Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Плавательный паралич индуцированных для оценки допамина сигнализации в Caenorhabditis elegans

7.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59243

⸱

3 апреля 2019 г.

 ,  , 
1Harriet Wilkes Honors College, Florida Atlantic University, John D MacArthur Campus, 2Integrative Biology and Neuroscience program, College of Science, Florida Atlantic University, 3Brain Institute, Florida Atlantic University, 4Department of Biomedical Science, Charles E. Schmidt College of Medicine, Florida Atlantic University

В этой статье

Краткое содержание

Плавательный вызванных паралич (SWIP) является устоявшейся поведенческих пробирного используется для изучения основных механизмов допамина сигнализации в Caenorhabditis elegans (C. elegans). Однако отсутствует подробный метод для выполнения анализа. Здесь мы опишем пошаговое протокол для SWIP.

Аннотация

Плавательный assay, указанных в настоящем Протоколе является действенным инструментом для определения белков, регулирующих дофаминергические синапсы. Подобно млекопитающих, допамин (DA) контролирует несколько функций в C. elegans , включая обучение и двигательной активности. Условия, стимулировать да выпуска (например, амфетамин (AMPH) лечения) или что предотвратить да Распродажа (например, животных, не хватает да транспортера (dat-1) которые неспособны reaccumulating Да в нейроны) генерировать избыток внеклеточного да в конечном итоге приводит в стабилизированном опорно. Это поведение особенно очевидна, когда животные плавать в воде. В самом деле хотя одичал тип животных по-прежнему плавать в течение длительного периода, dat-1 null мутантов и одичал тип относились с AMPH или ингибиторы да транспортера опускаться на дно колодца и не двигаться. Это поведение называется «Паралич индуцированных плавательный» (SWIP). Хотя SWIP assay устоявшейся, отсутствует подробное описание метода. Здесь мы опишем пошаговое руководство для выполнения SWIP. Для выполнения анализа, конце личиночной стадии-4 животных помещаются в стеклянной пластины пятно, содержащий решение управления сахарозы с или без AMPH. За их поведение плавательный, либо вручную путем визуализации под стереоскоп автоматически записи с камеры смонтированы на стереоскоп забил животных. Видео затем анализируются с помощью отслеживания программного обеспечения, которое дает визуальное представление обмолота частоты и паралич в виде тепловых карт. Ручной и автоматизированной системы гарантируют легко количественной индикации животных плавательный способности и тем самым облегчить скрининга для животных, принимая мутации в системе дофаминергической или вспомогательные генов. Кроме того SWIP может использоваться для выяснения механизма действия наркотиков например AMPH.

Введение

Животные выполняют разнообразные врожденные и сложных поведений посредничестве различных нейромедиаторов, координируется замысловатые сигнальных процессов. Нейротрансмиттеров допамина (DA) опосредует высоко сохранены поведения различных видов, включая обучение, моторики и вознаграждение обработки.

Почвы нематоду C. elegans, с относительно простой и хорошо сопоставленных нервной системы, состоящей из всего 302 нейронов, показывает заметно сложного поведения, включая многие, которые регулируются да как спаривания, обучение, нагула, передвижения и откладки 1. среди других особенностей, короткий жизненный цикл, простота обработки и сохранения сигнальных молекул, выделить преимущества использования C. elegans как модель для изучения нейронной основе сохранившихся поведения.

Гермафродит C. elegans содержит восемь дофаминергических нейронов; Кроме того самец содержит шесть дополнительных пар для спаривания целей. Как и млекопитающие эти нейроны синтезировать да и выразить да транспортера (DAT-1), мембранный белок, найдены исключительно в дофаминергических нейронов, который перевозит Да, выпущенный в синаптическую щель обратно в дофаминергических нейронов. Кроме того большинство белков, участвующих в каждом шаге синтеза, упаковки и выпуск да высоко консервируют между червями и людей, и, как у млекопитающих, да модулирует кормления поведения и передвижения в C. elegans2.

C. elegans ползет на твердых поверхностях и плавает с характерным обмолота поведением в воде. Интересно, что мутанты, отсутствует выражение DAT-1 (dat-1) обхода обычно на твердой поверхности, но не для поддержания плавательный при погружении в воду. Это поведение был назван индуцированных плавательный паралич, или SWIP. Предыдущие эксперименты показали, что SWIP, частично вызваны избытком Да в синаптическую щель, что в конечном итоге overstimulates D2-как постсинаптических рецепторов (DOP-3). Хотя первоначально определенных в dat-1 нокаут животных3, SWIP наблюдается также в одичал тип животных, препаратами что блок деятельность DAT (например, имипрамин4) и/или побудить да выпуска (например, амфетамин,5). С другой стороны фармакологической или генетических манипуляций, предотвращения синтеза и выпуск да и блокирование DOP-3 рецепторов функция предотвращения SWIP6. Взятые вместе, эти уже опубликованных данных создали SWIP как надежный инструмент для изучения поведенческие эффекты, вызванные мутированными белков внутри дофаминергические синапсы3,4,7 и использоваться для Форвард генетических экраны для идентификации Роман регулирования пути, участвующие в DA сигнализации7,8,9,10,,1112. Кроме того путем предоставления легко количественной индикации лекарственно индуцированные поведения в живых животных, SWIP включает разъяснение механизмов действия наркотиков, как амфетамин (AMPH) и азаперон на дофаминергические синапсы5, 6 , 13 , 14 , 15.

Протоколы для выполнения анализов SWIP были описаны до16. Здесь мы подробно описать, методологии и программы установки для выполнения анализа с целью обеспечения визуального руководство для C. elegans сообщества эффективно выполнять SWIP.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

1. Подготовка решений и средств массовой информации

  1. Подготовить M9 буфера путем растворения KH2PO4 3.0 g (22.05 мм), Na2HPO4 g 6.0 (42.2 мм) и g (85,5 мм) NaCl 5.0 в 1 Л газобетона деионизованной воды. После автоклавирования добавьте 1,0 мл 1 М MgSO4 (12 g окончательного объема газобетона деионизованной воды 100 мл). Смесь 100 мл в результате 10 x M9 с 900 мл ячеистого деионизированной воды, чтобы сделать раствор 1 x.
  2. Чтобы сделать яйцо буфера, растворяют 6.896 г NaCl (118 мм), 3.578 г хлористого калия (48 мм), 0,294 g CaCl2-2 H2O (2 мм), 0,406 g MgCl2-6 H2O (2 мм) и 5.958 g (25 мм) из HEPES в 1 Л газобетона деионизованной воды. Отрегулируйте пэ-аш до 7,3, использующая NaOH.
  3. Готовят раствор свежего гипохлорита натрия/NaOH, добавив 1 мл раствора гипохлорита натрия 5-6% (Блич) и 180 мкл 10 N NaOH до 3,8 мл деионизованной воды.
  4. Вешу 60 г сахарозы и растворить в газобетона деионизированной воды в окончательный объем 100 мл сделать 60% раствора сахарозы.
  5. Растворите 0,684 г сахарозы в 10 мл газобетона деионизированной воды, чтобы сделать 200 мм сахарозы. Проверка и регулировка к тому же осмолярности, используя осмометре. 1 мл аликвоты в 1,5 мл microcentrifuge трубы и заморозить при температуре-20 ° C.
  6. Весят 0,184 г AMPH (молекулярная масса 184.75 г/моль) и растворяют в 10 мл деионизированной воды, чтобы сделать Стоковый раствор 100 мм. Смешайте 2 мкл Стоковый раствор в 400 мкл воды, чтобы сделать рабочий раствор 0,5 мм.
  7. Подготовка питательной роста СМИ (НГМ) пластины
    1. Смешайте 3 g NaCl (52.65 мм), 20 г Пептон, 25 g, bacto агар и 975 мл обессоленной воды в колбу Эрленмейера 2 Л. Включают бар магнитные перемешать и автоклав (121 ° C, 15 PSI) за 1 час с использованием жидкого цикла.
    2. Здорово и поддерживать температуру в около 50 ° C, поставив флакон на подогреватель помешивая. Добавить 0,5 мл холестерин (5 мг/мл в этиловом спирте), 1 мл 1 М MgSO4, 1 мл 1 М CaCl2 и 25 мл 1 М калия фосфат буфера, рН 7,4 (108.3 g KH2PO4, 35.6 g K2HPO4 деионизированной воды на 1 Л).
    3. Пипетка 25 мл в 100 мм x 15 мм пластины и Петри и позволяют укрепить средства массовой информации. Храните пластины вниз на 4 ° C в коробке на срок до 4 недель.
  8. Подготовка бульон Lysogeny бульон (LB)
    1. Растворяют 5 g LB порошка смеси в 200 мл обессоленной воды в колбу Эрленмейера. Автоклав для 30 минут, используя жидкий стерилизации цикла. Разрешить отвар охладить вниз. Хранить при комнатной температуре в течение 1-2 недель.
  9. Подготовка NA22 бактериальной пластин
    1. Используйте кончик стерильной пипеткой или стерильной бактериальных цикла испещрять LB пластины с небольшой объем бактерий E. coli NA22 из глицерина запасов и перевернутом инкубировать пластину в инкубаторе 37 ° C ночь расти изолированной колонии. Выбрать и внедрить единую колонию в 200 мл LB отвара, подготовленную на этапе 1.8 и пусть растут на ночь при 37 ° C на тряску платформе.
    2. Для заполнения пластины, отказаться от 200 мкл бактериальной культуры на плиты NGM подготовленного ранее на шаге 1.7 и распространение с стерильных стеклянных хоккейная клюшка. Пусть плит сухой на ночь или дольше под капотом и перевернутом хранить в герметичной упаковке при 4 ° C.
  10. Чтобы сделать ресницы/платина инструмент выбрать червей, клей толстые ресницы или платиновой нити в стакан пипетка Пастера, с использованием супер клей. Отрежьте кончик ресниц под углом с помощью лезвия бритвы. Кроме того горелка Бунзена может использоваться для расплава кончиком Пипетки стеклянные вокруг платиновой нити накаливания.

2. C. elegans животноводства

Примечание: Культура-дикого N2C. elegans нагрузку на кишечной палочки NA22 пластины. Антибиотикорезистентность методы описаны ниже.

  1. Подготовка червь культуры
    1. Чтобы сделать закваски червей, вырезать небольшой кусок агар с плиты, содержащих сытых животных и перенести его на тарелку бактерии E. coli NA22 подготовлен на шаге 1.9 с помощью стерильных шпателя. Инкубируйте пластины при 20 ° C для 3-4 дней. Под микроскопом стерео визуально подтвердите присутствие взрослых, беременных.
  2. Подготовка синхронизированных населения червей
    1. Соберите беременных взрослых по крайней мере 2 пластины с дозирования газобетона деионизированной воды вокруг пластину, используя шприц бутылку. Аккуратно водоворот пластину выбить червей и собрать червей в 15 мл полистирола Конические трубки, с помощью одноразовых пластиковых дозаторов.
    2. Спин вниз по трубе в центрифуге на 140 x g на 2 мин Пелле червей, а затем удалить супернатант при помощи вакуумного насоса или с построенный в лаборатории вакууме.
    3. Ресуспензируйте и мыть червей, заполнив трубки с газобетона деионизированной воды и смеси и центрифуги на 140 x g на 2 мин аспирационная супернатант и повторить последний шаг второй раз или до тех пор, пока черви ясно от бактерий (вода появляется ясно, когда смешанная с червями).
    4. Добавьте 5 мл раствора свежеприготовленные гипохлорита натрия/NaOH (шаг 1.3) червь гранулы и быстро перемешать с помощью вихря. Инкубируйте трубку на рокер для около 4-8 мин. Время инкубации с раствор гипохлорита натрия/NaOH колеблется от 4-8 минут на основе качества запасов натрия гипохлорита раствор (Блич).
    5. Капнуть каплю (2-50 мкл) раствора, содержащего червей на стекло микроскопа и проверять каждые 2 мин под микроскопом для лизиса червя. Когда лизированы около 70% червей и выпускаются яйца, заполнить трубу с яйцо буфера подготовлен на шаге 1.2 и немедленно центрифуги за 1 мин на 140 x g Пелле эмбрионы и каркасы шнековый.
    6. Аспирационная супернатант и помыть лепешка 3 раз, заполнив каждый раз трубку с яйцо буфера. Спин вниз на 140 x g за 1 мин и удалить супернатант каждый раз. Лепешка становится белым в конце мойки.
    7. После окончательной стирки отделите эмбрионы от мертвой туши в 30% раствора сахарозы. Добавьте 5 мл газобетона деионизованной воды гранулы, Ресуспензируйте и добавьте 5 мл 60% сахарозы, подготовленную на этапе 1.4. Тщательно перемешать и центрифуги на 160 x g за 6 мин.
    8. Для переноса эмбрионов, плавающие в верхней мениска в свежий 15 мл Конические трубки Используйте стеклянной пипетки Пастера. Не принимайте более чем 3-4 мл. Чтобы удалить все оставшиеся сахарозы, мыть эмбрионы 3 раза газобетона водой центрифугированием при 140 x g на 3 мин, удаление супернатант и resuspending гранулы (и заполнения трубки) каждый раз.
    9. Повторите автомойки с 1 x M9 буфера. После окончательной стирки Ресуспензируйте гранулы в 10 мл M9. Оставьте трубы на шейкер на ночь (не более 14 h) для яиц люк в личинок L1. Черви останется в личиночной стадии L1 из-за нехватки продовольствия.
    10. Мыть L1 личинки 3 раза с газобетона водой, чтобы удалить любые феромоны, выпущенная личинки центрифугированием при 140 x g на 2 мин Ресуспензируйте личинки в 1 мл воды. 1:10 сделать разведение червей в воде, Пипетка 10 мкл падение на слайде стекла, надел coverslip и подсчитать количество червей под стереоскоп. Повторите это дважды и средняя результаты.
    11. Пипетки, объем червей, соответствует около 1000 червей на NA22 пластину, (который был ранее доведен до комнатной температуры), поместив небольшой капли на плите. Оставьте пластину половин открытого, пока падение высыхает. Затем крышка и инкубировать вниз головой в инкубаторе 20 ° C около 44-48 h или червей до поздней стадии L4, как подтвердил визуально под стереомикроскопом. Теперь черви готовы пройти тестирование на SWIP.

3. SWIP

Примечание: Мы описываем ручной метод оценки SWIP в одичал типа червей, получавших AMPH. Мы также кратко обсудить отслеживания червей и дальнейшего анализа кинетики червя, используя автоматизированный червь трекер и отслеживания программного обеспечения, которые ранее были описаны Hardaway et al.10.

  1. Ручной метод для проверки SWIP
    1. Аликвота 40 мкл 200 мОсм/Л раствора сахарозы с или без 0,5 мм AMPH в месте стеклянной пластины. В стереоскоп забрать, 8-10 поздно L4 стадии червей с ресниц или платины выбрать и погружать забрать в пластине, содержащие решения до тех пор, пока червей перейти от подбора и плавать в раствор. Обратите внимание на количество червей, взял в колодец, запустить таймер, наблюдать и записывать количество червей выставке SWIP каждую минуту Марк.
    2. Скопируйте данные в электронную таблицу и рассчитать процент червей, парализована путем деления числа червей, парализована в каждую минуту, общее количество червей, тестирование по всему анализ и умножить на 100. Скопируйте значения % в любой графический и статистического программного обеспечения и сюжет формат данных с процент значений по оси Y и время по с помощью диаграммы XY оси X.
    3. Выполняйте двустороннюю ANOVA, следуют пост hoc анализа (например, Бонферрони после тестирования) для проверки статистической значимости среди управления, AMPH групп и время лечения.
  2. Автоматизированный анализ SWIP
    1. Выполните автоматизированный анализ на одного червя в то время. Протокол для установки камеры, червь трекера программного обеспечения и сценарий для запуска программного обеспечения отслеживания анализа подробно описаны в Hardaway et al.16.
    2. Вкратце место одного конца L4 стадии гермафродита в стеклянной пластины пятно использованием ресниц забрать, как описано в методе вручную в разделе 3.1.2. Запись видео плавательный одного червя в то время и использовать трекер программное обеспечение червь для вычисления частоты изгибы тела.
    3. Выполните сценарий, предоставленный с помощью отслеживания программного обеспечения для получения червь обмолота частоты и генерировать тепло карт из данных обмолота червя.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Мы представляем пример SWIP пробирного индуцированных AMPH лечения. Рисунок 1 показывает схематическое представление пробирного настройки, как описано выше. Для ручного анализа, около 8-10 лет, синхронизированные конце L4 стадии черви собираются с ресниц или платины выбрать и помещены в место стеклянной пластины с 40 мкл 200 мОсм/Л сахарозы (решение управления) или сахароза с 0,5 мм AMPH и испытанию SWIP.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Здесь мы опишем шаг за шагом протокол для выполнения поведенческого анализа, SWIP, в C. elegans. Этот протокол является простым и ясным с без крупных технических препятствий, сделать очень пользователя этот assay дружественные. Тем не менее есть некоторые критические аспекты, которые необходимо рассмотреть для того, чтобы эффективно выполнять assay.

Осторожность следует обеспечить хорошо кормили, черви, используемые для assay так как диетическое ограничение затрагивает SWIP

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Доктор Осама Refai от д-р Рэнди Blakely лаборатории для руководства с автоматизированного анализа SWIP. Эта работа была поддержана финансирование из низ R01 DA042156 LC.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Пленка из алюминиевой фольгиReynolds1091835
амфетаминомSigma51-63-8   
Автоклавный
бактериальный инкубаторНью-Брансуик ScientificM1352-0000
Бактериологический класс, AgarLab Scientific, Inc  A466
Bacto (TM) PeptoneBDREF 211677
хлорид кальция (дигидрат)Sigma-AldrichC3881
Фотоаппарат Центрифуга ThorlabsU-CMAD3
 Eppendorf 5810R 15amp E215059
ХолестеринSigma-Aldrich57-88-5
Деионизированная водаMilliporeZ00QSV0WWMilli-Q
Депрессия стеклянная пятнистая пластинаCorning Corning, Inc. 722085
Колба ЭрленмейераThermoFisher4103-0250PK
Ресницы
Предметное стеклоFisherbrand12-550-15
Графическое и статистическое программное обеспечениеPrismGraphpad 5
HEPESSigma-AldrichRB=H3375 & H7006
Гипохлоритнатрия Хокинса4-6%, USP" 1 галлон
LB Бульон, МиллерФишерBP1426
Хлорид магния (гексагидрат)Sigma-AldrichRB=M0250500 г
Сульфат магния (гептагидрат)Sigma-AldrichM1880
Магнитный мешалкаFisherbrand16-800-510 
Микроцентрифужные пробиркиThermoFisher69715
NA 22 бактерииCGC
НистатинSigma1400-61-9
ОсмометрAdvanced Instruments, IncМодель 3320
Пастеровские пипеткиFisherbrand13-678-20A
ПетритарыFalcon351007
pH-метрOrion VersaStar ProIS-68X591202-B 0514
Полистринальные конические трубкиFalcon352095
Хлорид калияSigma-Aldrich P9541
Дигидрофосфат калияSigma-Aldrich7778-77-0
Фосфат калия - DIBASICSigma-AldrichP-8281
Фосфат калия - MONOBASICSigma-AldrichP0662
Серологические пипеткиVWR10мл=89130-898
Шейкернадежный Scientific55S 12x16
Хлорид натрияFisherRB=BP358-1
Дигидрофосфат натрияFisherRB=S381
Электронная таблицаMS OfficeMicrosoft
Excel Стерео МикроскопZeissМодель tlb3. 1 stemi2000
Стерильные наконечники для пипетокРазличные02-707-400
СахарозаSigma-AldrichRB=S5016
СуперклейЛоктит1647358 .14 унций
SwimR sofware10.18129/B9.bioc.SwimR
Tracker 2Worm Tracker 2.0www.mrc-lmb.cam.ac.uk/wormtracker/
Программа для записи видеоVirtualdubhttp://www.virtualdub.org/

Ссылки

  1. de Bono, M., Villu Maricq, A. Neuronal Substrates of Complex Behaviors in C. elegans. Annual Review of Neuroscience. 28 (1), 451-501 (2005).
  2. Sawin, E. R., Ranganathan, R., Horvitz, H. R. C. elegans Locomotory Rate Is Modulated by the Environment through a Dopaminergic Pathway and by Experience through a Serotonergic Pathway. Neuron. 26 (3), 619-631 (2000).
  3. McDonald, P. W., et al. Vigorous Motor Activity in Caenorhabditis elegans Requires Efficient Clearance of Dopamine Mediated by Synaptic Localization of the Dopamine Transporter DAT-1. Journal of Neuroscience. 27 (51), 14216-14227 (2007).
  4. Carvelli, L., Blakely, R. D., DeFelice, L. J. Dopamine Transporter/Syntaxin 1A Interactions Regulate Transporter Channel Activity and Dopaminergic Synaptic Transmission. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14192(2008).
  5. Carvelli, L., Matthies, D. S., Galli, A. Molecular mechanisms of amphetamine actions in Caenorhabditis elegans. Molecular Pharmacology. 78 (1), 151-156 (2010).
  6. Refai, O., Blakely, R. D. Blockade and reversal of swimming-induced paralysis in C. elegans by the antipsychotic and D2-type dopamine receptor antagonist azaperone. Neurochemistry International. , (2018).
  7. Bermingham, D. P., et al. The Atypical MAP Kinase SWIP-13/ERK8 Regulates Dopamine Transporters through a Rho-Dependent Mechanism. The Journal of Neuroscience. 37 (38), 9288-9304 (2017).
  8. Nass, R., et al. A genetic screen in Caenorhabditis elegans for dopamine neuron insensitivity to 6-hydroxydopamine identifies dopamine transporter mutants impacting transporter biosynthesis and trafficking. Journal of Neurochemistry. 94 (3), 774-785 (2005).
  9. Hardaway, J. A., et al. Forward genetic analysis to identify determinants of dopamine signaling in Caenorhabditis elegans using swimming-induced paralysis. G3. 2 (8), Bethesda, Md. 961-975 (2012).
  10. Hardaway, J. A., et al. Glial Expression of the Caenorhabditis elegans Gene swip-10 Supports Glutamate Dependent Control of Extrasynaptic Dopamine Signaling. Journal of Neuroscience. 35 (25), 9409-9423 (2015).
  11. Felton, C. M., Johnson, C. M. Dopamine signaling in C. elegans is mediated in part by HLH-17-dependent regulation of extracellular dopamine levels. G3. 4 (6), Bethesda, Md. 1081-1089 (2014).
  12. Lanzo, A., et al. Silencing of Syntaxin 1A in the Dopaminergic Neurons Decreases the Activity of the Dopamine Transporter and Prevents Amphetamine-Induced Behaviors in C. elegans. Frontiers in Physiology. 9 (576), (2018).
  13. Safratowich, B. D., Lor, C., Bianchi, L., Carvelli, L. Amphetamine activates an amine-gated chloride channel to generate behavioral effects in Caenorhabditis elegans. The Journal of Biological Chemistry. 288 (30), 21630-21637 (2013).
  14. Safratowich, B. D., Hossain, M., Bianchi, L., Carvelli, L. Amphetamine Potentiates the Effects of -Phenylethylamine through Activation of an Amine-Gated Chloride Channel. Journal of Neuroscience. 34 (13), 4686-4691 (2014).
  15. Carvelli, L. Amphetamine activates / potentiates a ligand-gated ion channel. Channels (Austin). 8 (4), 294-295 (2014).
  16. Hardaway, J. A., et al. et al.An open-source analytical platform for analysis of C. elegans swimming-induced paralysis. Journal of Neuroscience Methods. 232, 58-62 (2014).
  17. Lüersen, K., Faust, U., Gottschling, D. -C., Döring, F. Gait-specific adaptation of locomotor activity in response to dietary restriction in Caenorhabditis elegans. The Journal of Experimental Biology. 217, Pt 14 2480-2488 (2014).
  18. Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Cerón, J. Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation. Journal of Visualized Experiments. (64), e4019(2012).
  19. Lamitina, S. T., Morrison, R., Moeckel, G. W., Strange, K. Adaptation of the nematode Caenorhabditis elegans. to extreme osmotic stress. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 286 (4), 785-791 (2004).
  20. Masoudi, N., Ibanez-Cruceyra, P., Offenburger, S. -L., Holmes, A., Gartner, A. Tetraspanin (TSP-17) Protects Dopaminergic Neurons against 6-OHDA-Induced Neurodegeneration in C. elegans. PLoS Genetics. 10 (12), 1004767(2014).
  21. Jayanthi, L. D., et al. The Caenorhabditis elegans gene T23G5.5 encodes an antidepressant- and cocaine-sensitive dopamine transporter. Molecular Pharmacology. 54 (4), 601-609 (1998).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

C. elegansобработка амфетаминоммутант DAT-1анализ под стереомикроскопомпрограммное обеспечение Worm Trackerпостроение тепловых картчастота движений («thrashing»)двухфакторный дисперсионный анализ (ANOVA)
Плавательный паралич индуцированных для оценки допамина сигнализации в Caenorhabditis elegans
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.