Методическая статья

Улучшенное наблюдение за бешенством с помощью прямого быстрого иммуногистохимического теста

10.6K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/59416

⸱

30 апреля 2019 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services, Knoxville, TN, United States Department of Agriculture (USDA), 2Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services, Sutton, MA, United States Department of Agriculture (USDA), 3Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services, Milton, FL, United States Department of Agriculture (USDA), 4Animal and Plant Health Inspection Service (APHIS), Wildlife Services, Concord, NH, United States Department of Agriculture (USDA), 5Lyssa LLC

В этой статье

Краткое содержание

Прямой экспресс-иммуногистохимический тест (DRIT) предлагает Всемирную организацию по охране здоровья животных и Всемирную организацию здравоохранения (OIE/WHO) признанной альтернативой прямому флуоресцентным антителам (DFA) для диагностики бешенства. Этот тест позволяет для полевых приложений, которые могут быть выполнены примерно в 1 ч на мозг впечатления с помощью световой микроскопии.

Аннотация

Лабораторное наблюдение является неотъемлемой частью усилий по профилактике бешенства, борьбе с ним и борьбе с ним. Хотя DFA является золотым стандартом для диагностики бешенства, существует необходимость в проверке дополнительных диагностических методов для улучшения эпиднадзора за бешенством, особенно в развивающихся странах. Здесь мы представляем стандартный протокол для DRIT в качестве альтернативного, лабораторного или полевого тестирования вариант, который использует световую микроскопию по сравнению с DFA. Сенсорные впечатления от мозговой ткани, собранные у подозрительных животных, фиксируются в 10% буферизированном формалине. DRIT использует вирус бешенства конкретных моноклональных или поликлональных антител (конъюгированных биотин), стрептавидин-пероксидаза фермента, и хромоген репортер (например, ацетил 3-амино-9-этилкарбазол) для обнаружения вирусных включений в инфицированных тканях. Примерно в 1 ч образец ткани мозга может быть проверен и интерпретирован DRIT. Оценка мозга подозреваемых животных, протестированных у различных видов в Северной Америке, Азии, Африке и Европе, проиллюстрировала высокую чувствительность и специфичность DRIT, приближающегося к 100% с результатами по сравнению с DFA. С 2005 года, Министерство сельского хозяйства США службы дикой природы (USDA WS) программа провела крупномасштабные расширенные усилия по эпиднадзору за бешенством с использованием DRIT для тестирования . DRIT обеспечивает мощный, экономичный инструмент для диагностики бешенства, который может быть использован лабораториями и полевыми биологами для улучшения текущих программ эпиднадзора за бешенством, профилактики и борьбы с ним во всем мире.

Введение

В то время как DFA является наиболее широко используемым тестом для рутинной диагностики бешенства1, стоимость покупки и поддержания флуоресцентного микроскопа может быть ограничена развивающихся стран2,3,4 и для широкого, крупномасштабных расширенных программ эпиднадзора за бешенством3,4. Кроме того, DFA требует способности хранить образцы во время фиксации и инкубировать образцы выше температуры окружающей среды во время антител-антигенных реакций, которые могут быть значительным препятствием в странах, не имеющих подходящей инфраструктуры. Отчасти из-за ограничений, связанных с современным тестированием DFA, глобальное воздействие бешенства уже давно недооценено5.

В этой связи необходимо утвердить дополнительные диагностические методы для улучшения эпиднадзора за бешенством во всем мире, особенно в развивающихся странах. Представленный здесь протокол DRIT предлагает лабораторную или полевую альтернативу тестированию DFA, которая использует световуюмикроскопию и не требует охлаждения или лабораторной инкубации во время испытания 6. DRIT и DFA похожи в том, что оба метода используют сенсорные впечатления образцов мозга, собранных у потенциально бешеных животных. Тем не менее, первый шаг DRIT использует формалин в качестве исторического фиксатора для образцов, который инактивирует вирус бешенства. Это обеспечивает существенное улучшение биобезопасности по сравнению с ацетоном, используемым для фиксации образцов в протоколе DFA3, что важно не только в лаборатории, но, возможно, даже в большей степени в полевых или децентрализованных лабораторных средах. На сегодняшний день DRIT показывает чувствительность и специфичность, равную DFA2,7,8,9.

С 2005 года программа USDA WS проводит крупномасштабные расширенные усилия по эпиднадзору за бешенством в Северной Америке с использованием DRIT в рамках комплексной программы по борьбе с бешенством в дикой природе10. Усиленный эпиднадзор за бешенством используется в качестве дополнения к наблюдению за общественным здравоохранением на основе воздействия и тесты в первую очередь дикой природы мезо-плотоядных видов, в том числе енотов (Procyon lotor), полосатые скунсы (Мефит мефит), серые лисы ( Urocyon cinereoargenteus), красные лисы (Vulpes vulpes), и койоты (Canis latrans), которые не были вовлечены в воздействие на человека или домашних животных. Туши животных, используемые в тестировании, были представлены USDA WS путем усиления усилий по эпиднадзору за бешенством и включали в себя виды переносчиков бешенства, которые являются: больными или странными действиями; найден мертвым, дорожно-убит, или неприятность; и не связаны с воздействием животных на человека или в домашних животных. DRIT обеспечивает диагностику бешенства, которые могут быть использованы квалифицированных полевых биологов с небольшим или вообще без лабораторного опыта для улучшения эпиднадзора за бешенством и снижения финансовой нагрузки и рабочей нагрузки общественного здравоохранения диагностических лабораторий10. Базовая подготовка DRIT для сотрудников USDA WS, как правило, занимает от 1,5 до 2 дней, что включает в себя примерно 4 ч классной инструкции, охватывающей основные принципы биобезопасности, методы сбора образцов и процессы DRIT, а также лабораторное время проведения теста. Возможности обучения были доступны USDA WS и кооператоров программы через Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC), LYSSA LLC, и Wistar институт.

В стратегических областях управления, USDA WS протестировалболеее более 94000 образцов дикой природы с использованием DRIT и обнаружил более 1850 бешеных образцов, которые, вероятно, остались незамеченными, полагаясь только на воздействие на основе общественного тестирования здоровья подозрительных животных. Расширенные данные эпиднадзора за бешенством, представленные результатами DRIT, имеют решающее значение для обеспечения более полного временного и пространственного представления бешенства на ландшафте в поддержку пероральных программ вакцинации против бешенства для диких животных на протяжении США10, 11. Аналогичным образом, провинциальные агентства дикой природы в Канаде включили DRIT в крупномасштабных усилий по эпиднадзору за бешенством в тандеме со своими программами общественного здравоохранения с успехом8. Оба USDA WS и канадских программ наблюдения DRIT использовали национальные справочные лаборатории для подтверждения бешенства DFA и для выполнения вирусного варианта ввода по мере необходимости8. Кроме того, биологи USDA WS на местах отправляют 10% отрицательных образцов для подтверждения DFA в референтные лаборатории и с 2008 года, участвовали в двухгодичном тестировании на знание DRIT, предоставляемом Лабораторией гигиены штата Висконсин, как часть стандартного меры по обеспечению качества.

Цель этого метода заключается в том, чтобы предложить альтернативный подход к диагностическому тестированию на бешенство, который может быть проведен в децентрализованных лабораториях, на местах или в районах, не имеющих регулярного доступа к электронной микроскопии.

Протокол

Каждый человек, проводящий диагностическое тестирование на бешенство, должен получить стандартную серию предэкспозиционной вакцинации против бешенства и пройти регулярную оценку серологических антител с принеобходимости. Неиммунизированные лица не должны поступать в лаборатории или районы, где ведется такая работа. Все манипуляции с тканями и горками должны проводиться для того, чтобы не аэрозолизировать жидкости и не производить частицы воздушно-капельным путем. Fume вытяжки не требуется, но когда это возможно, они могут обеспечить дополнительную защиту от запахов, эктопаразитов и фрагментов костей. Минимальное индивидуальное защитное оборудование, включая перчатки и защиту глаз, следует носить в любое время во время сбора и тестирования образцов.

1. Коллекция Brainstem

  1. Соберите образцы ствола мозга либо сразу после сбора туши, либо убедитесь, что туши помещаются в морозильные системы для хранения до последующего тестирования. Если туши животных заморожены, оттаивают при температуре окружающей среды до сбора мозгового ствола для удобства сбора. При некоторых обстоятельствах образцы собираются непосредственно у замерзшего животного.
  2. Для животных, которые недавно собраны или были разморожены до температуры окружающей среды, положение животного на спине на плоской поверхности с шейным позвоночником слегка вращается к экзаменатору. Палпате для определения атланто-затылочным суставом на боковом аспекте шейного отдела позвоночника.
    1. Для туш, которые все еще полностью заморожены, положение животного supine, как описано выше, если практично. Используйте пилы, ножи, костные ножницы или аналогичное оборудование, чтобы полностью отделить голову от тела.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Все используемое оборудование, которое не используется одноразовым, должно быть тщательно очищено между образцами.
  3. Используя скальпельное лезвие, сделайте разрез на уровне атланто-затылком сустава в брюшной полости, прорезая все слои мышечной и мягкой ткани, включая трахею и пищевод. Продолжайте до приближения переднего аспекта шейного отдела позвоночника. Для замороженных тканей, используйте скальпель лезвие, чтобы удалить все оставшиеся слои мышц и мягких тканей, чтобы разоблачить foramen magnum.
  4. Переместите голову животного в расширение конечного диапазона до тех пор, пока ствол мозга не будет виден. Используйте скальпель лезвие, чтобы удалить все видимые ствола мозга / центральной нервной системы (ЦНС) ткани для отбора проб. Для замороженных образцов, используйте скальпель лезвие, чтобы удалить как можно больше замороженных ствола мозга / ЦНС ткани, как это возможно изнутри черепа.
  5. Поместите образцы ствола мозга в нерушимый контейнер (т.е. металлическую осину мази, крио-флакон и т.д.) и этикетку соответственно.
  6. Убедитесь, что образцы ствола мозга тестируются сразу после сбора через тест DRIT, охлаждаются (4 кВ) до 24 ч до тестирования, или заморожены (-20 градусов по Цельсию) до момента тестирования, если тестирование будет проходить более 24 ч после сбора образцов.

2. Подготовка материалов для DRIT

  1. Настройка 10 слайд окрашивания блюд (рисунок 1)
    ПРИМЕЧАНИЕ: Окрашивающие блюда достаточно глубокие, чтобы обеспечить полное погружение слайда (диаметр 96 мм, высота 72 мм, глубина 42 мм, объем 250 мл). 6
    1. Заполните блюдо 1 с 10% фосфат буферизированных формалин. Замените формалин после 2 тестовых запусков или еженедельно.
    2. Заполните блюда 2, 4 и 5 фосфатами буферного солья с 1% tween-80 (TPBS). Замените свежим TPBS перед каждым тестом.
    3. Заполните блюдо 3 с перекисью водорода 3%. Замените перекись водорода перед каждым испытанием.
    4. Заполните блюда 6, 8, 9 и 10 дистиллированной или деионизированной водой. Замените воду перед каждым тестом.
    5. Заполните блюдо 7 с рецептуры гематоксилин Gills #2 разбавленным в соотношении 1:1 в дистиллированной воде6. Замените гематоксилин после 2 тестовых забегов или еженедельно.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Согласно первоначальному протоколу DRIT, разработанному CDC12,соотношение 1:2 гематоксилин Джиллс к воде может быть использовано, если контрпотирование слишком темно.
  2. Приготовление амино-этилкарбазола (AEC) акционерного раствора
    1. Используя стеклянную пипетку, поместите 5 мл N,N-диметилформамид в стеклянную емкость.
    2. Добавить одну 20 мг таблетки 3-амино-9-этилкарбаззола и встряхнуть до полного растворения. Пометить банку с "AEC акции" и дата акции было сделано.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Пастовый раствор AEC может храниться в холодильнике (4 кВ) и использоваться в течение 1-2 месяцев.
  3. Подготовка рабочего разбавления АЭК
    1. Добавьте 7 мл буфера ацетата в центрифугу 15 мл.
    2. Используя стеклянную пипетку, добавьте 0,5 мл бульонного раствора AEC в центрифужную трубку.
    3. Добавьте в трубку 0,075 мл перекиси 3% водорода.
    4. Отфильтруйте раствор шприцем 10 мл с помощью фильтра шприца 0,45 мкм.
      ПРИМЕЧАНИЕ: AEC рабочего разбавления должны быть созданы непосредственно перед каждым тестом DRIT, как это только стабильной для 2-3 ч.

3. Прямой экспресс-тест иммуногистохимии

  1. Стеклянный микроскоп этикетки скользит с уникальным номером для каждого образца с помощью мазка-доказательство, водонепроницаемый, постоянный маркер чернил.
    1. С помощью скальпеля лезвие, удалить ствол мозга из контейнера и место на бумажное полотенце. Аккуратно пятно от любого избытка жидкости, крови или меха со вторым бумажным полотенцем, чтобы выявить только ткани стволамозга 13. При необходимости, раздел ткани ствола мозга, чтобы выявить поперечное сечение.
    2. Очень нежно коснитесь микроскопа слайд к поперечному сечению ткани ствола мозга. Коснитесь слайда к стволу мозга в нескольких точках без бокового движения, чтобы несколько областей ствола мозга, которые будут переданы слайд13. Убедитесь, что только 1 или 2 слоя клеток передаются из ткани мозга на слайд с нежным прикосновением. Нет монтажного агента не требуется, чтобы прикрепить ткани ствола мозга к слайдам. Включите как положительный, так и отрицательный контроль в каждом запуске DRIT.
  2. Пусть слайды воздуха сухой в течение примерно 5 минут при комнатной температуре.
  3. Погрузите слайды в 10% буферизированный формалин в течение 10 минут (блюдо 1).
  4. Удалите слайды из формалина и опускайте-промыть в растворе TPBS (блюдо 2).
  5. Погрузите слайды в перекись водорода 3% в течение 10 мин (блюдо 3).
  6. Удалите слайды с перекиси водорода и промыть в свежем TPBS (блюдо 4). После удаления избыточного перекиси водорода, поместите слайды в свежие TPBS (блюдо 5) и работать с одним слайдом в то время как другие слайды остаются погруженными в TPBS.
  7. Возьмите слайды из TPBS (блюдо 5) по одному, стряхните и пятно избыток буфера, и место на увлажненное бумажное полотенце на лабораторной скамейке, в качестве основы "влажности камеры". Используя пипетку, падение достаточно первичного антитела вируса против бешенства на каждом слайде, чтобы покрыть ткани ЦНС. Инкубировать горки в течение 10 минут в камере влажности (т.е., покрывая горки с хорошо пластин или другой простой крышкой, пока они лежат на увлажненных бумажных полотенец) при комнатной температуре (Рисунок 2).
  8. Удалите слайды из камеры влажности, встряхните и смотите избыток конъюгированного, и опускайте-промыть слайды в TPBS (повторное использование того же TPBS в блюде 5).
  9. Работая с одним слайдом в то время как другие остаются погруженным в TPBS - использовать пипетку, чтобы падение достаточно стрептавидин-пероксидаза комплекса для покрытия ткани ЦНС. Инкубировать в камере влажности в течение 10 мин при комнатной температуре.
  10. Удалите слайды из камеры влажности, встряхните и смотите избыточный комплекс и промоучивите слайды в TPBS (блюдо 5).
  11. Работая с одним слайдом в то время, стряхнуть и пятно избыток буфера, в то время как другие остаются погруженным в TPBS - использовать пипетку, чтобы падение достаточно AEC (подготовка объясняется выше и должно быть сделано непосредственно перед использованием) для покрытия ткани ЦНС. Инкубировать в камере влажности в течение 10 мин при комнатной температуре.
  12. Dip-промыть горки в дистиллированной воде (блюдо 6).
  13. Поместите горки в контрпятно Gills Hematoxylin (разбавленный 1:1 с дистиллированной водой) в течение 2 мин (блюдо 7).
  14. Немедленно опустить-промыть все горки в дистиллированной воде (блюдо 8). Повторите два раза с пресной водой каждый раз (блюда 9 и 10).
  15. Работа явившись на одну горку за раз, в то время как другие остаются погруженными в дистиллированную воду (блюдо 10) - встряхнуть и сфолить избыток воды и использовать водорастворимый монтаж среды, чтобы прикрепить крышку скольжения.
  16. Используйте легкий микроскоп с целью 20x для просмотра слайдов и 40x цель, если требуется более тщательный осмотр.

Результаты

Положительные результаты DRIT показывают красные интрацитоплазмические вирусные включения, которые могут варьироваться в форме и размере(Рисунок 3) в цитоплазме голубоватых клеточных тел. Включения выглядят гладкими с очень яркими полями и менее интенсивно окрашенными центральной областью. Интенсивность и распределение антигенов регистрируются при обнаружении включений. Интенсивность оценивается от 4 до 1 евро. Положительный контроль слайд должен иметь интенсивный, вопиющий пурпурный блеск, который называется интенсивностью No 4. Небольшая потеря цвета может произойти особенно, когда обработка образцов не была оптимальной (т.е. образец ткани разложилась немного), и они должны быть оценены как No 3. Заметно скучнопятно оценивается как от 2 до 1, не считается диагностическим для заражения вирусом бешенства и помеченкак неопределенным.

Кроме того, распределение антигенов оценивается от 4 до 1 евро с 4, представляющими распределение антигена, состоящее из обилия больших и малых включений, различающихся по размеру и форме, и присутствует в каждой области (или почти в каждом поле) зрения в ткани ЦНС сенсорный впечатление. Положительный контроль, как правило, имеет распределение антигена No4. Распределение антигена No3 будет назначено при наличии включений в различных размерах в большинстве, но не во всех полях зрения. Если включения обнаружены в 10%-50% полей микроскопа, назначается распределение антигена No2. При обнаружении включений в полях микроскопа No1 назначается распределение антигена No1.

Большинство тканей ЦНС с вирусом бешенства настоящее время экспонат типичных вирусных включений оценивается как интенсивность No 3 или No 4 и антиген распределения. Если результаты указывают на интенсивность 2 или 1 евро или распределение антигена No2 или No1, выборка объявляется «неопределенным» и требуется повторное тестирование. Если один и тот же образец имеет повторный неопределенный результат теста, образец должен быть отправлен в референтную лабораторию для DFA или связанного с ним подтверждаемого тестирования.

Тестовый образец с использованием DRIT считается отрицательным для антигенов вируса бешенства после слайда, содержащего ткани ЦНС был отсканирован при увеличении 200X или больше, и никаких типичных включений вируса не обнаружено (Рисунок 4). Отрицательные образцы экспонат голубоватые тела клеток с небольшим или без неспецифических окрашивания.

figure-results-1
Рисунок 1: Установка 10 слайд окрашивания блюд с реагентами для тестирования. Блюда помечены с реагентом имя в порядке, необходимом для выполнения протокола. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

figure-results-2
Рисунок 2: Простая камера влажности, созданная с мокрым бумажным полотенцем и пластинами культуры клеток.  Простая камера влажности с использованием мокрого бумажного полотенца и пластин ыточной культуры позволяет использовать полевое применение.  Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

figure-results-3
Рисунок 3: Представитель слайды бешенства положительных вирусных включений с интенсивностью No 4 и No 4 антигенраспределения. (A и B) показывают положительные включения бешенства вирусных при 200x увеличение. (C и D) показывают положительные включения бешенства вирусных при 400x увеличение. Шкала баров 5 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

figure-results-4
Рисунок 4: Представитель слайды отрицательных образцов без бешенства вирусных включений. (A и B) показывают образцы отрицательные для бешенства вирусных включений в 200x увеличение. (C и D) показывают образцы отрицательные для бешенства вирусных включений в 400x увеличение. Шкала баров 5 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

figure-results-5
Рисунок 5: Репрезентативные фотографии испытательных объектов DRIT, используемых Министерством сельского хозяйства США WS. (A) Мобильный испытательный центр в закрытом прицепе для транспорта. (B) Рекреационный автомобиль, модернизированный для тестирования DRIT. (C) ИСПЫТАТЕЛЬНЫй центр DRIT совместно с университетской лабораторией. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Обсуждение

DRIT является гибким методом, пригодным для эпиднадзора на местах для выявления наличия вируса бешенства, который может быть использован в децентрализованных лабораторных районах. Хотя можно провести весь тест в полевых условиях, таких как на задней двери грузовика, идеально будет иметь небольшое, крытое пространство, предназначенное для DRIT из-за химических веществ, оборудования и вопросов хранения. Кроме того, необходимо учитывать соблюдение всех применимых федеральных, государственных и местных законов и правил использования и утилизации химических веществ. В настоящее время USDA WS располагает 15 объектами DRIT для тестирования образцов из 17 штатов. Объекты USDA WS DRIT создаются совместно с университетскими и государственными лабораториями общественного здравоохранения, в специально отведенных помещениях в больших помещениях и в закрытых прицепах, которые были модернизированы и переоборудованы в качестве мобильных испытательных установок в случае чрезвычайной вспышки ответ, где расширение тестирования на наблюдение за бешенством с непосредственным временем оборота имеет решающее значение(рисунок 5).

В то время как тест был успешным с использованием ствола мозга материал переменного качества, свежие ткани ствола мозга без разложения тканей является оптимальным. По мере разложения, высыхания или сжижения качество образца снижается, и тест может обнаружить более неспецифические окрашивания, которые могут запутать результаты. Это наблюдение аналогично между DFA и DRIT2. Brainstem /CNS должны быть собраны как можно скорее, а затем хранитьзамороженные (-20 градусов по Цельсию) до тестирования.

Как правило, большинство объектов USDA WS обрабатываются от 12 до 24 слайдов одновременно во время сеанса DRIT, включая один положительный контроль и один отрицательный контроль, который был подтвержден через DFA. Положительные и отрицательные элементы управления обеспечивают точку отсчета для каждого запуска DRIT для обеспечения успешного проведения теста и подтверждения того, возникают ли на тестовых слайдах вопросы с толкованием. Если образец не установлен, чтобы иметь явный положительный или отрицательный результат, он помечен как неопределенный и проверен ы во второй раз DRIT. Если этот образец не является явным положительным или отрицательным после двух drIT-тестов, он отправляется в референтную лабораторию для DFA или связанных с ним испытаний.

Как и в любом диагностическом тесте, «проблема съемки» полезна при неожиданных находках. Например, если drIT-запуск не удался (т.е. положительный контроль не проявляет интенсивности окрашивания и распределения антигенов в размере 3 или 4 евро), убедитесь, что срок действия всех химических веществ и реагентов не истек. Мы обнаружили, используя недавно открытую бутылку перекиси водорода, как минимум один раз в неделю полезно, чтобы помочь предотвратить неспецифические окрашивания через окисление ткани мозга. Кроме того, мы рекомендуем заменять буфер ацетата не реже одного раза в год, как минимум, независимо от срока годности.

Есть ряд преимуществ DRIT над DFA, включая более низкие затраты, способность выполнять тест за пределами централизованной лаборатории, необходимость только световой микроскопии вместо флуоресцентного микроскопа, и относительно простой процесс обучения для люди, управляющие ичитающие тест 2,3,4. Эти преимущества, в сочетании с чувствительностью и специфичность DRIT, которые сопоставимы с DFA2,7,8,9 уже доказали, что тест служит важным инструментом в широком масштабе расширенные программы эпиднадзора за бешенством8,10 в Северной Америке. Кроме того, ДРИТ обладает потенциалом для расширения эпиднадзора и более оперативного тестирования в развивающихся странах или других районах с ограниченными ресурсами, особенно после недавнего руководства МЭЕ/ВОЗ в качестве рекомендуемого теста.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Мы признаем всех сотрудников Службы охраны дикой природы Министерства сельского хозяйства США, которые в настоящее время или ранее собрали расширенные образцы эпиднадзора за бешенством и провели DRIT для диагностики бешенства. Кроме того, мы признаем, многие кооператоры, которые помогают нам с расширенной коллекции по борьбе с бешенством. Мы также благодарим Центры по контролю и профилактике заболеваний и Институт Wistar за доступ к критически важным реагентам, необходимым для проведения DRIT и за предоставление возможностей для обучения. Кроме того, мы высоко ценим подтверждаемую диагностику и техническую помощь, оказываемую Центрами по контролю и профилактике заболеваний и Центром Уодсворта при Департаменте здравоохранения штата Нью-йорк. Использование любых коммерческих продуктов предназначено только для целей сравнения и не является одобрением.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
3-Amino-9-Этилкарбазол (таблетки AEC; 50 штук)Sigma Aldrich (https://www.sigmaaldrich.com/)A6926
Ацетатный буфер, 0,1 мес., 5,2 pH, 32 унцииPoly Scientific R& D Corp. (https://www.polyrnd.com/)s140
Ag Tek MiniScalpel, PN110, Нестерильный #10, 40 в упаковкеPatterson Veterinary (https://www.pattersonvet.com/)PN110Дополнительное оборудование для образцов сенсорных оттисков; Также доступен через Clipper Distributing (http://www.clipperdist.net/)
BD Одноразовый шприц Luer-Lok без иглы, 10 куб. смFisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)14-823-2ABD Номер производителя 309604
Бинокулярный световой микроскоп с головкой Seidentopf или эквивалентНесколько поставщиков
Синий прямоугольный Утилизация с рейтингом ООН Контейнер, 5GBerlin Packaging (https://www.berlinpackaging.com/)1147T01BLUДополнительное оборудование для хранения/утилизации химических отходов (гематоксилин Гилла и раствор AEC)
Corning Квадратное и прямоугольное защитное стекло, 24x60Fisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)12-553-465Corning Номер производителя 2975246
Наконечники для пипеток Corning Universal Fit: штативные, нестерильные (1-200 мкл)Fisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)07-200-300Corning Номер производителя 4863
Falcon 15 мл Конические центрифужные трубки, полипропиленFisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)14-959-70CCorning Номер производителя 352097
Пластины для анализа Falcon 96-Well (крышки планшетов для культивирования тканей)Fisher Scientific (часть Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)08-772-5Corning Номер производителя 353910
Шприцевой фильтр марки Fisher 25 мм, нейлон, 0,45 мм; m, SterileFisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)09-719D
Fisher Chemical Gill Method Окрашивание гематоксилина (Gill-2), 4LFisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)CS401-1D
Fisherbrand Sharps-A-Gator Контейнеры для острых предметов в точках использования, 5 квартFisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)14-827-122Дополнительное оборудование для надлежащей лабораторной установки BSL-2
Фтор-гель с трис-буфером (гель/монтируемая среда), 20 млVWR, часть Avantor (https://vwr.com)102092-122Фтор-гель-заменитель для BioMeda™ Gel-Mount, Формалин для электронной микроскопии Sciences
, буферный, 10%, 4 лFisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)SF100-4Доступно каждый или в случае 4
Gilson Pipetman P200 Pipetman, 50-200 мкм; LDaigger Scientific (https://www.daigger.com)EF9930E
Гидроклон фосфат буферизованный физиологический раствор, 1x раствор, 1 л (PBS)Fisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)SH30256LSМожно использовать альтернативный сухой порошковый продукт
Перекись водорода, 3%Несколько поставщиковЛюбой коммерчески доступный источник, такой как аптечные или магазинные бренды и т. Д.
Объектив для линзового микроскопа 20x и 40xНесколько поставщиков
Lysol IC Quarternary Дезинфицирующий очиститель,1G Daigger Scientific (https://www.daigger.com)EF8481Дополнительные материалы для правильной лабораторной дезинфекции BSL-2
Одноразовый скальпель марки Miltex Размер 22 (альтернативный размер для MiniScalpel)AMD Next (www.amdnext.com)999112314Дополнительное оборудование для пробных оттисков на ощупь; Альтернативный размер Ag Tek MiniScalpel
N,N-диметилформамид, упаковка из янтарного стекла, 500 млFisher Scientific (входит в состав Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)D119-500
Пероксидаза меченый стрептавидин, 50 млSeraCare (https://www.seracare.com/)5550-0001KPL Иммуноферментный анализ и наборы Артикул 71-00-38
Фосфатный буферизованный солевой порошок (альтернатива Жидкость Фишера PBS)Sigma Aldrich (https://www.sigmaaldrich.com/)P3813Необходимо готовить в 1 л дистиллированной воды; Выпускается в количествах 1, 10 и 50 упаковок
Первичное антитело: Поликлональный антинуклеопротеин или коктейль из биотинилированных антителХранить при 4 °deg; C
PYREX Одноразовые серологические пипетки, стекло, стерильные, с заглушкой, Corning, 1,0 млVWR, часть Avantor (https://vwr.com)7078D-1VWR Номер производителя 89091-220
PYREX Одноразовые серологические пипетки, стекло, стерильные, с закупоркой, Corning, 10,0 млVWR, часть Avantor (https://vwr.com)7078D-10VWR Номер производителя 89091-106
PYREX Одноразовые серологические пипетки, стекло, стерильные, с заглушкой, Corning, 5,0 млVWR, часть Avantor (https://vwr.com)7078D-5VWR Номер производителя 89091-484
Richard-Allan Scientific Gills Гематоксилиновое окрашивание No 2, 1PT (альтернатива вышеуказанному)Fisher Scientific (часть Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)22-050-201Thermo Scientific Номер производителя 72504
Держатели слайдов, 24-местноеVWR, часть Avantor (https://vwr.com)25608-868Сакура® Номер поставщика Finetek 4465; Доступно у нескольких поставщиков
Жестяные коробки для образцов, 1/2 унцииVWR, часть Avantor (https://vwr.com)101412-452Дополнительное оборудование для хранения образцов тканей мозга
Taylor 2-Event Digital Timer/ClockMultiple VendorsДополнительное оборудование
Набор для окрашивания слайдов Tissue-TekVWR, часть Avantor (https://vwr.com)25608-902Сакура® Номер поставщика Finetek 4551; Доступно у нескольких поставщиков
TWEEN 80, Полиэтиленгликоль, 500 млSigma Aldrich (https://www.sigmaaldrich.com/)P1754Также доступно в объемах 25 мл, 1 л и 1 Г
VWR Pipette Filler (0,05-100 мл)VWR, часть Avantor (https://vwr.com)53497-055
VWR Мягкие нитриловые смотровые перчатки, L (100 в коробке)VWR, часть Avantor (https://vwr.com)89038-272Дополнительное оборудование для надлежащих СИЗ
Вода, деионизированная (20 л)VWR, часть флаконов Avantor (https://vwr.com)10806-022
Wheaton Clear Glass Sample Флаконы, 8 млFisher Scientific (часть Thermo Fisher Scientific https://www.fishersci.com/us/en/home.html)06-408CDWK Life Sciences Номер производителя 224884
белый налет, предметные стекла для микроскопа с двойным рисунком, 14 ммTekdon Incorporated (https://www.tekdon.com/coated-microscope-slides.html)2-140
Белый прямоугольный контейнер для утилизации по тарифу ООН, 5GBerlin Packaging (https://www.berlinpackaging.com/)1147T01WHTДополнительное оборудование для хранения/утилизации химических отходов (формалин)
против лиссавируса

Ссылки

  1. Dean, D. J., Abelseth, M. K., Atanasiu, P. Laboratory techniques in rabies. Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. 23, World Health Organization. eds 88-89 (1996).
  2. Durr, S., et al. Rabies diagnosis for developing countries. PLOS Neglected Tropical Diseases. 2 (3), e206(2008).
  3. Rupprecht, C., et al. Progress in the development of a direct rapid immunohistochemical test for diagnosing rabies. , (2014).
  4. Rupprecht, C. E., et al. Additional Progress in the Development and Application of a Direct, Rapid Immunohistochemical Test for Rabies Diagnosis. Journal of Veterinary Science. 5 (2), (2018).
  5. Coleman, P. G., Fevre, E. M., Cleaveland, S. Estimating the public health impact of rabies. Emerging Infectious Diseases. 10 (1), 140-142 (2004).
  6. Standard Operating Procedure for the Direct Rapid Immunohistochemistry Test (DRIT) for the detection of rabies virus antigens. , Centers for Disease Control and Prevention. (2016).
  7. Lembo, T., et al. Evaluation of a direct, rapid immunohistochemical test for rabies diagnosis. Emerging Infectious Diseases. 12 (2), 310-313 (2006).
  8. Middel, K., Fehlner-Gardiner, C., Pulham, N., Buchanan, T. Incorporating Direct Rapid Immunohistochemical Testing into Large-Scale Wildlife Rabies Surveillance. Tropical Medicine and Infectious Disease. 2 (3), 21(2017).
  9. Coetzer, A., Sabeta, C. T., Markotter, W., Rupprecht, C. E., Nel, L. H. Comparison of biotinylated monoclonal and polyclonal antibodies in an evaluation of a direct rapid immunohistochemical test for the routine diagnosis of rabies in southern Africa. PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (9), e3189(2014).
  10. Kirby, J., et al. Enhanced Rabies Surveillance to Support Effective Oral Rabies Vaccination of Raccoons in the Eastern United States. Tropical Medicine and Infectious Disease. 2 (3), 34(2017).
  11. Slate, D., et al. Oral rabies vaccination in north america: opportunities, complexities, and challenges. PLOS Neglected Tropical Diseases. 3 (12), e549(2009).
  12. Direct Rapid Immunohistochemistry Test (DRIT) protocols. , Available from: https://rabiessurveillanceblueprint.org/Direct-Rapid-Immunohistochemistry?lang=fr (2019).
  13. Khalid, A., Haque, A. Touch Impression Cytology Versus Frozen Section as Intraoperative Consultation Diagnosis. 2, (2004).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

AEC10TPBS

Похожие статьи