Мы представляем протокол для определения оптимального растворителя экстракции для измерения кортизола из меха коалы. Растворителями, используемыми в этом протоколе, являются метанол, этанол и изопропанол. Определение оптимального растворителя извлечения поможет надежно измерить мех, чтобы определить влияние хронического стресса на коал.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Кортизол Измерение в Коала (Phascolarctos cinereus) Мех
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Оптимальные методы экстракции гормонов, используемые для измерения стресса у животных по типам образцов, не всегда одинаковы. Австралийские культовые сумчатые виды, коала(Phascolarctos cinereus),сталкивается с длительным воздействием антропогенных стрессоров и оценка хронического стресса в диких популяциях является срочно оправданным. Одним из наиболее эффективных способов измерения хронического стресса является анализ глюкокортикоидного гормона кортизола в волосах или мехе, так как он поддерживает физиологические и поведенческие реакции. Это лабораторное исследование проверки направлено на тестирование современных методов для проверки оптимального метода экстракции гормонов, который будет использоваться в качестве неинвазивной меры кортизола в мехе коалы. Признано, что использование неинвазивных методов для измерения гормонов стресса является предпочтительным по сравнению с традиционными, инвазивными методами из-за их идеальной практической и этической точки зрения. Кроме того, сравнительно легче приобретать мех у коал, чем приобретать образцы их крови. В этом исследовании использовались образцы меха коалы, приобретенные в Аделаиде Коала и больнице дикой природы, чтобы запустить ряд методов экстракции гормонов в попытке проверить оптимальный метод экстракции кортизола. Результаты показали, что 100% метанол обеспечивает наиболее оптимальный растворитель добычи по сравнению с 100% этанола или 100% изопропанола на основе результатов параллелизма. В заключение, этот метод извлечения кортизола из меха коалы обеспечил надежный неинвазивный тест, который может быть использован для изучения хронического стресса у коал.
Введение
Австралийские экосистемы поддерживают жизнь человека путем предоставления услуг, включая продукты питания и волокна среди многих других динамических взаимодействий1. По иронии судьбы, это человеческая деятельность, которая действует в качестве доминирующего драйвера нарушения экосистемы через изменение биоразнообразия2. Фрагментация мест обитания, известная как процесс деления больших непрерывных мест обитания на небольшие участки земли, изолированные друг от друга, является основным антропогенным изменением биоразнообразия, угрожающим австралийским экосистемам2. Фрагментация мест обитания изменяе....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Этот проект был выполнен в соответствии со строгими руководящими принципами по уходу за животными и людьми. Этика животных была предоставлена Западным Сиднейским университетом (A12373). Кроме того, лабораторная оценка рисков и биобезопасность и радиационная форма были представлены и приняты Университетом Западного Сиднея для безопасного проведения этого исследования (B12366).
ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы меха Коала для этого проекта были получены из Аделаиды Коала и дикой больницы, расположенной на 282 Anzac шоссе, Плимптон южная Австралия. Мех забрали из одной коалы, которая была госпитализирована и усыплена из-за тяжелых травм. Покойный коала хран....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Ассаи выявляет гормоны метаболитов, представляющих интерес, определяется с помощью параллелизма. Используя кривую параллелизма, 50% связывающая точка также определяет коэффициент разбавления образца на стандартной кривой(рисунок1). Как показано на графике параллелизма(рисунок 1), 100% этанола и 100% экстракты изопропанола не обеспечивают параллельное смещение против стандарта кортизола. Тем не менее, 100% экстракт метанола при условии параллельного смещения против стандарта кортизола. Су.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Есть ряд исследований, которые используют ряд методов для обнаружения кортизола в меха млекопитающих. Это исследование представляет результаты для обнаружения кортизола в мехе, собранных из дикой коалы подвергаются текущему антропогенному стрессу. Это новаторское исследование использовало мех для проверки того, какой из трех широко используемых растворителей лучше всего подходит для извлечения кортизола, мера хронического стресса, из меха коалы. Результаты показали, что 100% метанол был рекомендуемый растворитель для изв.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана путем запуска научно-исследовательского финансирования для Эдварда Нараяна через Западный Сиднейский университет, Школа науки и здравоохранения. Авторы благодарят Джека Нахула за помощь в обработке образцов.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Центрифужные пробирки | н/д | н/д | 1,5 мл |
| Шарики из хромистой стали | н/д н | /д | 3,2 мм x 3 |
| Набор кортизола | Arbor Assay | K003-H1W | Произведено в Мичигане, США |
| DetectX Набор для иммуноферментного анализа кортизола | Arbor Assay | K003-H5 | Впервые использован для тестирования кортизола в мехе коалы |
| Этанол | н/д н | /д н/д | Изопропанол класса ВЭЖХ |
| н | а н/а н/а | Метанол класса ВЭЖХ | |
| н | а н/а | Микропипетка класса ВЭЖХ | |
| н/д | /а | ||
| Микропрецизионное сито | н/а | н/д 0,5 | мм |
| Считыватель микропланшетов | Bio Radi | н/д | /д |
| Мойка микропланшетов | Bio Radi | н/а | /д |
| Орбитальный шейкер | Bio Line | н/д | н/д |
| Пластиковая весовая лодка | н/д | н | /д н/д |
| Запайщик пластин | н/д | д | /а |
| Прецизионные весы | н/д | н/д | /д |
| Вихревой миксер | Eppendorf | н/д | /д |
Ссылки
- Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. Ecosystem services and Australian agricultural enterprises. Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).
- Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
