection: the present and the future. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 397 (8), 3173-3178 (2010).
  2. Recillas-Targa, F. Multiple strategies for gene transfer, expression, knockdown, and chromatin influence in mammalian cell lines and transgenic animals. Molecular Biotechnology. 34 (3), 337-354 (2006).
  3. Daley, G. Q. Animal models of BCR/ABL-induced leukemias. Leukemia & Lymphoma. 11, 57-60 (1993).
  4. Hacein-Bey-Abina, S., et al. Sustained correction of X-linked severe combined immunodeficiency by ex vivo gene therapy. The New England. Journal of Medicine. 346 (16), 1185-1193 (2002).
  5. Roesler, J., et al. Third-generation, self-inactivating gp91(phox) lentivector corrects the oxidase defect in NOD/SCID mouse-repopulating peripheral blood-mobilized CD34+ cells from patients with X-linked chronic granulomatous disease. Blood. 100 (13), 4381-4390 (2002).
  6. Russell, W. C. Update on adenovirus and its vectors. Journal of General Virology. 81 (Pt 11), 2573-2604 (2000).
  7. Wasala, N. B., Shin, J. H., Duan, D. The evolution of heart gene delivery vectors. The Journal of Gene Medicine. 13 (10), 557-565 (2011).
  8. Zhou, J., Giannakakou, P. Targeting microtubules for cancer chemotherapy. Current Medicinal Chemistry - Anti-Cancer Agents. 5 (1), 65-71 (2005).
  9. Rovini, A., Savry, A., Braguer, D., Carre, M. Microtubule-targeted agents: when mitochondria become essential to chemotherapy. Biochimica et Biophysica Acta. 1807 (6), 679-688 (2011).
  10. Bhalla, K. N. Microtubule-targeted anticancer agents and apoptosis. Oncogene. 22 (56), 9075-9086 (2003).
  11. Jordan, M. A., Wilson, L. Microtubules as a target for anticancer drugs. Nature Reviews Cancer. 4 (4), 253-265 (2004).
  12. Bhat, K. M., Setaluri, V. Microtubule-associated proteins as targets in cancer chemotherapy. Clinical Cancer Research. 13 (10), 2849-2854 (2007).
  13. Bates, D., Eastman, A. Microtubule destabilising agents: far more than just antimitotic anticancer drugs. British Journal of Clinical Pharmacology. 83 (2), 255-268 (2017).
  14. Qi, C., et al. Anti-mitotic chemotherapeutics promote apoptosis through TL1A-activated death receptor 3 in cancer cells. Cell Research. 28 (5), 544-555 (2018).
  15. Marsters, S. A., et al. Apo-3, a new member of the tumor necrosis factor receptor family, contains a death domain and activates apoptosis and NF-kappa B. Current Biology. 6 (12), 1669-1676 (1996).
  16. Chinnaiyan, A. M., et al. Signal transduction by DR3, a death domain-containing receptor related to TNFR-1 and CD95. Science. 274 (5289), 990-992 (1996).
  17. Xu, L. X., et al. Death receptor 3 mediates TNFSF15- and TNFalpha-induced endothelial cell apoptosis. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 55, 109-118 (2014).
  18. Wen, L., Zhuang, L., Luo, X., Wei, P. TL1A-induced NF-kappaB activation and c-IAP2 production prevent DR3-mediated apoptosis in TF-1 cells. Journal of Biological Chemistry. 278 (40), 39251-39258 (2003).
  19. Nakayama, M., et al. Multiple pathways of TWEAK-induced cell death. Journal of Immunology. 168 (2), 734-743 (2002).
  20. Kitamura, T., et al. Retrovirus-mediated gene transfer and expression cloning: powerful tools in functional genomics. Experimental Hematology. 31 (11), 1007-1014 (2003).
  21. Wang, G., Shang, L., Burgett, A. W., Harran, P. G., Wang, X. Diazonamide toxins reveal an unexpected function for ornithine delta-amino transferase in mitotic cell division. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (7), 2068-2073 (2007).
  22. Hassan, M. S., von Holzen, U. Animal Model: Xenograft Mouse Models in Esophageal Adenocarcinoma. Methods in Molecular Biology. , 151-164 (2018).
  23. Potter, H., Heller, R. Transfection by electroporation. Current Protocols in Molecular Biology. , Chapter 9, Unit9 3 (2010).
  24. Jacobsen, L., Calvin, S., Lobenhofer, E. Transcriptional effects of transfection: the potential for misinterpretation of gene expression data generated from transiently transfected cells. Biotechniques. 47 (1), 617-624 (2009).
  25. Hagen, L., Sharma, A., Aas, P. A., Slupphaug, G. Off-target responses in the HeLa proteome subsequent to transient plasmid-mediated transfection. Biochimica et Biophysica Acta. 1854 (1), 84-90 (2015).
  26. Omidi, Y., et al. Microarray analysis of the toxicogenomics and the genotoxic potential of a cationic lipid-based gene delivery nanosystem in human alveolar epithelial a549 cells. Toxicology Mechanisms and Methods. 18 (4), 369-378 (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

DR3 FLAGHT29
Создание линий клеток, экспрессирующих DR3 оценить ответ Apoptotic анти митотическая терапии
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.