Для наблюдения за ультраструктурой сенсильи насекомых в исследовании были представлены протокол подготовки образцов сканирующего и трансмиссионной электронной микроскопии (SEM и TEM, соответственно). Tween 20 был добавлен в фиксатор, чтобы избежать деформации образца в SEM. Флуоресценция микроскопия была полезна для повышения точности нарезки в TEM.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Метод подготовки образцов сканирующего и трансмиссионного электронного микроскопа для придатков woodboring Beetle
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В этом докладе описаны методы подготовки образцов, которые сканируют и передают электронный микроскоп наблюдений, продемонстрировали путем подготовки придатков древесного жука, Chlorophorus caragana Xie и Wang (2012), для обоих типов электронной микроскопии. Протокол подготовки сканирующего электронной микроскопии (SEM) был основан на химической фиксации образцов, обезвоживании в серии этаноловых ванн, сушке и распылении покрытия. Добавляя Tween 20 (Polyoxyethylene sorbitan laurate) в фиксатор и раствор для мытья, поверхность тела насекомого древесного жука промывают более чисто в SEM. Препарат образца электронной микроскопии передачи этого исследования (TEM) включал в себя ряд шагов, включая фиксацию, обезвоживание этанола, встраивание в мелину, позиционирование с помощью флуоресцентной микроскопии, секционирование и окрашивание. Фиксациациация с Tween 20 включена проникнуть в стену тела насекомых древесного жука легче, чем это было бы без Tween 20, и впоследствии лучше фиксированной ткани и органы в организме, таким образом, дали четкую передачу электронного микроскопа наблюдения насекомых sensilla ультраструктур. Следующим шагом этого препарата было определение положения сенсиллы насекомых в образце, встроенном в блок есинов с помощью флуоресценционной микроскопии для повышения точности позиционирования сенсилки цели. Это улучшило точность нарезки.
Введение
Сканирование электронной микроскопии является важным инструментом во многих исследованиях морфологии, что SEM показывает поверхностные структуры1,2. Привлекательность электронной микроскопии передачи является то, что она может быть использована для изучения широкого спектра биологических структур в нанометровом масштабе, от архитектуры клеток и ультраструктуры органелл до структуры макромолекулярных комплексов и белков. TEM показывает внутренние структуры3,4,5.
Колеоптера является самой бол....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ВНИМАНИЕ: Проконсультируйтесь с листами данных о безопасности материалов реагентов перед их использованием. Некоторые из химических веществ, используемых при подготовке образцов, являются токсичными, мутагенными, канцерогенными и/или репротоксическими. Используйте индивидуальное защитное оборудование (перчатки, лабораторное пальто, брюки в полный рост и обувь с закрытыми ностями) и работайте под капотом дыма при обращении с образцом.
1. SEM Подготовка образцов и визуализации
- Исправление и очистка образцов
- Работая в районе, где C. caragana происходят, привлечь взрослых в полевые ловушки заманили с растительными атт....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Использование очистки и фиксаторного решения с Tween 20, чище SEM изображение наблюдалось, чем без Tween 20(Рисунок 3). Прим. 20 крепячий раствор проник в глютаральдегид, фиксируя раствор в ткани. Микротрубная структура была хорошо видна. TEM изображение внутренней структуры образца было размыто без Tween 20(рисунок 4).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этой статье мы представили схему подготовки образцов для сканирования и передачи электронной микроскопии для древесного жука. Используя придаток насекомых в качестве репрезентативного предмета исследования, мы продемонстрировали несколько улучшений по сравнению с традиционными методами подготовки образцов.
Оторванное от твердой поверхности жидкое масло эмульгируется в мелкие капли, которые могут быть хорошо рассеяны и подвешены в стиральной среде, чтобы уменьшить повторное хранение на поверх.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У нас нет конфликта интересов, чтобы раскрыть.
Благодарности
Мы высоко ценим щедрую помощь Пекинского профессионального колледжа сельского хозяйства, Института применения атомной энергии (Китайская академия сельскохозяйственных наук), Биоисследовательского центра Пекинского лесного университета и профессора Шань-гана Чжан из Института зоологии Китайской академии наук. Это исследование было поддержано Национальной программой исследований и разработок Китая (2017YFD0600103), Национальным фондом естественных наук Китая (Грант No 315706443, 81774015), Лесными научными исследованиями в области общественного благосостояния Китая (201504304), Внутренней Монголии Сельскохозяйственный университет высокого уровня таланта научно-исследова....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Анатомические линзы | Chongqing Auto Optical общество с ограниченной ответственностью | 1425277 | |
| Углеродная клейкая лента | SPI Supplies, подразделение Structure Probes, Inc. | 7311 | |
| Тетрахлорметан | Sigma | 56-23-5 | |
| Медные сетки | GilderGrids | G300 | |
| Динатрия гидрофосфат | Sinopharm group химический реагент co., LTD | 10039-32-4 | |
| Этанол | J.T. Baker | 64-17-5 | |
| Плоские закладные формы | Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. | 70900 | |
| Флуоресцентный микроскоп | LEICA | DM2500 | |
| Глутаральдегид | Sigma-Aldrich | 111-30-8 | Безводный ЭМ класс |
| Изофорон | Sigma | 78-59-1 | |
| Цитрат свинца | Sigma | 512-26-5 | |
| Метанол | Sigma | 67-56-1 | |
| Одноосновной фосфат натрия | Its группа химических реактивов co., LTD | 7558-80-7 | |
| Объективный микрометр | Olympus | 0-001-034 | |
| Тетраоксид осмия | Sigma | 541-09-3 | |
| Чашка Петри | Олдрич | 1998 | |
| Лезвие бритвы | Gillette | ||
| Смола | Spurr | ERL4221 | |
| Скальпель | Lianhui | GB/ T19001-2008 | |
| SEM | Hitachi | S-3400 | |
| Силикагель Осушитель | Сучжоу Longhui Desiccant Co., Ltd. | 112926-00-8 | |
| Маленькая щетка | Martol | G1220 | |
| Гидроксид натрия | Sigma | 1310-73-2 | |
| Инструмент для распыления ионов | Hitachi Koki Co. Ltd., Токио, Япония | E-1010 | |
| Стереомикроскоп | Leica | EZ4 HD | |
| TEM | Hitachi | H-7500 | |
| Tween 20 | Tianjin Damao Химический реактив | 9005-64-5 | |
| Ультрамикротом | Leica | UC6 | |
| Ультразвуковой очиститель | GT Sonic | GT-X1 | |
| Уранилацетат | Sigma | 6159-44-0 |
Ссылки
- Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material. Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).
- Liu, C. The develo....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
