Кость внеклеточного матрикса (BEM) модель для остеосаркомы (ОС) является хорошо установленным и показано здесь. Он может использоваться как подходит леска подражая первичной опухоли роста в пробирке и предоставления идеальная модель для изучения гистологическое и цитогенетических неоднородность OS.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Внеклеточная матрица модель трехмерных костей для остеосаркомы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Остеосаркома (ОС) является наиболее распространенным и высоко агрессивной первичной костной опухоли. Она характеризуется с анатомическими и гистологические варианты диагностических и прогностических трудности. OS включает в себя genotypically и фенотипически гетерогенных раковых клеток. Кость микроокружения элементы обоснованы с учетом неоднородности и болезнь прогрессии опухоли. Кость внеклеточного матрикса (BEM) сохраняет микроструктурных матрицы и биохимических компонентов родной внеклеточного матрикса. Ткани специфические ниши обеспечивает благоприятные и долгосрочные леску для OS ячейки посева и распространения. Эта статья предоставляет протокол для подготовки БЭМ модели и ее дальнейшее экспериментальное приложение. OS клетки могут расти и дифференцироваться в несколько фенотипы с гистопатологические сложности OS клинических образцов. Модель также позволяет визуализировать различные морфологии и их ассоциации с генетическими аномалиями и основные механизмы регулирования. Как гомологичных человека ОС эта модель БЭМ-OS может разработана и применяется к патологии и клинических исследований ОС.
Введение
Остеосаркома (OS) обычно происходит в активно растущих областей, метафизе длинных костей, в подростковом возрасте. Более 80% пострадавших от OS сайты имеют предпочтение метафиз проксимального отдела голени и проксимального отдела плечевой кости, а также проксимальных и дистальных бедра, соответствующее расположение роста пластина1. OS включает в себя несколько подтипов клеток с мезенхимальных свойствами и значительное разнообразие в Гистологические особенности и класс. Свидетельства поддержки мезенхимальных стволовых клеток (МСК), остеобласты совершено прекурсоров и pericytes как клетки происхождения-2,-
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Уход за животными и использования проводятся согласно национальных институтов здравоохранения руководство для ухода и использования лабораторных животных (публикация NO.80-23, пересмотренной в 1996 году низ) после утверждения от животных этики Комитета Sun Yat-sen University.
1. кость подготовки
- Получите 4-6 week-old мышей BALB/c (без конкретного пола требование). Усыпить мыши асептически, вывих шейного и отрезать свежие малоберцовой кости, голени и бедра от задних конечностей с стерильные хирургические ножницы. Отделите эпителиальной ткани и затем удалить как можно больше мягких тканей, как можно, используя ножницы и щипчики.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
После установки деминерализации и decellularization BEM, по-видимому, полупрозрачные, с сильной стойкость и упорство, по сравнению с родной мыши кости. Немного мышцы остатков и пространство медуллярного полости можно ясно наблюдать (рис. 1A, B). Чтобы определить эффективный decellularization BEM, Бэм заливали в парафин после фиксации и затем нарезанный в разделы 3-5 мкм для гематоксилином эозином (H & E) окрашивания. Тщательного удаления клеточных ядер показано светлые о.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Как правило ОС могут быть классифицированы как osteoblastic, chondroblastic и fibroblastic подтипов в зависимости от ее доминирующей гистологических компонента. Его прогноз зависит не только от гистологических параметров, но и на своем сайте анатомические. Это может произойти внутри костей (в Интрамедуллярные или intracortical отсека), на поверхности костей и в extraosseous сайты19. Появление и неоднородность ОС можно освещены как спряжение онкогенных событий и адекватной microenvironmental импульс.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что они не имеют никаких финансовых интересов.
Благодарности
Авторы значение поддержка Чэнь Liuying ее административной помощи и длинные Чжао за его прекрасную технической помощи при строительстве подмостей внеклеточного матрикса костной ткани. Это исследование поддерживается за счет субсидий из национального фонда Китая естественных наук (31871413).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 15 мл центрифужная пробирка | Greiner | 188271 | |
| 50 мл центрифужная пробирка | Greiner | 227270 | |
| 6 см чашка для клеточных культур | Greiner | 628160 | |
| 6-луночная пластина | Greiner | 657160 | |
| ампициллин | Sigma-Aldrich | A9393 | |
| C57-BL/6J мышь | Сунь Ятсен Университетская лаборатория Animal Center | ||
| CO2 | SHEL LAB | SCO5A | |
| Двухосновной фосфат натрия | Гуанчжоу Завод химических реактивов | BE14-GR-500G | |
| DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
| Фетальная бычья сыворотка | Гиклон | SH30084.03 | |
| Гемоцитометр | BLAU | 717805 | |
| Канамицин | Сигма-Олдрич | PHR1487 | |
| MG-63 | Китайская академия наук, Шанхайский банк | Клеточная линия остеосаркомы человека | |
| MNNG/HOS | Китайская академия наук, Шанхайский банк | Клеточная линия остеосаркомы человека | |
| Фенол красный | Sigma-Aldrich | P4633 | В качестве индикатора pH используется раствор фенольного красного: его цвет демонстрирует постепенный переход от желтого к красному в диапазоне pH от 6,6 до 8,0. |
| Хлорид калия | Sangon Biotech | A100395 | |
| фосфат калия одноосновные | Sangon Biotech | A501211 | |
| хлорид натрия | Sangon Biotech | A501218 |
Ссылки
- Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art. Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).
- Mohseny, A. B., et al. Osteosarcoma ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
