Этот протокол описывает в Drosophila melanogaster с использованием нано инъекционный метод и основные методы для анализа взаимодействия вируса узла создать вирусной инфекции в естественных условиях .
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Создание вирусной инфекции и анализа взаимодействия хост вирус в Drosophila Melanogaster
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Вирус распространяется является одной из основных причин эпидемических заболеваний. Таким образом понимание взаимодействия между вирусом и принимающей страны очень важно расширить наши знания о профилактики и лечения вирусной инфекции. Плодовой мушки Drosophila Меланаogaster оказался одним из наиболее эффективных и продуктивных модельных организмов экрана для противовирусное факторов и изучения взаимодействия вируса хост, из-за генетических мощные инструменты и высоко сохраняется врожденный иммунный сигнальные пути. Процедуру, описанную здесь демонстрирует метод нано инъекции для установления вирусной инфекции и побудить системных противовирусное ответы взрослых мух. Точный контроль вирусных инъекций доза в этот метод позволяет высокую воспроизводимость экспериментальной. Протоколы, описанные в данном исследовании включают подготовку мух и вирус, метод впрыска, выживание курс анализа, измерения нагрузки вирус, и противовирусное путь оценки. Влияние последствий вирусной инфекции на фоне мухи были упомянуты здесь. Этот метод инфекции легко выполнять и количественно повторяемости; Он может применяться для хост/вирусные факторы взаимодействия вируса хост и вскрыть перекрестных помех между врожденной иммунной сигнализации и другие биологические пути в ответ на вирусную инфекцию.
Введение
Новые вирусные инфекции, особенно путем арбовирусов, таких, как вирус чикунгуньи1, вирус денге, желтой лихорадки вирус2 ивирусЗика3, были огромную угрозу для общественного здоровья, вызывая пандемий 4. Таким образом, более глубокого понимания взаимодействия вируса хост становится все более важным для эпидемического контроля и лечения вирусных заболеваний в организме человека. Для этой цели необходимо создать более адекватных и эффективных моделей для изучения механизмов лежащие в основе вирусной инфекции.
Плодовая муха, Dros....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примечание: Перед началом эксперимента, клеточных линий и летать запасов используются должны не быть загрязнены патогенами, особенно для вирусов, таких как DCV, FHV, дрозофила X вирус (DXV) и вирус птичьего нефрит (ANV). В идеале РНК последовательности или простой идентификации на основе ПЦР используются для обнаружения загрязнения10,45. Если произошло загрязнение, клеточных линий и летать запасов не должны использоваться больше до тех пор, пока они полностью обеззараживания46.
1. вирус и летать подготовка
- Распространение вируса и коллекции<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Результаты этого раздела после инфекции DCV D. melanogaster. Рисунок 1 показывает схему вирусной инфекции у дрозофилы. Мухи являются вводят внутри thoracically, а затем собраны образцы для измерения вирусной TCID50 и уровень РНК генома (рис. 1). Вирус может вызвать лизис клеток и CPE наблюдается на 3 дня пост инфекции (рис. 2A). Вирусную нагрузку, измеряется CPE assay соответствовала измеряется ПЦР (рис. 2B). Как показано на .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этой статье мы представляем подробную процедуру о том, как создать вирусный инфекционных систему в взрослых Drosophila melanogaster с использованием нано инъекции. Протоколы включают подготовку соответствующих летать линий и вирус фондовой, инфекции методов, оценки инфекционных показателей и измерения противовирусное ответа. Хотя DCV служит примером вирусного возбудителя, десятки различных видов вируса успешно применяется для исследования в системе дрозофилы. Кроме того сотни регуляторные факторы, вируса или х.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Мы хотели бы поблагодарить весь Пан лаборатории в IPS. CAS. Мы благодарим Ванг Lanfeng (IPS, CAS) для экспериментальной помощи и доктор Gonalo Cordova Steger (Springer природы), доктор Джессика Варгас (IPS, Париж) и доктор Seng Чжу (IPS, Париж) для комментариев. Эта работа была поддержана грантов из стратегических приоритетных исследований программы Китайской академии наук L.P (XDA13010500) и H.T (XDB29030300), Национальный фонд естественных наук Китая L.P (31870887 и 31570897) и J.Y (31670909). L.P является членом CAS молодежных инноваций ассоциации (2012083).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0,22 мкм фильтр | Millipore | SLGP033RS | |
| 1,5 мл Микроцентрифужные пробирки | Марка | 352070 | |
| 1,5 мл Микроцентрифуги без РНКазы Микроцентрифуги | Axygen | MCT-150-C | |
| 10 см Чашка для клеточных культур | Sigma | CLS430167 | Клеточная культура |
| 100 Замена пробирок | Drummond Scientific | 3-000-203-G/X | |
| Пробирка 15 мл | Corning | 352096 | |
| ABI 7500 qPCR система | ABI | 7500 | qPCR |
| Cell Incubator | Sanyo | MIR-553 | |
| Centriguge | Eppendof | 5810R | |
| Centriguge | Eppendof | 5424R | |
| Хлороформ | Sigma | 151858 | РНК экстракция |
| DEPC вода | Sigma | 95284-100ML | Экстракция РНК |
| Инкубатор дрозофилы | Percival | I-41NL | Выращивание дрозофилы |
| FBS Invitrogen | 12657-029 | Клеточная культура | |
| плоскодонная 96-луночная пластина | Sigma | CLS3922 | Клеточная культура |
| Флуоресцентный микроскоп | Olympus | DP73 | |
| Изопропиловый спирт | Sigma | I9516 | |
| Буфер для лизиса экстракции РНК (экстракция РНК) | Thermo Fisher | 15596026 | реагента TRIzol |
| (экстракция жидкого образца РНК) | Thermo Fisher | 10296028 | TRIzol LS |
| Реагент | Микроскоп Olympus | CKX41 | |
| Nanoject II Авто-нанолитровый инжектор | Drummond Scientific | 3-000-204 | Nanoject II Переменный объем (от 2,3 до 69 нл) Автоматический инъектор со стеклянными капиллярами (110 В) |
| Оптическая адгезивная пленка | ABI | 4360954 | qPCR |
| Пенициллин-стрептомицин, жидкий | инвитроген | 15140-122 | Клеточная культура |
| qPCR планшет | ABI | A32811 | qPCR |
| Schneider' s Insect Medium | Sigma | S9895 | |
| Статистическое программное обеспечение для клеточных | GraphPad Prism 7 | ||
| TransScript Fly First-Strand cDNA Synthesis SuperMix | TransScript | AT301 | Экстракция РНК |
| Vortex | IKA | VORTEX 3 | РНК |
Ссылки
- Rahim, M. A., Uddin, K. N. Chikungunya: an emerging viral infection with varied clinical presentations in Bangladesh: Reports of seven cases. BMC Research Notes. 10, 410(2017).
- Douam, F., Ploss, A. Yellow Fever....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
