Method Article

Оценки вирулентности и патогенез Aeromonas инфекции в Caenorhabditis elegans модели

DOI:

10.3791/58768

⸱

December 20th, 2018

 ,  ,  , 
1Institute of Basic Medical Sciences, College of Medicine, National Cheng Kung University, 2Department of Internal Medicine, National Cheng Kung University Hospital, College of Medicine, National Cheng Kung University, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology, College of Medicine, National Cheng Kung University, 4Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine, National Cheng Kung University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции в C. elegans. Используя эти удобные методы, это легко для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Человеческий патоген Aeromonas было клинически показано, чтобы причинить гастроэнтерита, раневые инфекции, сепсис и мочевыводящих путей. Большинство человеческих заболеваний, как сообщается, быть связаны с четырьмя видами бактерий: Aeromonas dhakensis, аэромонадами hydrophila, Aeromonas veroniiи Aeromonas caviae. Модельный организм Caenorhabditis elegans является bacterivore, который обеспечивает отличную инфекции модель изучить бактериальных патогенеза Aeromonas. Здесь мы представляем три различных экспериментов для изучения Aeromonas инфекции с использованием модели C. elegans , включая выживание, жидкие токсичности и анализов некроз мышц. Результаты трех методов определения вирулентности Aeromonas согласуются. A. dhakensis , было показано, что наиболее токсичных среди 4 основных вида Aeromonas , вызывая клинической инфекции. Эти методы представлены быть удобным способом для оценки токсичности между и внутри Aeromonas видов и способствовать нашему пониманию патогенеза Aeromonas инфекции.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Клинически доказано человеческий патоген, Aeromonas, причинить гастроэнтерита, раневые инфекции, сепсис и мочевых инфекций1,2. Ассоциироваться с четырех бактериальных видов были зарегистрированы наиболее ассоциированных заболеваний человека: Aeromonas dhakensis, аэромонадами hydrophila, Aeromonas veroniiи Aeromonas caviae 2,3 , 4 , 5. среди Aeromonas инфекционные заболевания, инфекции мягких тканей может привести к тяжелой заболе....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка питательной среды

Примечание: См. таблицу 1 для приготовления раствора.

  1. Подготовить M9 средних12, растворяют 1,5 г х2PO4, 5,66 g Na2HPO4и 2,5 г NaCl в 500 мл деионизованной воды. Автоклавированием при температуре 121 ° C в течение 20 минут ждать, пока остынет до комнатной температуры, а затем добавить 0,5 мл 1 М MgSO4 перед первым использованием.
  2. Чтобы подготовить нематоды роста среднего (НГМ)12, Растворите 3 g NaCl, бактериальных Пептон 2.5 g и 20 g агар в 1 Л деионизированной воды. Автоклавированием при ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Следуя протоколы, описанные выше, это легко различать токсичность из четырех Aeromonas штаммов. Выживание пробирного C. elegans показан на рисунке 1. C. elegans инфицированных Aeromonas видов, в порядке от высокой к низкой выживаемости были: A. caviae, A. veronii, A. hydrophila и A. dhakensis. Хотя есть разнообразие с точки зрения токсичности между и внутри Aeromonas видов, выживаемость C. ele.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C. elegans является bacterivorous нематод, что естественно воздухозаборники бактерий как еда и разработал сложный врожденный иммунитет к бактерии в ходе эволюционного процесса. Два главных органов, техническое обслуживание и поддержание иммунитета являются эпидермиса и кишки9,13. Эпидермис и полосы мышц C. elegans напоминают мягких структур в6млекопитающих и человека. Из-за этих характеристик C. elegans применяет.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарны за помощь из фонда основных C. elegans в Тайване и диагностической микробиологии и антимикробной сопротивления лаборатории из национальных Ченг Кунг университетской больницы для предоставления Aeromonas изолирует. Мы также признаем Caenorhabditis центр генетики (CGC) и WormBase. Мы также благодарю Savana Мур для редактирования рукопись.

Это исследование было частично поддерживается грантов от министерства науки и технологий Тайваня (наиболее 105-2628-B-006-017-MY3) и национального Ченг Кунг университетской больницы (NCKUH-10705001) п.л. Чэнь.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Шейкеринкубатор YIH DERLM-570RБактериальная инкубация
K2HPO4J.T.BakerMP021519455Подготовка питательной среды 
KH2PO4J.T.Baker3246-05Подготовка питательной среды 
Na2HPO4J.T.BakerMP021914405Приготовление питательных сред 
NaClSIGMA31434Приготовление питательных сред 
MgSO4SIGMAM7506Приготовление питательной среды 
агарDifco214530Питательная среда приготовление 
CaCl2SIGMAC1016Подготовка питательной среды 
холестеринSIGMAC8503Питательная среда приготовление 
этанолSIGMA32205Приготовление питательной среды 
KOHSIGMAP5958Приготовление питательных сред 
Тарелка Петри 6 смALPHA PLUS46агаровая тарелка
96-луночная тарелкаFALCON353072жидкий анализ
бактериальный пептонAffymetrix/USBAAJ20048P2Подготовка питательной среды 
дрожжевой экстрактSIGMA92144Приготовление питательной среды 
лимонная кислота и бычья; H2OSIGMAC1909Подготовка питательной среды 
три-цитрат калия и бык; H2OSIGMA104956Приготовление питательных сред 
ФудР СИГМА1271008Приготовление питательных сред 
динатрий ЭДТАСИГМАЕ1644Приготовление питательной среды 
FeSO4• 7 H2OSIGMA215422Приготовление питательной среды 
MnCl2• 4 H2OSIGMA221279Подготовка питательной среды 
ZnSO4• 7 H2OSIGMA204986Приготовление питательной среды 
CuSO4• 5 H2OSIGMAC8027Подготовка питательной среды 
триптонSIGMA16922Приготовление питательной среды 
Микроскопическая системаNikon Eclipase Ti inverted Микроскопическая визуализация
Научная ПЗС-камераQImaging Ретига-2000Р Быстрый 1394 Микроскопическая визуализация

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
  2. Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Aeromonas InfectionC elegans ModelSurvival AssayLiquid Toxicity AssayMuscle Necrosis AssayBacterial PathogenesisVirulence AssessmentNGM PlatesFluorescent MicroscopyAeromonas Species

Related Articles