Здесь мы представляем протокол для получения стромальные сосудистой дроби от жировой ткани через ряд механических процессов, которые включают эмульгирования и несколько centrifugations.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Механический микронизации Lipoaspirates для восстановительной терапии
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Стромальные сосудистой дроби (СФДВ) стал регенеративной инструментом для различных заболеваний; Однако законодательство строго регулирует клинического применения клеточных продуктов с помощью коллагеназы. Здесь мы представляем протокол для создания инъекционные смеси СФДВ клеток и родной внеклеточная матрица из жировой ткани, чисто механического процесса. Lipoaspirates поместить в центрифуге и вращаться на 1200 x g на 3 мин. Средний слой собираются и разделены на два слоя (плотностью внизу) и низкой плотностью жиров на вершине. Верхний слой непосредственно эмульгированных переключив intersyringe, со скоростью 20 мл/сек для 6 x до 8 x. Эмульгированные жиры центрифугируют в 2000 x g на 3 мин, липкое вещество под слоем нефти является сбор и определяется как внеклеточного матрикса (ECM) / SVF-гель. Масло в верхнем слое собирается. Примерно в 5 мл масла добавляется 15 мл высокой плотности жира и эмульгированных переключив intersyringe, со скоростью 20 мл/сек для 6 x до 8 x. Эмульгированные жиры центрифугируют в 2000 x g на 3 мин, и липкое вещество также ECM/SVF-гель. После пересадки ECM/SVF-гель в обнаженной мышей трансплантат собирают и оценены гистологическое обследование. Результат показывает, что этот продукт имеет потенциал, чтобы восстановить в нормальных жировой ткани. Эта процедура не является процедурой простые, эффективные механические диссоциации уплотнить клетки СФДВ, встроенный в их естественной поддержки ECM для восстановительных целей.
Введение
Стволовых клеток лечение обеспечивают парадигмы для восстановления тканей и регенерации, так что они могут предложить альтернативные терапевтический режим для различных заболеваний1. Стволовые клетки (например, индуцированных плюрипотентных стволовых клеток и эмбриональных стволовых клеток) имеют большой лечебный потенциал, но ограничены из-за регулирования клеток и этических соображений. Жировой производные мезенхимальных стромальных/стволовые клетки (ИСС) легко получить от lipoaspirates и не подлежат тем же ограничениям; Таким образом он стал тип ячейки для практической восстановительной медицины2. Кроме того ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Это исследование был одобрен этические Наблюдательный Совет в больнице Nanfang, Гуанчжоу, Китай. Жировая ткань была собрана из здоровых доноров, которые дал письменное информированное согласие принять участие в исследовании. Все эксперименты на животных были утверждены Nanfang больница институциональных животное уход и использование Комитетом и в соответствии с руководящими принципами национального здравоохранения и медицинских исследований Совета (Китай).
1. Подготовка ECM/SVF-геля
- Урожай жира.
- Выполнения липосакции на человека с 3-мм многопортовые канюли, которая содержит несколько резкий боковые отверстия 1 мм в диаметр....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
После обработки Колман сало ECM/SVF-гель, объем отбрасываются нефти занимает 80% от окончательного объема, и только 20% объема жировой ткани сохранились в слой нефти рассматривается как ECM/SVF-гель (рис. 1А). ECM/SVF-гель имеет гладкую жидкость как текстуру, что позволяет ему пройти через 27 G тонкой иглой; Однако Колман сало состоит из неотъемлемой жировой структуры с большой волокна и может идти только через 18 G канюля (
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
На основе стволовых клеток регенеративной терапии показал большие потенциальные выгоды в различных заболеваний. ИСС являются выдающиеся лечебные кандидатов, потому что они легко получить и имеют потенциал для восстановления тканей и регенерации тканей Роман15. Однако существуют ограничения на расширение его клинического применения, поскольку оно требует сложных процедур для изоляции клетки и коллагеназы для обработки6. Таким образом крайне важно разработать простой метод дл.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Эта работа была поддержана Национальный научный фонд природы Китая (81471881, 81601702, 81671931), фонд естественных наук в провинции Гуандун Китая (2014A030310155), и администратор Nanfang Больница фонда (2014B009, 2015Z002, 2016Z010, 2016B001).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 488-конъюгированный изолектин GS-IB4 | Молекулярные зонды | I21411 | |
| морская свинка антимышиный перилипин | Progen | GP29 | |
| DAPI | Thermofisher | D1306 | |
| пипетка с широким наконечником | Celltreat | 229211B | |
| Конфокальный микроскоп | Leica | TCS SP2 | |
| нюдовый милый | Южный Магический Университет | / | |
| Световой Микроскоп | Olympus | / | |
| 50 мл туба | Cornig | 430828 | |
| стерильный мешок | Laishi | / | |
| microtome | Leica | Центрифуга CM1900 | |
| Heraus |
Ссылки
- Bateman, M. E., et al. Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies. Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).
- Baer, P. C., Geiger, H.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
