В настоящем протоколе мы описываем процесс полной экспериментальной близорукость склонения в мышах с помощью недавно разработан ОПРАВЫ и техника, необходимые для достижения стабильной и воспроизводимость результатов в глазной параметр измерения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Побуждение и оценки мышиных модели экспериментальной близорукости
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Мышиных модель близорукость может быть мощным инструментом для близорукости исследований из-за сравнительно легко генетические манипуляции. Один из способов заставить близорукости в животных это поставить четкие минус линз перед глазами недель (объектив индуцированная миопия, Лим). Однако сохранившиеся протоколы для побуждения и оценки варьируются от лаборатории в лаборатории. Здесь мы описали весьма практичным и воспроизводимый метод побудить Лим мышей с использованием недавно разработан ОПРАВЫ. Метод исправления объектив стабильно перед мышь глаз во время позволяет объектив снимается для очистки или актуальные наркотиков администрации. Фенотипа является надежной и эффективной, и разница невелика. Метод, описанный здесь может применяться для мышей сразу после отнятия от груди, который расширяет возможности продолжительность для экспериментов. Мы также дали технического Советы для достижения воспроизводимость результатов в рефракции и измерения осевой длины. Мы надеемся, шаг за шагом протокол, описанные здесь и подробную статью может помочь исследователям выполнять эксперименты Близорукость миопия более плавно и сделать сопоставимые данные по всей лаборатории.
Введение
Распространенность близорукость недавно резко возросло, в то время как механизм ее возникновения и прогрессирования по-прежнему находятся неизвестный1. Наиболее характерным фенотип близорукости является удлинение осевой длины (AL), который увеличивает риск для сетчатки осложнений или даже слепоты2. Лучше понимать патогенез близорукости и разработать эффективные методы лечения, необходимы надежные близорукий Животные модели и стабильной фенотип оценки.
Кратко, для вызывая близорукий государств в животных существуют два метода: формы лишение миопия (FDM) и объектив индуцированная миопия (LIM)
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры были утверждены Этический Комитет по исследованию животных из школы медицины университета Кэйо придерживаться Арво заявление для использования животных в глазной и видение исследований, институциональные руководящие принципы, касающиеся экспериментов животных на Keio Университет и животное исследования: отчетность о в Vivo экспериментов (прибытие) руководящие принципы для использования животных в научных исследованиях.
1. сборка очки для мышей
- Подготовка детали, необходимые для сборки очков (рис. 1a). Для каждой мыши, подготовить все следующие: один руководитель конной нейлон палку, один....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
На во-первых, проверьте, если все необходимые части готовы (рис. 1a). Пример кусок собранные очки показан на рисунке 1b. За исключением основной рамы и гайку все остальные части одноразовые для каждой мыши. Набор заполненных ОПРАВЫ показан на рисунке 1 c. Измените угол между двумя кадрами для мыши с разных возрастов.
Пример измерения рефрак.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Чтобы убедиться, что очки стабильно крепится на голове мыши, несколько шагов в этом протоколе необходимо уделять большое внимание. Надкостницы должны быть полностью удалены перед использованием стоматологического адгезивной системы. Кровь на черепе также должны быть очищены с осторожностью. Хотя немного тонкой настройки является приемлемым сразу после нанесения клея, не перемещайте палку часто перед адгезивной системы высыхают. Следуйте инструкциям адгезивной системы тщательно, особенно соотношение каждого компонента зак.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Конструкция очков мышь была применена на патент (приложение № 201741349).
Благодарности
Мы благодарим м.т. Пардью за советы по SDOCT, F. Schaeffel для консультации по измерения рефракции и кривизны роговицы, г-н Sanshouo для воссоздания трехмерной фрейма данных, м. Мияучи; K. Tsubota; Ю. Танака; S. кондо; C. Шода; М. Ибуки; Ю. Мива; Ю. Хагивара; А. Исида; Ю. Томита; Ю. Katada; E. Yotsukura; K. Такахаси; и ю. Ван для критического обсуждения. Эта работа была поддержана inAid грантов для научных исследований (KAKENHI, номер 15K 10881) от министерства образования, культуры, спорта, науки и техники (МПКСНТ) к ТЗ. Эта работа также поддерживается грантом близорукость исследований лаборатории Tsubota, Inc. (Токио).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| винтовая | NBK SNZS-M1.4-10 | ||
| MonotaRO | 42166397 | ||
| гайка | MonotaRO | 42214243 | |
| рукоять | DMM Make | none | разработан авторами и выведен на 3D-принтере, арендованном у DMM Make. |
| рама | DMM Make | no | разработан авторами и выведен на 3D-принтере, арендованном у DMM Make. |
| линзы | РАДУЖНЫЕ КОНТАКТНЫЕ ЛИНЗЫ | не | адаптированы для мышей использование компанией |
| цианоакрилатный клей | OK МОДЕЛЬ | MP 20г | |
| стоматологическая адгезивная смола цемент | SUN MEDICAL | super bond | содержит травильную жидкость, используемую для удаления надкостницы мышиного черепа |
| инфракрасный фоторефрактор | Steinbeis Transfer Center | нет | разработан и предложен доктором Франком Шеффелем из университета Tü бинген |
| Спектральный домен ОКТ | Leica | R4310 | |
| Тропикамид, раствор пенилэфрина гидрохлорида | Сантэн | Мидрин- | |
| мидазолам | Сандоз К.К. | Компоненты SANDOZ | для обезболивающего |
| медетомидина | Компоненты Orion Corporation | Domitor | для анестетика |
| буторфанола тартрата | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | компоненты для анестетика |
| 0,1 % очищенный гиалуронат натрия | Santen | Hyalein | |
| атипамезола гидрохлорид | Zenoaq | антиседан |
Ссылки
- Dolgin, E. The myopia boom. Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).
- Ohno-Matsui, K. Pathologic Myopia. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).
- Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
