Коллекция спермы дифференциальной качества с использованием градиентного центрифугирования плотность

Summary

В этой статье мы стремимся описывают производительность метода градиентного центрифугирования плотность и его применение в исследованиях физиологии спермы.

Abstract

В половом размножении мужских гамет или сперматозоид предохранители с женские гаметы довести о оплодотворения. Однако большое количество сперматозоидов с подкормки способность обязаны взаимодействовать с женские гаметы обеспечить оплодотворения. Таким образом имеет решающее значение для успешного воспроизводства оплодотворяющая способность отдельных клеток спермы. Плотность градиентного центрифугирования была использована на протяжении нескольких десятилетий как воспроизводимость, быстрый, эффективный, действенный и чрезвычайно гибкой метод собирать только высокого качества спермы, чтобы использоваться в вспомогательных репродуктивных технологий. Протоколы, которые мы описали здесь сосредоточена на использовании разрывных Percoll плотность градиентного центрифугирования (PDGC) метода изолировать три отдельных популяций спермы петуха, их качество. Мы были в состоянии собрать низко-, средне - и высокое качество спермы. Мы также обсудим воспроизводимые протоколы, которые влекут за собой определяющих потенциал фертильности спермы путем оценки их жизнеспособности, мобильность и проницаемость. Коллекция спермы на их качество, с использованием метода PDGC будет полезно точно и тщательно характеризуют спермы с дифференциальной рождаемости потенциал.

Introduction

В позвоночных мужские гаметы проходят интенсивный селективного давления; Поэтому репродуктивной мужского пола имеет решающее значение для достижения успешного оплодотворения. Мужчины любого заданного позвоночных видов должны быть в состоянии производить сперматозоиды в больших количествах и достаточно высокого качества для удовлетворения потребностей оплодотворения. Сперматозоиды, имеющие сперматозоида и жгутика, являются наиболее поляризованных клетки в организме. Они также являются весьма разнородными качества спермы (живой и мертвых, морфологически нормальной и ненормальной и неподвижной, низкий мобильных и высокой мобильный), которая раскрывается через широкий раз....

Protocol

Все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) из университета штата Джорджия.

1. Мойка с использованием традиционных центрифугирования

1. Подготовьте фосфатного буферного раствора (PBS). Добавление 8,0 г NaCl, 0,2 г KCl, 1,44 г Na₂HPO₄ и 0,24 г х₂PO₄ до 800 мл дистиллированной воды (dH₂O). Отрегулируйте пэ-аш до 7,4, используя 0,1 N HCl и довести решение до 1 Л, с использованием dH₂O.
2. Подготовьте моторики буфера. Добавить 6,5 г NaCl, 4,5 г глюкозы, 0,444 g CaCl₂ и 11,5 g N - трис-[гидрокси....

Results

PDGC техника привела к собственный разделения трех слоев спермы по степени качества всех параметров. Спермы отделяет в слой высокого качества ниже выше плотность раствора, среднего качества слой между тем выше и ниже плотности раствора и низкого качества слой выше нижней плотности раствора. Эти различия в качестве свидетельствуют явные различия в жизнеспособности (рис. 4), мобильность (рис. 5) и проницаемость (

Discussion

Рождаемость не только определяет рентабельность животноводства, но и действует как средство естественного отбора видов для существования. Конечная функция сперматозоид является оплодотворить яйцеклетку. Маточных труб женщина выбирает только те приспособленных спермы с целью обеспечить оплодотворение яйцеклетки^23,24. В vitro исследования показали также существует тесная связь между черты качественного спермы и оплодотворение успех⁴.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Accudenz	Accurate Chemical and Scientific Corporation, Вестбери, штат Нью-Йорк, США	AN7050
Percoll	Sigma-Aldrich, Corp., Сент-Луис, Миссури, США	P7828
Schiff' s реактив	Sigma-Aldrich, Corp., Сент-Луис, Миссури, США 3952016
TES	Sigma-Aldrich, Corp., Сент-Луис, Миссури, США	T1375
Eosin Y	Sigma-Aldrich, Corp., Сент-Луис, Миссури, США	E4009
Nigrosin	Sigma-Aldrich, Corp., Сент-Луис, Миссури, США 198285
Центрифуга ST 40R	Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США	75004524
DU 530 Медико-биологические науки УФ/ВИД спектрофотометр	Beckman Coulter, Бреа, Калифорния, США		Каталог не найден
Olympus IX 71 Инвертированный флуоресцентный и фазово-контрастный микроскоп	Olympus America Inc., PA, США		Каталог не найден