Лабораторный метод измерения заразного зева в крысах

Краткое содержание

Описанный здесь метод направлен на получение кривых зеваций в парах знакомых или незнакомых самцов крыс. Клетки с отверстиями, разделенными либо четкими или непрозрачными перегородками с (или без) отверстия используются для обнаружения того, визуальные, обонятельные, или оба типа сенсорных сигналов могут стимулировать заразу зевоты.

Аннотация

Общение является важным аспектом социальной жизни животных. Звери могут влиять друг на друга и собираются вместе в школах, стаях и стадах. Общение также способ половых взаимодействий во время ухаживания и как соперники урегулировать споры без борьбы. Тем не менее, есть некоторые поведенческие модели, для которых трудно проверить существование функции коммуникативной связи, потому что несколько типов сенсорных методов, вероятно, участвуют. Например, заразное зевая является коммуникационным актом у млекопитающих, который потенциально происходит через зрение, слух, запах, или сочетание этих чувств в зависимости от того, животные знакомы друг с другом. Поэтому для проверки гипотез о возможной коммуникативной роли такого поведения необходим подходящий метод для определения участвующих сенсорных условий.

Предложенный здесь метод направлен на получение кривых зеваций для знакомых и незнакомых крыс и оценку относительного участия визуальных и обонятельных сенсорных методов. Метод использует недорогие материалы, и с некоторыми незначительными изменениями, он также может быть использован с другими видами грызунов, таких как мыши. В целом, метод предполагает замену четких разделителей (с или без отверстий) непрозрачными разделителями (с отверстиями или без них), которые либо позволяют, либо препятствуют общению между крысами, помещенными в соседние клетки с отверстиями в соседних сторонах. Соответственно, можно протестировать четыре условия: обонятельная коммуникация, визуальная коммуникация, как зрительная, так и обонятельная коммуникация, и ни зрительная, ни обонятельная коммуникация. Как социальное взаимодействие происходит между крысами, эти условия испытаний моделируют то, что может произойти в естественной среде. В этой связи предлагаемый здесь метод более эффективен, чем традиционные методы, которые опираются на видеопрезентации, биологическая достоверность которых может вызывать озабоченность. Тем не менее, он не делает различий между потенциальной ролью слуха и ролью запаха и зрения в зевать заразу.

Введение

Традиционно, коммуникативное поведение было изучено с двух точек зрения. С одной стороны, этиологи наблюдают и фиксируют поведение животных вестественных условиях и пытаются распознать его адаптивное значение 1. Особое чувство или чувства участие не были основным интересом этих исследований. С другой стороны, физиологи больше заинтересованы в распутывании механизмов, с помощью которых животные общаются^1; следовательно, лабораторные исследования предоставили методы для решения роли, которую сенсорные методы играют в связи^2,3. Эти две точки зрения действительно взаимодополняют друг друга, поскольку знание как адаптивной ценности, так и непосредственных механизмов необходимо для получения всестороннего понимания коммуникативного поведения в социальной жизни животных.

Зевая поведение является заметным компонентом поведенческого репертуара в нескольких видов позвоночных⁴, начиная от рыбы до приматов⁵. Его можно охарактеризовать как медленное открытие рта и поддержание его открытогоположения, за которым следует более быстрое закрытие рта 5. Продолжительность всей последовательности зависит от вида; например, приматы зевают дольше, чемнеприматные виды 6. Во многих видах, с людьми, являясь исключением, мужчины, как правило, зевают чаще, чем женщины⁷. Эта функция может лежать в основе возможной коммуникативной функции зевая, хотя регулярные модели зевая и его ежедневная частота может также предложить физиологическую функцию. У крыс спонтанное зевая следует циркадный ритм, с пиками высокой частоты, происходящими утром и днем^8,9.

Одна интересная особенность зевая поведение является то, что это может быть заразным актом (когда освобождение стимул поведения случается быть другое животное ведет себя таким же образом¹⁰) в нескольких видов позвоночных^{11,12, 13,14,15,16}, в том числе птиц¹⁷ и грызунов¹⁸. Кроме того, последние данные показали, что заразное зевая может отражать коммуникативную роль, потому что зевая одной крысы может повлиять на физиологическое состояние другого при воздействии обонятельных сигналов¹⁹. Однако, является ли или не зевая имеет коммуникальную роль по-прежнему обсуждается^20,21, и анализ заразных зевая является важным первым шагом для решения этого вопроса.

С другой стороны, заразное зевая было связано со способностью животного сопереживать взглядам других животных; следовательно, тесно связанные лица, скорее всего, чтобы показать заразу⁴. Эта гипотеза часто тестировалась в лабораторных условиях, в которых животные представлены с зевотой стимулы на видео^12,13; следовательно, заражение может произойти только через визуальные сигналы. Другие исследования оценили зевоту инфекции в более естественных условиях с использованием групп животных^14,15. Основная проблема заключается в том, что социально взаимодействующие животные часто реагируют на сигналы и обмениваются сигналами, которые передаются через комбинации сенсорных способов. Разъяснение фактических чувств, участвующих в данном поведении от их комбинированных эффектов не всегда является легкой задачей. Как правило, исследователи фармакологически или хирургически препятствуют использованию животным того или иногочувства, а затем делают вывод о роли этого чувства в соответствующем поведении 2,^3,18,22. К счастью, есть и другие методы, в которых только физические барьеры используются либо позволяют или препятствуют общению между животными^23,24,25, тем самым достигнув большей биологической достоверности.

Предложенный здесь метод был специально разработан для изучения заразной зевая у знакомых и незнакомых крыс в социальной обстановке. Согласно эмпатической гипотезе, бывшая группа должна быть более восприимчива к заразному зевну. Метод не требует, чтобы животные были хирургически или фармакологически лишены каких-либо чувств. Вместо этого, он работает путем размещения крыс в соседних клетках с отверстиями и физически препятствуя их связи с помощью либо четкие или непрозрачные разделители с или без отверстий. Таким образом, можно изучить четыре тестовых условия: (1) обонятельная коммуникация (OC, перфорированный непрозрачный разделитель), (2) визуальная коммуникация (VC, неперфорированный прозрачный разделитель), (3) зрительная и обонятельная связь (VOC, перфорированный четкий разделитель) и (4) ни визуальной или обонятельной связи (NVOC, неперфорированный непрозрачный разделитель). Таким образом, исследователи могут сравнить относительный вклад обонятельных, визуальных и в некоторой степени, слуховые сигналы в зевоту инфекции. Этот подход не является новым, так как аналогичные методы были использованы для изоляции чувств, участвующих в некоторых коммуникативного поведения у животных, таких как ящерицы²³ и мышей²⁶. В самом деле, Gallup и коллеги²⁷ использовали аналогичный метод, чтобы продемонстрировать роль визуальных сигналов в заразной зевая в budgerigars. Основными особенностями этих методов являются моделирование социального контекста и минимального стресса, нанесенного животным. Кроме того, использование взаимодействующих животных повышает биологическую обоснованность выводов.

Есть несколько способов измерения заразной зевая^25,28. Д-р Стивен Е. Г. Леа (личное общение, 2015) помог нам численно адаптировать метод, ранее используемый приматологами^13,14 для более раннего анализа данных, используемых здесь¹⁸. Представленный в этом протоколе расширенный вариант этого метода с более широким спектром приложений. Она состоит из взвешивания общего числа зевков крысы, внутри и за пределами данного временного окна, по доле времени наблюдения, соответствующей зевая внутри и за пределами временного окна.

Например, если предполагается, что крысы А и В наблюдаются в течение 12 мин, их зевая записывается до ближайшей минуты, и 3 мин время окна установлен для измерения заразной зевая. Далее рассматриваются следующие последовательности зевок для каждой из этих крыс: крыса А (0,0,0,0,0,0,2,0,0,0,0,2,1) и крыса B (0,1,0,0,1,1,0,0,0,0,3). Следует отметить, что каждое число (0-3) соответствует количеству зевок, забитых на каждом минуте. Для крысы А, в течение минут 1, 10 и 11 (числа жирным шрифтом), крыса B не зевает в течение предыдущих 3 минут (выбранное время) или в течение этой минуты. В эти минуты, крыса зевает в общей сложности 2 раза. Таким образом, скорость зевоты крысы без каких-либо зевать стимул (не-пост-зевок зевать скорость) составляет 2/3 (т.е., 0,67 зевает / мин). В оставшиеся 9 мин, крыса B зевает по крайней мере один раз в той же минуте или 3 предыдущих минут. Крыса зевает в общей сложности четыре раза в эти 9 мин. Таким образом, скорость зевоты крысы в ответ на зевоту стимула (пост-зевок зевать скорость) составляет 4/9 (т.е., 0,44 зевает / мин). Применение той же процедуры к крысе B дает не-пост-зевок скорость 2/3 (т.е., 0,66) и после зевоты скорость 5/9 (0,55).

С другой стороны, если зевая записывается до ближайшего десятичной минуты, зевать зараза приведет к скорректированной пост-зевая времени. Например, если в течение 12 мин период наблюдения за крысами А и В регистрируются следующие случаи зевоты: крысы А (2,3, 5,1, 5,8, 10,4, 10,8, 11,1)и крысы В (1,2, 2,4, 4,5, 5,1, 11,2, 11,6, 11,8). Для крысы А, периоды времени, в течение которых крыса B не зевает в течение последних 3 мин, варьируются от 0 до 1,2 мин и от 8,1 до 11,2 мин (т.е. 3,1 мин), что дает в общей сложности 4,3 мин не-пост-зевав времени. Количество раз, что крыса зевает в те времена составляет три (числа жирным шрифтом), так что не-пост-зевок зевать ставка 3/4.3 (т.е., 0,69), в то время как после зевоты зевать ставка 3/7.7 (т.е., 0.38; деноминация от 12-4.3 мин). Аналогичным образом, для крысb B, периоды времени, в течение которых крыса не зевать в течение последних 3 мин варьируются от 0 до 2,3 мин и от 8,8 до 10,4 мин, что дает в общей сложности 3,9 мин. Количество раз крысы B зевает в течение этих периодов является одним, так что не-пост-зевок зевать ставка 1/3.9 (т.е., 0,25). Соответственно, скорость зевоты после зевоты составляет 6/8,1 (т.е. 0,74).

В то время как почти современный матч в поведении является идеальным критерием, чтобы продемонстрировать наличие инфекции, такие аспекты, как ограничения на то, что человек посещает, время реакции на стимул, распределение поведения с течением времени (например, зевая может произойти в эпизодах), и время, чтобы акклиматизироваться к экспериментальной настройки все приводят к различиям видов, что затрудняет использование уникального временного окна. Это может быть причиной, почему исследователи использовали временные окна, которые варьируются от секунд⁵ до нескольких минут¹¹, что создает проблемы при сравнении результатов²⁸. В связи с этим предлагается повторить описанную выше процедуру для различных временных окон для получения кривых зевать заразы и сравнить кривые заразы зевоты между видами.

Эквивалентные кривые заразы зевоты можно сравнить путем случайного распределения количества зевок, наблюдаемых для каждой крысы в течение периода наблюдения. Таким образом, предлагаемый метод измерения заразы зевоты предлагает два типа элементов управления: (1) скорость зевоты, возникающая вне временного окна (не после зевоты) и (2) кривая искусственного зевоты, полученная из случайного распределения числа зевоков. Таким образом, этот подход к анализу зевоты инфекции является шагом вперед от других процедур, таких, как сравнение процента или частоты зевая в течение одного временного окна, что происходит за пределами этого окна²⁵, без учета фактические кадры раз. Метод дополняется R-программой²⁹ для удобного и объективного расчета вероятности заразного зевания на один или несколько временных окон.

Чтобы проиллюстрировать полезность этого метода и преимущества программы на основе R, используется набор данных из ранее опубликованного исследования^18. Экспериментальное состояние состояло из 144 крыс-самцов, выделенных либо в знакомое, либо в незнакомом состоянии. Крысы в каждом экспериментальном состоянии были подразделены на четыре подгруппы по девять пар и подверглись воздействию любой из четырех описанных выше ситуаций тестирования. Зевая поведения крыс в каждом экспериментальном состоянии и испытания ситуации были затем записаны в течение 60 минут.

Протокол

Экспериментальные протоколы и животноводство проводились в соответствии с институциональными руководящими принципами.

1. Материалы

1. Найдите полный список материалов, используемых для реализации метода, в таблицематериалов. Используйте рисунок 1 и обратитесь за советом экспертов, чтобы построить перевернутый Т-образный стол, клетки наблюдения, и клетки делителей. Следуйте показаниям по безопасности при использовании острых инструментов и потенциально опасных материалов.
2. Сделайте перевернутый Т-образный стол, склеив два железнодорожных деревянных бруса (длина 45 см, отделенные 0,6 см друг от друга) на вершину и в середине кусок дерева (100 см х 45 см х 1,5 см). Затем поместите второй кусок дерева (50 см х 45 см х 0,6 см) вертикально между рельсоподобными решетками. Убедитесь, что этот второй кусок дерева предотвращает пару крыс с одной стороны от просмотра другой пары на противоположной стороне (Рисунок 1).
3. Используйте стекло и акрил для создания восьми смотровых клеток. Убедитесь, что каждая клетка (19 см в ширину, 19 см в длину, 10 см в высоту, 3 мм толщиной) имеет 24 равномерных отверстия (диаметром 5 мм) в три ряда в середине одной из ее сторон. Сделайте эту сторону акрила (3 мм толщиной) и сократить высоту противоположной стороны на 0,7 см, чтобы крыса дышать.
   1. Убедитесь, что каждая клетка наблюдения имеет раздвижную крышку из акрила, чтобы предотвратить крысу от воспитания и отвлекает себя в течение 60 минут наблюдения период.
4. Сделать четыре разделителя из акрила (19 см в ширину, 30 см в высоту, 3 мм толщиной). Просверлите 24 отверстия (диаметр 5 мм), которые соответствуют тем, которые в клетках наблюдения, каждый в одном прозрачном делителе и одном непрозрачном делителе.
5. Заранее подготовьте листы данных для записи появления зевок. Включите в заголовки каждого листа данных имя наблюдателя, экспериментальное состояние (т.е. знакомые или незнакомые крысы), соответствующую ситуацию тестирования (OC, VC, VOC, NVOC), дату и начальное и окончательное время наблюдения. Разделите остальную часть листа данных на две колонки, каждая с числом крыс, написанных в верхней части, чтобы записать зевая поведение крыс.

2. Процедура

1. Дом 144 самцов крыс в группах по четыре человека в пластиковых клетках (домашних клетках) от отлохоты до тех пор, пока они не достигнут 2,5 месяцев в возрасте. Не используйте самок крыс, потому что они, как правило, показывают большую вариацию в поведении из-за гормональных циклов, которые могут быть спутаны с последствиями тестовой ситуации. Убедитесь, что крысы в каждой клетке не братья и сестры.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Это может быть трудно получить все крысы вместе. В этом случае, создать блоки по крайней мере 8 знакомых крыс и 8 незнакомых крыс, так что каждая тестовая ситуация представлена один раз в каждом экспериментальном состоянии³⁰.
2. Чтобы идентифицировать крыс, пометьте их символическими числами на хвостах с помощью коммерческого маркера. Например, представляют числа от 1 до 4, комбинируя точки и линии (например, одна точка для числа 1 и одна линия для числа 4). Определите знакомых и незнакомых крыс с использованием разных цветов.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Обработайте крыс в соответствии с инструкциями по безопасности, предоставляемыми персоналом животного комплекса, и соблюдайте рекомендации относительно правильного использования лабораторных животных в учреждении, где будут проводиться эксперименты.
3. Случайно выберите, в каких домашних клетках разместится группа знакомых крыс, а в каких будет размещена незнакомая группа. Например, предположим, что в четырех домашних клетках живут 16 крыс: число домашних клеток от 1 до 4, а затем используйте R (загрузите его в http://cran.r-project.org/) следующим образом: «после подсказки (зgt;)»:
   Образец (4,4)
   4 3 2 1
   1. Группируйте знакомых (или незнакомых) крыс в домашних клетках 4 и 3, и группируйте незнакомых (или знакомых) крыс в домашних клетках 2 и 1. Убедитесь, что животные персонала объекта поддерживает личность каждой клетки и обрабатывает крыс таким же образом, как и все другие крысы в животном объекта.
   2. Используйте программу R снова и случайным образом выбрать крыс, чтобы сформировать каждую пару в каждом экспериментальном состоянии. Убедитесь, что крысы в каждой паре знакомых крыс происходят из одной домашней клетки, и убедитесь, что противоположное верно для пар в незнакомой группе. Случайно выбирайте пары крыс для каждой тестовой ситуации в каждом экспериментальном состоянии.
4. Выполните два тестовых сеанса в день с двумя из восьми возможных тестовых ситуаций (четыре для каждой знакомой и незнакомой крысы) за тестовую сессию (т.е. 60 мин периода наблюдения). Проведите два тестовых сеанса последовательно в течение 3 ч.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь в том, чтобы провести все тестовые сессии (четыре пары крыс в день) либо утром или днем, чтобы избежать каких-либо смешанных факторов. Выполнить полную реплику (восемь тестовых ситуаций) эксперимента в течение двух дней подряд.
   1. Убедитесь в том, чтобы использовать тестовые ситуации в случайной последовательности для каждого репликации эксперимента. Например, используйте номера от 1 до 8 для определения каждой тестовой ситуации, а затем используйте R следующим образом:
      Образец (8,8)
      8 7 4 6 5 1 2 3
   2. Выделите тестовые ситуации 8 и 7 для тестирования сессии 1, тестовые ситуации 4 и 6 для тестирования сессии 2 и так далее. Затем случайным образом выберите сторону перевернутой Т-образной таблицы, где будет размещена каждая пара крыс (тестовая ситуация).
5. Повторите ту же процедуру (шаги от 2,3 до 2,4,2) для второй репликации (т.е.блока) эксперимента.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Если цель исследования состоит в том, чтобы проверить последствия социального состояния (т.е. двух взаимодействующих крыс) на частоте зевая, используйте одну крысу, помещенную в клетку наблюдения рядом с пустой клеткой наблюдения в качестве контроля для каждой из четырех тестовых ситуаций. Выполните этот эксперимент 2x для каждой тестовой ситуации для контрольной группы из восьми крыс.
6. Настроили тестовый сеанс, перенеся первых четырех крыс из животного объекта в смотровую комнату, где они останутся в течение 15 минут, чтобы акклиматизироваться к новой среде. Транспорт крыс в отдельных клетках и держать их отдельно друг от друга во время транспортировки и в комнате наблюдения.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Следуйте инструкциям безопасности для перевозки животных, предоставляемых персоналом животного объекта и использовать указанную одежду для работы с животными в лаборатории. Крысы не будут иметь доступ к пище и воде, пока они находятся в комнате наблюдения.
7. После того, как период акклиматизации пройден, поместите перевернутый Т-образный стол на большую прямоугольную таблицу. Убедитесь, что есть потолк лампы, что достаточно освещает комнату при проведении наблюдений.
8. Положите фильтровальную бумагу на дно каждой клетки наблюдения и поместите клетки парами с каждой стороны перевернутой Т-образной таблицы. Расположите соответствующий разделитель между каждой парой клеток.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Фильтровная бумага облегчает очистку клеток и обеспечивает шероховатую поверхность, по которой крысы могут двигаться без скольжения.
9. Стратегически место два цифровых видеокамер таким образом, что каждый записи зевая поведение каждой пары крыс. Убедитесь, что видеокамеры надежно закреплены на штативы и правильно ориентированы на клетки наблюдения. Подключите видеокамеры к настольному компьютеру, чтобы одновременно следить за поведением крыс.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Храните цифровую информацию на флэш-накопителях, чтобы постоянно архивировать экспериментальные сеансы. Используйте флэш-накопители с высокой емкостью памяти.
10. После периода акклиматизации, поместите крыс в клетки наблюдения в соответствии с распределением ранее определены. Установите автоматический фокус видеокамеры и запустите видеозапись одновременно с помощью стоп-часа. Остановите видеозапись в конце периода наблюдения 60 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В то время как экспериментаторы могут находиться за пределами комнаты во время тестовой сессии и наблюдать удаленно, рекомендуется, чтобы один человек находится в комнате наблюдения (как можно дальше от экспериментальной настройки) при мониторинге поведения крыс, чтобы обеспечить, чтобы тестовый сеанс проходил без перерыва.
11. Когда наблюдение закончится, верните крыс в их домашние клетки в животном объекте. Попросите сотрудников животного комплекса, чтобы убедиться, что крысы имеют доступ к пище и воде снова. Тщательно очистите клетки наблюдения с помощью неоксичного моющего средства и подготовьте экспериментальную установку для выполнения вторых и заключительных тестовых сессий дня.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Очистите древесину, чтобы удалить любые ароматы, оставленные крысами при размещении в клетках наблюдения, которые могут повлиять на поведение следующей пары крыс испытания.
12. Обучить одного-двух добровольцев частично слепым к назначенным процедурам для выявления и записи зевая с помощью метода выборки. Убедитесь, что наблюдатели используют определение зевая, описанное в разделе введения.
13. Воспроизведение и проецировать каждое видео на экране компьютера с помощью любой стандартной системы воспроизведения. Попросите наблюдателя просмотреть каждое видео и наблюдать и записывать зияющее поведение с помощью ранее подготовленных листов данных, а затем позвольте ему просмотреть видео на более низких скоростях, чтобы повысить способность наблюдать и измерять зевая.
    1. Попросите наблюдателей забить зевая с помощью системы обозначения, аналогичной следующему: используйте вертикальные линии с минутой, написанной в качестве суперскрипта, чтобы представить появление зевоты (например,., ³ евро ⁶ евро ⁹, указывая один зевок на 3-й минуте, два зеват на 6-й минуте и один зевок на 9-й минуте). Оценка зевая как последовательность (например,1,2, 2,2, 3,2, 5,0, 5,8), чтобы записать его с большей точностью (минутокруг до одного десятичного места).
    2. Кроме того, непосредственно вводя данные из видео на компьютер с помощью стандартных программ сбора данных. Убедитесь, что наблюдатель знаком с такими программами.
       ПРИМЕЧАНИЕ: При необходимости позвольте наблюдателю просматривать каждое видео более чем за один сеанс. Убедитесь, что один наблюдатель просматривает все видео, соответствующие одному блоку экспериментов. Если два разных наблюдателя просмотрели эти видео, может возникнуть риск того, что различия в их способности наблюдать и записывать зевая будут смужать последствия тестовых ситуаций. Важно набрать внутринаблюдатели надежность между различными наблюдателями на 10%-20% видео, чтобы гарантировать, что зевая аннотируется таким же образом.

3. Обработка данных

1. Транскрибировать височная последовательность зевает в каждой крысы из листов данных в электронную таблицу. Убедитесь, что есть одна колонка для каждой крысы с коротким заголовком (например, fr1.l и fr1.r, чтобы указать первую пару знакомых крыс на левой и правой сторонах, соответственно). Убедитесь, что все столбцы имеют одинаковую длину, заполнив пустые ячейки 0 или NA (см. ниже).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте общее руководство, представленное в качестве дополнительного документа, чтобы полностью понять следующие шаги по обработке данных, измерению заразного зевания и получению заразных кривых зевая.
   1. Если зевая был записан до ближайшей минуты, введите число зевков в каждую соответствующую минуту и использовать 0 (без зевоты), чтобы заполнить клетки, когда не зевок произошло в данной минуте. Сохранить лист в виде текстового файла (.txt).
   2. Если зевая была записана до ближайшего десятичной минуты, введите в последовательности сверху вниз и используйте "NA" для заполнения пустых пространств столбцов (крыс), в которых количество зевок (рядов) ниже, чем у столбца с максимальным числом (рядами) зевает, записанных для r В. Сохранить лист в виде текстового файла (.txt).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку R имеет возможность работать с пустыми ячейками, лист может быть сохранен с помощью столбцов различной длины. Используйте параметры справки, предоставляемые R для обработки недостающих данных.
2. Инициировать R. Импортируйте данные из файла, в котором они были ранее расположены.
3. Сохранить коды программы с расширением ". R" (предоставляется в качестве дополнительного материала), а затем скачать конкретный код программы (см. общее руководство) в зависимости от того, зевает были записаны в качестве целых или дробных чисел. Запустите программу для каждой пары крыс и желаемого количества временных рамок.
   1. Запустите программу снова, теперь с помощью случайного распределения числа зевок от каждой крысы (см. общее руководство). Выполните одни и те же шаги (шаги от 3,3 до 3.3.1) для всех экспериментальных условий (т.е. знакомых и незнакомых крыс) и/или всех тестовых ситуаций. Продолжить, как указано в общем руководстве и экспортировать результаты в Excel.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Вместо импорта ранее сохраненной программы, как предлагалось выше с помощью текстового редактора, скопировать и непосредственно вставить программу в рабочее пространство R.
4. Для создания кривых заразы зевоты используйте данные, ранее сохраненные в электронной таблице. Вычесть не-зараза ставки для каждой пары крыс, временное окно, и тест ситуации. Отделить анализ наблюдаемых данных и искусственных (случайно распределенных) данных.
   1. Далее вычислите доверительные интервалы (CI) для каждого временного окна и тестовую ситуацию с помощью процедуры загрузки (см. общее руководство). Отделить анализы для знакомых и незнакомых крыс. Затем объедините искусственные данные из четырех тестовых ситуаций для каждого экспериментального состояния и вычислите CI для каждого временного окна с помощью процедуры загрузки.
   2. Далее создавайте сюжеты для каждой тестовой ситуации и экспериментального состояния (см. рисунок 2 и рисунок3). Наконец, выполнить многократный регрессионный анализ, чтобы сравнить интенсивность заражения зевотой между тестовыми ситуациями (см. ниже).

Результаты

Крысы были отобраны из ранее произведенной подлинии Крыс Ыпраг-Доули, которые были выбраны для частого зевая (примерно 22 зевает в час³¹). Тем не менее, девять пар незнакомых и девять пар знакомых крыс мужского пола (между 2,5 и 3 месяцев) используется в тестовой ситуации зевнул примерно 12 раз в час, в среднем¹⁸. Поэтому тестовые ситуации для измерения зева заразы частично тормозят зевая поведение.

Обсуждение

Есть критические шаги в методе, которые должны быть приняты во внимание для получения успешных результатов. Знакомые крысы должны делить домашние клетки, по крайней мере 1,5 месяца после отлохоты и перед запуском экспериментов. Однако незнакомые крысы должны жить в отдельных домашних клетках. В обоих случаях, пары крыс должны исходить из разных пометов, но быть как можно более похожими по возрасту, как это возможно. Что касается наблюдения клетки, их отверстия должны соответствовать тем, в разделителях, потому что это ед...

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Акриловые разделители	ручной работы	Нет в наличии	Две перегородки, одна прозрачная и одна непрозрачная, будут иметь по 24 отверстия каждая. Два других разделителя, один прозрачный, а другой непрозрачный, не будут иметь отверстий. Подробности строительства см. в основном тексте.
Основанная на R программа	Benemé rita Universidad Autó noma de Puebla	Not available	Это программа, используемая для оценки заражения зевотой у крыс. Информацию о том, как используется программа, смотрите в основном тексте.
Технические характеристики	Пользователь может их уточнить	Недоступно Эти	формы будут использоваться наблюдателем для записи частоты зевания путем просмотра видеозаписей. В качестве альтернативы можно использовать блокнот, если вы следуете советам, приведенным в основном тексте.
Настольный компьютер	Любой производитель	Нет в наличии	Убедитесь, что компьютер оснащен видеокартой, способной удобно обрабатывать видеозаписи зевающего поведения.
Цифровые видеокамеры	Любой производитель	Недоступен	Они будут использоваться для видеозаписи зевающего поведения каждой пары крыс; на один экспериментальный сеанс будет приходиться 2 пары крыс.
Флэш-накопитель	Любой производитель	Недоступен	Каждый экспериментальный сеанс будет длиться 60 минут, поэтому вам потребуется достаточно памяти для хранения видеозаписи.
Стеклянные клетки	ручной работы	Нет в наличии	Каждая клетка (высота 19 X 19 X 10 см) будет иметь 24 отверстия (диаметр 0,5 см), образующих три ряда посередине одной из ее сторон. Более подробно об их строительстве смотрите в основном тексте. Рекомендуется изготовить одну дополнительную клетку на случай, если одна из них случайно сломается.
Маркеры	Sharpie или любого другого производителя	Недоступны	перманентные маркеры для нумерации крыс. Посмотрите основной текст, чтобы увидеть один из способов использования символов рисования на хвосте крысы.
Карандаши	Любого производителя	Нет в наличии	Они используются наблюдателем для записи частоты зевания. Важно, чтобы наблюдатель был предварительно обучен распознавать зевающее поведение и работать с системой видеоплеера.
R software	R Development Core Team	Not available	Скачать R по адресу: http://cran.r-project.org/
Рельсообразные деревянные бруски	ручной работы	Нет в наличии	Они будут закреплены посередине прямоугольного деревянного листа, образующего дорожку, куда помещается второй деревянный лист. Дополнительные инструкции по сборке см. в основном тексте.
Прямоугольный стол	Любой производитель	Недоступен	Это стол (примерно 2 х 1 м), на котором будет размещен перевернутый Т-образный стол для наблюдения за поведением зевающего.
Sprague-Dawley Самцы крыс	Любой местный поставщик лабораторных животных	Нет в наличии	Девять пар самцов крыс на каждую тестовую ситуацию необходимы для каждой группы, знакомых и незнакомых крыс, потому что при таком размере выборки межиндивидуальные вариации, которые могут существовать в частоте зевания, не окажут серьезного влияния на выводы, сделанные на основе статистического анализа, выполненного на основе данных.
Программное обеспечение для работы с электронными таблицами	Microsoft	Недоступно	Excel будет программным обеспечением, используемым для хранения записей зевания, первоначально записанных в технических описаниях. Просмотрите основной текст, чтобы получить инструкции о рекомендуемом способе расшифровки.
Квадратная фильтровальная бумага	Любой производитель	Нет в наличии	Они используются для покрытия дна клетки.
Штативы	Любой производитель	Нет в наличии	Они будут использоваться для крепления видеокамер перед каждой парой клеток для наблюдения.
Деревянный Перевернутый Т-образный стол	Ручная работа	Нет в наличии	Прочтите инструкции в основном тексте, чтобы понять, как его построить. При желании можно использовать другой материал, отличный от дерева. Убедитесь, что любой материал максимально устойчив к прохождению ультразвука, который крысы могут использовать для общения.