Методическая статья

Мультиплексирование сосредоточены УЗИ стимуляции с микроскопии флуоресцирования

8K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/58781

⸱

7 января 2019 г.

 , 
1Graduate College of Biomedical Sciences, Western University of Health Sciences

В этой статье

Краткое содержание

Низкоинтенсивного импульсного УЗИ стимуляции (LIPUS)-это механизм для неинвазивной механической стимуляции эндогенной или инженерии клетки с высоким пространственным и временным разрешением. Эта статья описывает, как реализовать LIPUS epi флуоресцентным микроскопом и как минимизировать акустическая разночтений по УЗИ пути для предотвращения нежелательных механические артефакты.

Аннотация

Сосредоточив ультразвук малой интенсивности импульсов, которые проникают мягких тканей, LIPUS представляет перспективных биомедицинских технологий удаленно и безопасно управлять нервных стрельбы, гормональной секреции и генетически перепрограммировать клетки. Однако перевод этой технологии для медицинских применений в настоящее время сдерживается отсутствием биофизических механизмов, с помощью которого направлены тканей чувство и реагировать на LIPUS. Подходящие подход для выявления этих механизмов будет использовать оптические биодатчики в сочетании с LIPUS для определения, лежащие в основе сигнальных путей. Однако реализация LIPUS флуоресцентным микроскопом может ввести нежелательных механических артефактов вследствие наличия физических интерфейсов, которые отражают, поглощать и преломляют Акустические волны. Эта статья представляет пошаговую процедуру для включения LIPUS имеющиеся вертикально epi флуоресценции Микроскопы минимизируя влияние физических интерфейсов для акустических пути. Простая процедура описана работать один элемент ультразвукового датчика и довести зоне фокуса преобразователя в объективных координационным центром. Использование LIPUS иллюстрируется примером транзиентов LIPUS-индуцированной кальция в клетки культивировали глиобластомы человека измеряется с помощью кальция изображений.

Введение

Многие заболевания требуют некоторые формы инвазивных медицинского вмешательства. Эти процедуры часто дорогие, рискованно, требуют восстановления периоды и таким образом добавить бремя для систем здравоохранения. Неинвазивная терапевтические механизмы имеют потенциал для обеспечения альтернатив безопаснее и дешевле обычных хирургических процедур. Однако текущий неинвазивные подходов, таких как фармакотерапии или транскраниальная магнитная стимуляция часто ограничены компромиссов между ткани проникновения, пространственно-временных резолюции и нежелательных эффектов пробить. В этом контексте фокусированного ультразвука является перспективной технологии неинвазивные с потенциалом для манипулирования биологических функций глубоко внутри ткани с высокой точностью пространственно-временных и ограниченных пробить эффектов.

Фокусированный ультразвук разрушает стимуляции состоит из доставки акустической энергии в точных местах глубоко внутри живых организмов. В зависимости от параметров акустических импульсов эта энергия может иметь множество медицинских применений. Например пищевых продуктов и медикаментов одобрил использование высокой интенсивности ультразвука направлены (HiFU) на тепловой аблация опухолей предстательной железы, вызывая дрожь мозга регионов, миома матки и вызывая боли нервных окончаний в костных метастазов1 . Кавитация при посредничестве HiFu СРТ используется также для временно открыть blood - brain барьер для целенаправленной доставки системно ведении терапии2. Пульс средняя интенсивность пространственных пик (яАЮП) и пространственных пик височной средняя интенсивность (яЗИП) используется для HiFU приложений, как правило, выше несколько кВт см-2 и производят пульсовое давление несколько десятков МПа. Эти значения интенсивности являются намного выше FDA утвержденных яАЮП и яЗИП ограничения для ультразвуковой диагностики, 190 W см-2 и 720 МВт см-2, соответственно3. Напротив недавние исследования показали что неразрушающего импульсных ультразвуковых стимуляции, которые находятся в пределах или вблизи предела ограничения интенсивности ультразвуковой диагностики (LIPUS) может быть эффективным удаленно и безопасно управлять нейронных стрельбы4, 5,6,7,8, гормональной секреции9,10 и биоинженерных клеток11. Тем не менее клеточном и молекулярном механизмы, в которых клетки воспринимают и отвечают к УЗИ остаются неясными, исключающие клинический перевод LIPUS. Таким образом за последние несколько лет, исследования искусственных оболочек, культивируемых клеток и животных стимулируется с УЗИ получили импульс раскрыть биофизических и физиологических процессов модулированные LIPUS12,13, 14,15.

Звук состоит из колебаний, распространяющихся через физический носитель. УЗИ является звук с частотой выше человека слышимого диапазона (то есть, выше 20 кГц). В лабораторных условиях, ультразвуковые волны обычно производятся пьезоэлектрические преобразователи, которые содержат материал, который вибрирует в ответ на колеблющиеся в конкретной полосы пропускания высокой частоты электрического поля. Существует два типа датчиков: совмещенные преобразователи и датчики массивы. Единственный элемент пьезоэлектрические преобразователи имеют изогнутые поверхности, которая действует как фокусирующей линзы и следовательно концентратов акустической энергии в определенную область под названием зоне фокуса. Одноэлементные преобразователи намного дешевле и легче работать, чем массивы датчика. Эта статья будет сосредоточена на одноэлементных преобразователей.

Размер фокуса зоны целенаправленной один элемент датчика зависит от геометрических свойств акустические линзы и акустические частоты. Для достижения миллиметр размер зоны фокуса с одного элемента датчика, обычно требуются ультразвуковые частоты в диапазоне МГц. К сожалению акустических волн на такой частоте являются очень быстро ослабленного при распространении в разреженной среды как воздух. Таким образом МГц ультразвуковые волны необходимо создаются и распространяются на образец в плотный материал, например воды. Это является первой задачей в деле интеграции механизма LIPUS микроскопом.

Вторая задача заключается в минимизации физические интерфейсы между материалами с различных акустических импедансов, (который является продуктом плотности материала и акустическая скорость) вдоль акустического пути. Эти интерфейсы могут отражать, преломляют, точечной и поглощать акустических волн, что делает его трудно подсчитать количество акустической энергии, эффективно доставлен образец. Они также могут создавать нежелательные механические артефакты. Например размышления производится перпендикулярно акустическая несоответствие импеданс интерфейсы создания backpropagating волны, которые мешают те распространяющихся вперед. По пути вмешательства волны компенсируют друг друга на фиксированных регионах пространств под названием узлов и суммировать в чередующихся регионов под названием анти узлов, создание так называемого стоячие волны (рис. 1). Это важно для экспериментатор иметь возможность контролировать или устранить эти экспериментальные интерфейсов в пробирке , как они не могут существовать в естественных условиях.

Флуоресценции измерение оптических журналистов является известный метод допросить прозрачный биологических образцов в режиме реального времени и с без физического воздействия. Таким образом, этот подход идеально подходит для LIPUS исследований, как любой физической зондов, в районе sonicated представит механических артефактов. Этот протокол описывает внедрение и эксплуатация LIPUS для коммерческих epi флуоресцентным микроскопом.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. рост клеток на акустически прозрачной полиэфирной пленки

  1. Просверлите отверстие размером 12 мм в нижней части стандартного 35-мм культуры блюдо с помощью вертикальный пресс сверла. Медленно сверла и носить для защиты глаз. Удалите кусочки пластика, на дно посуды с помощью лезвия для создания гладкой поверхности на внешней стороне (рис. 2).
  2. Нанесите тонкий слой эпоксидной морской класса или клея на внешней нижней поверхности блюдо.
  3. Место фильм полиэстера (толщина 2,5 мкм) против внешней нижней поверхности блюдо и с усилием нажмите чтобы убедиться, что Клей эпоксидный равномерно между пленкой и толстые пластиковые поверхности. Осторожно потяните фильм в духе центробежные пальцами для создания плоской поверхности (рис. 2).
  4. Когда высохнет эпоксидной/клей, кратко промыть сухой полиэстер нижней блюдо с 95% этиловом спирте и стерилизовать, поместив блюдо и внутренней поверхности крышки под сильным источником возбуждения 254 Нм УФ. Настройка длительности и интенсивности доставить дозу УФ приблизительно 330 МДж см-2 для полного разрушения большинства типов микро-организмов. Эта энергия приблизительно соответствует продолжительностью 5 мин, используя 1000 мкВт см-2 УФ освещения.
  5. Аликвота коммерчески доступных внеклеточная матрица смеси протеина (EMPM) в трубочки (50-100 мкл) и хранить их при-20 ° C или меньше, в стерильных условиях.
  6. В стерильных условиях (например, внутри биобезопасности кабинета) разбавляют замороженных запас EMPM с желаемой культуры среднего масштаба 1: 100. Работа на льду для предотвращения EMPM полимеризации при комнатной температуре. Быстро применить 100 мкл средних смеси на полиэфирной пленки. Установите крышку обратно на блюдо для поддержания стерильности.
  7. Инкубируйте EMPM-покрытием полиэстер дно блюда в клетки инкубатор культуры CO2 при 37 ° C для 6-12 ч.
  8. После инкубации аспирационная превышение среднего и непосредственно семян поверхности с клетки на желаемой плотности. Работа в стерильных условиях для поддержания стерильности.

2. LIPUS осуществление

  1. Поместите резервуар для воды под цели вертикальном положении микроскопа с большой объем работы и без подсветки оборудования в пути передачи.
  2. Использование коммерчески доступных оптико компонентов, место держатель образца ниже цели и держатель датчика под держатель образца. Последующие примеры поиска и УЗИ выравнивание смонтируйте эти два держателя на этапы перевода.
    1. Место движущихся частей и приводов этапы перевода снаружи цистерны или выше линии воды, чтобы избежать повреждения водой. Используйте только неагрессивных материалов, таких как из анодированного алюминия или нержавеющей стали для погружных оптико компонентов.
  3. Заполните бак с дейонизированной и дегазации воды перед использованием погружения датчика. Линия воды должна совпадать с горизонтальной плоскости держателя образца (рис. 3).
    Примечание: Деионизированная вода предотвращает электрической соединительной в присутствии высоких электрических полей. Дегазация также поможет избежать рассеяния и изменения акустических волн. Слить воду после каждого эксперимента, с помощью насоса или клапан, так что линии воды падает ниже позиции датчика. Кроме того заменить или часто фильтрации воды и очистки резервуара для воды, необходимо, чтобы избежать роста микроорганизмов.

3. наклонная акустического возбуждения

  1. Использование коммерчески доступных оптико компонентов, ориентации датчика в наклонное положение в отношении оптического пути. Это будет гарантировать, что любой отражает волны будет направлен в сторону от образца (рис. 3 и рис. 4).

4. вождение преобразователя

Примечание: Ультразвуковые преобразователи преобразования осциллируя электрической энергии в механическое расширение/сжатие пьезоэлектрического материала. Это преобразование производит потери энергии в виде тепла. Таким образом в то время как преобразователи имеют ограничение входного напряжения пик, они также обладают максимальным электрической мощности чтобы избежать теплового повреждения пьезоэлектрического элемента:
figure-protocol-1
с обязанность цикла относительную долю времени электрических моделирования, P электрическая мощность (в ваттах), Vrms входного корень значит квадрат напряжения (в вольтах) альтернативных напряжения источника и Z электрические Импеданс (в ом).
figure-protocol-2
с Vpp пик пик входного напряжения датчика.

  1. Создайте форму синусоиды, содержащий нужную частоту, количество циклов в пульс, и частота повторения с использованием коммерческих функции генератора импульсов. Однако относительно высокая Vpp необходимо эффективно управлять стандартных ультразвуковых преобразователей часто требует добавлением усилитель для усиления выходных данных (то есть, увеличение амплитуды Vpp) функции генератора.
    Примечание: например, датчик Производитель указывает ограничение мощности для данного преобразователя является 35 Вт. Будет синусоидального пик пик входное напряжение (Vв) 500 мВ на обязанность цикла 50% и усиливается через 50 дБ/100 Вт усилитель в пределах этого преобразователя питания?
    1. Чтобы ответить на этот вопрос, рассчитайте напряжения после усиления. Для усилителя мощности радиочастотного (RF) определяется коэффициент усиления (дБ):
      figure-protocol-3
      Таким образом, усиливается напряжение имеет амплитуду выходного Vpp (Vpp = Vout) из:figure-protocol-4
      С помощью уравнения 1 и 2 и с использованием 50 Ω как импеданс, соответствующий этой напряжения способен:
      figure-protocol-5
      Эта стимуляция – поэтому в пределах лимита мощности преобразователя.
    2. Используя приведенный выше пример, вычислить параметры сигнала (Vpp, частоты, длительности импульса и частота повторения импульсов), которые соответствуют ограничения мощности и напряжения, предоставленного изготовителем преобразователя. Убедитесь в том уважать эти ограничения, чтобы избежать повреждения датчика и других подключенных устройств.
  2. Выбор функции генератора, который работает в диапазоне частот, совместимый с ультразвуковой датчик. Отрегулируйте частоту функции генератора на Номинальный пиковый частоту датчика.
  3. Создайте синусоидального напряжения импульса требуемой продолжительности и частоте повторения, используя пакетный режим функции генератора. Отрегулируйте пик пик напряжения до желаемого значения. Убедитесь, что короче, чем время, прошедшее между двумя подряд импульсы Длительность импульса.
  4. Убедитесь, что сигнал соответствует желаемого сигнала путем соединения выхода функции генератора на вход осциллографа.
  5. Соедините выход функции генератора к входу ВЧ усилитель мощности (Рисунок 4). Убедитесь, что параметры стимуляции находятся в пределах преобразователя производителя.

5. пучка выравнивание

  1. Выберите гидрофонов, который работает с частоты диапазона и акустической интенсивности, совместимым с частотой и ультразвукового преобразователя.
  2. Тщательно принести кончик зонда гидрофонов в центре внимания в рамках объективного поле зрения в позиции, соответствующей позиции образца (рис. 4).
  3. Убедитесь, что зонд и датчика погружаются в дейонизированной и дегазации воды. Не удар кончик гидрофон с любым физическим объектом, кроме воды, как это будет изменить его покрытия и влияют на измерение.
  4. Выполнение брутто предварительного выравнивания датчика визуально размещения своей акустической оси сторону гидрофонов зонд. Гарантирует, что расстояние между поверхностью датчика и кончик гидрофонов примерно соответствуют Фокусное расстояние датчика.
  5. Соедините выход одной из входного сигнала осциллограф гидрофонов. Подключите триггер синхронизации от функции генератора к другой вход осциллографа. Визуализируйте обоих сигналов одновременно на осциллограф.
  6. Привод датчика с несколько циклов УЗИ на низкий рабочий цикл и низкой амплитуде, чтобы избежать повреждения датчика. Проверьте с условиями безопасной эксплуатации производителя гидрофонов, чтобы избежать повреждения кончик гидрофонов.
  7. Отрегулируйте ручку s/отдел согласно время в пути ультразвука от поверхности преобразователя для гидрофонов. Ищите гидрофонов сигнала на осциллограф после синхронизации триггера.
  8. Медленно нажать датчика с помощью моторизованных или ручной XYZ этап. Оставьте преобразователя в положение, соответствующее максимальной гидрофонов сигнал (рис. 4).
    Примечание: Если сигнал не обнаружен, возможно, слишком низкая интенсивность акустических импульсов или что луч неправильно выровнены или разбросаны по объекту. Регулярно проверяйте, что гидрофонных и датчика визуально предварительно согласованы и что без пузырей или физический объект, присутствуют в пути за исключением полиэфирная пленка. Если сигнал не обнаруживается до сих пор, увеличение входного напряжения на небольшую сумму, чтобы увеличить амплитуду сигнала гидрофонов.

6. Определение ультразвуковых импульсов давления и интенсивности

  1. С краю пучка Измерьте пик пик амплитуда гидрофонов выход на осциллограф для различных напряжений, вождение преобразователя. Убедитесь в том, не должен превышать предел давления, рекомендованные производителем гидрофонов.
  2. Преобразуйте эти измерения давления и/или акустической интенсивности значения с помощью метода калибровки гидрофонов производителя.
    Примечание: Акустической интенсивности может быть определен от давления и наоборот, используя формулу:
    figure-protocol-6
    с я уровень звукового давления (в Вт м-2), P уровень звукового давления (в Pa), ρ плотность распространения материалов (1000 кг м-3 для воды) и c скорость звука в распространении среднего (для воды, c = 1500 m s-1).
  3. Создайте калибровочных кривых, используя эти измерения.
    Примечание: Давление против напряжения и интенсивности против напряжения кривых имеют линейной и Параболическая форма, соответственно.
  4. Определите значение давления и/или интенсивности вождения напряжения с помощью соответствующей калибровочной кривой.

7. кальция чувствительных/LIPUS клеток флуоресцентным изображений

  1. Замените желаемого изображения буфер, содержащий 5 мкм клеток permeant кальция чувствительных красителя ячейки питательной среды (например, Fluo-4 утра). Инкубируйте культуры блюдо в инкубатор CO2 при 37 ° C за 1 час.
  2. Тщательно вымойте клетки с тот же буфер бесплатно красителя.
  3. Поместите блюдо в держателе образца. Возбуждают клетки, используя синий свет освещение (490 Нм) и отрегулируйте интенсивность и камеры подверженности возбуждения избежать чрезмерного насыщения отбеливание или пиксель.
  4. Выполняйте покадровый изображений, используя параметры приобретения желаемого изображения. Используйте цель погружения с большим рабочим расстоянием и лучшее качество изображения для уменьшения нежелательных отражений (см. Рисунок 4).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Рисунок 5 приведен пример LIPUS эксперимента мультиплексированием с кальция изображений. Глиобластома клетки (A-172) были выросли на EMPM покрытием полиэфирной пленки в стандартной среде культуры (дополнена 10% сыворотки и 1% антибиотиков) и инкубировали с кальция чувствительных флуоресцентные репортер Fluo-4 утра. Клетки были образы с помощью 10 X объектив погружения и освещенной с белый светодиодный источник света, и свет Флуоресцирование была собрана с пом...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Основным преимуществом фокусированного ультразвука является его способность неинвазивно доставить механических и/или тепловой энергии в биологических образцов с высокой точностью пространственно временной. Другие методы, предназначенные для механически стимулировать клетки обычно используют инвазивных физических датчиков (например, клетки тыкать) или требует взаимодействия лазерных пучков высокой энергии с посторонних предметов (например, Оптический пинцет). Магнитные Отопление может тепла определенных ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Мы благодарим Drs. Михаил Шапиро и Никита Резник за плодотворные дискуссии. Эта работа была поддержана начальных средств от Западного университета медицинских наук и низ Грант R21NS101384.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
вертикальный микроскоп с большим рабочим объемомThorlabsCERNA вертикальный
микроскоп с большим рабочим объемомScientificaSliceScope
оптомеханические компонентыThorlabsn/a
игольчатый гидрофонONDA Corporationсерии HNP/C/R/A/T + AH/G предусилитель
игольчатый гидрофонPrecision Акустикан/а
оптоволоконный гидрофонONDA CorporationHFO серия
оптоволоконный гидрофонПрецизионная акустикан/а
осциллографТехнология Keysight DSOX2004A(4 канала 70 МГц)
Генератор функцийТехнология Keysight33500B (20 МГц одноканальный)
ВЧ усилитель мощностиElectronic Navigation Industries (ENI)325LA, 525LA, 240L, 350L, A075, 2100L, 3100LA
Усилитель мощности радиочастотЭлектроника и Инновации (E& I)
Иммерсионный ультразвуковой преобразовательOlympusсфокусированный иммерсионный ультразвуковой преобразователь
Иммерсионный ультразвуковой преобразовательБентоволновой инструментBII-76
Прецизионная акустикаПьезокерамические или HiFu преобразователи
Иммерсионный ультразвуковой преобразователь Ультразвуковой преобразовательUltrasonic-S-labHiFu преобразователи на заказ
Matrigel высокой плотностиCorningVWR 80094-330
Майларовая пленка 2,5 мкмChemplexCAT.NO:107
HiFu Иммерсионный ультразвуковой преобразователь серии

Ссылки

  1. Elhelf, I. A. S., et al. High intensity focused ultrasound: The fundamentals, clinical applications and research trends. Diagnostic and Interventional Imaging. 99 (6), 349-359 (2018).
  2. Toccaceli, G., Delfini, R., Colonnese, C., Raco, A., Peschillo, S. Emerging strategies and future perspective in neuro-oncology using Transcranial Focused Ultrasound Technology. , World Neurosurgery. (2018).
  3. Duck, F. A. Medical and non-medical protection standards for ultrasound and infrasound. Progress in Biophysics and Molecular Biology. 93 (1-3), 176-191 (2007).
  4. Legon, W., et al. Transcranial focused ultrasound modulates the activity of primary somatosensory cortex in humans. Nature Neuroscience. 17 (2), 322-329 (2014).
  5. Tyler, W. J. The mechanobiology of brain function. Nature Reviews: Neuroscience. 13 (12), 867-878 (2012).
  6. Tyler, W. J. Noninvasive neuromodulation with ultrasound? A continuum mechanics hypothesis. Neuroscientist. 17 (1), 25-36 (2011).
  7. Tufail, Y., et al. Transcranial pulsed ultrasound stimulates intact brain circuits. Neuron. 66 (5), 681-694 (2010).
  8. Tyler, W. J., et al. Remote excitation of neuronal circuits using low-intensity, low-frequency ultrasound. PloS One. 3 (10), e3511(2008).
  9. Suarez Castellanos, I., et al. Calcium-dependent ultrasound stimulation of secretory events from pancreatic beta cells. Journal of Therapeutic Ultrasound. 5, 30(2017).
  10. Suarez Castellanos, I., Jeremic, A., Cohen, J., Zderic, V. Ultrasound Stimulation of Insulin Release from Pancreatic Beta Cells as a Potential Novel Treatment for Type 2 Diabetes. Ultrasound in Medicine and Biology. 43 (6), 1210-1222 (2017).
  11. Ibsen, S., Tong, A., Schutt, C., Esener, S., Chalasani, S. H. Sonogenetics is a non-invasive approach to activating neurons in Caenorhabditis elegans. Nature Communications. 6, 8264(2015).
  12. Prieto, M. L., Firouzi, K., Khuri-Yakub, B. T., Maduke, M. Activation of Piezo1 but Not NaV1.2 Channels by Ultrasound at 43 MHz. Ultrasound in Medicine and Biology. 44 (6), 1217-1232 (2018).
  13. Kubanek, J., et al. Ultrasound modulates ion channel currents. Scientific Reports. 6, 24170(2016).
  14. Prieto, M. L., Omer, O., Khuri-Yakub, B. T., Maduke, M. C. Dynamic response of model lipid membranes to ultrasonic radiation force. PloS One. 8 (10), e77115(2013).
  15. Sato, T., Shapiro, M. G., Tsao, D. Y. Ultrasonic Neuromodulation Causes Widespread Cortical Activation via an Indirect Auditory Mechanism. Neuron. 98 (5), 1031-1041 (2018).
  16. O'Brien, W. D. Ultrasound-biophysics mechanisms. Progress in Biophysics and Molecular Biology. 93 (1-3), 212-255 (2007).
  17. Shapiro, M. G., Homma, K., Villarreal, S., Richter, C. P., Bezanilla, F. Corrigendum: Infrared light excites cells by changing their electrical capacitance. Nature Communications. 8, 16148(2017).
  18. Shapiro, M. G., Homma, K., Villarreal, S., Richter, C. P., Bezanilla, F. Infrared light excites cells by changing their electrical capacitance. Nature Communications. 3, 736(2012).
  19. Shapiro, M. G., Priest, M. F., Siegel, P. H., Bezanilla, F. Thermal mechanisms of millimeter wave stimulation of excitable cells. Biophysical Journal. 104 (12), 2622-2628 (2013).
  20. Hwang, J. Y., et al. Investigating contactless high frequency ultrasound microbeam stimulation for determination of invasion potential of breast cancer cells. Biotechnology and Bioengineering. 110 (10), 2697-2705 (2013).
  21. Nakano, M., et al. Genetically encoded ratiometric fluorescent thermometer with wide range and rapid response. PloS One. 12 (2), e0172344(2017).
  22. Donner, J. S., Thompson, S. A., Kreuzer, M. P., Baffou, G., Quidant, R. Mapping intracellular temperature using green fluorescent protein. Nano Letters. 12 (4), 2107-2111 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи